结肠癌 COLO 耐药株的构建及其与肿瘤干细胞的关系

目的：构建结肠癌 COLO 耐药株，探索其功能特性及其与肿瘤干细胞的关系。方法通过逐渐递增化疗药5-氟尿嘧啶（5-FU）浓度的方法，构建了耐0．10μmol／ml 和0．20μmol／ml 5-FU 的结肠癌 COLO 耐药株各1株，分别命名为 COLO／5-FU-1、COLO／5-FU-2。从增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力、微球体形成能力、干性基因的表达、交叉耐药等方面与亲本结肠癌细胞株 COLO 进行对比。结果在存活检测中，常规培养后第4天，结肠癌耐药株 COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO 细胞的 A 值分别为0．61±0．13、0．54±0．07、0．41±0．09，差异有统计学意义（F ＝63．43，P ＝0．033）。随着耐5-FU 药物浓度的增加，COLO 耐药株的克隆形成率逐渐增强，COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO的克隆形成率依次为（87．6±12．7）％、（65．3±9．7）％、（38．5±7．6）％，差异有统计学意义（F ＝33．64， P ＝0．017）。COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO 每高倍视野中迁移穿过基底膜的细胞数分别为（482±39）个、（434±45）个、（373±38）个，侵袭穿过基底膜的细胞数分别为（174±42）个、（112±31）个、（87±29）个，差异均有统计学意义（F ＝109．61，P ＝0．009；F ＝67．31，P ＝0．032）。与亲本结肠癌细胞株COLO 比较，耐药株表达更高的干性基因，差异有统计学意义（F ＝47．31，P ＝0．042）；且耐药株对其他化疗药如米托蒽醌存在交叉耐药[如给药96 h，米拖蒽醌对亲本 COLO 的抑制率高于 COLO／5-FU-1、COLO／5-FU-2（0．749±0．042、0．423±0．024、0．342±0．018），差异有统计学意义（F ＝12．61，P ＝0．028）]。COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO 细胞的微球体形成率依次为（8．90±0．97）％、（6．20±0．75）％、（3．90±0．32）％，差异有统计学意义（F ＝164．32，P ＝0．006）。结论结肠癌 COLO耐药株有肿瘤干细胞样细胞的特点，是富集了的肿瘤干细胞。