人纤溶酶原kringle 5在大肠杆菌中克隆和分泌表达

构建能够表达分泌性的人纤溶酶原kringle 5(简称hPK-5)的大肠杆菌工程菌。用PCR方法扩增获得hPK-5基因,构建原核表达载体pET-22b(+)/hPK-5,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达并鉴定其免疫学活性。成功表达14kD的重组hPK-5,且约占菌体分泌性蛋白20%以上,经Western Blot分析表明其具有hPK-5的免疫抗原活性。人纤溶酶原kringle 5在大肠杆菌中BL21(DE3)获得可分泌表达。

超高时空分辨蛋白质机器动态成像

蛋白质是生命活动的主要执行者,一切生命活动都有赖于蛋白质功能的正确发挥。蛋白质机器,是指由大量蛋白质和生物分子形成的高维度的、复杂的超级功能复合体,此外也包括蛋白质与蛋白质或其他分子形成的低维度复合物及具有特定生物学功能的蛋白质分子。膜转运和跨膜信号转导是细胞的重要生命活动过程,与细胞命运和功能密切相关。细胞中蛋白质机器是高度动态的,由于组成复杂、功能多样,在分子水平研究蛋白质机器行为机制对成像技术提出了极大的挑战,针对重大生命过程中蛋白质机器动态组装与功能调控的分子机制这一核心科学问题,提出了解决这些难题的工作思路和重点研究内容。从提高成像时空分辨率、实现时空可控和多模态融合入手,发展多种新型成像和关联技术,揭示膜转运和跨膜信号转导等重要生命过程中蛋白质机器的作用机制。提出的主要研究内容包括下一代超高时空分辨结构光照明显微镜、超分辨荧光成像技术和原子力显微镜联用、时间相关的超分辨显微镜与冷冻电镜关联技术。