抗氯霉素单克隆抗体的制备及其化学发光酶免疫法的建立

以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-HS-BSA)免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术获得了一株分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP-McAb)的杂交瘤细胞5D7,并对其进行效价、亲和力和特异性测定。结果显示,其分泌的抗体亚类为IgG1,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1∶512,诱生的腹水经纯化后效价为1∶2×105,亲和常数为3.6×108L/mol;应用上述单抗建立的检测氯霉素的化学发光酶免疫分析法(ci-CLIA),其检测范围为0.001μg/L^10μg/L,检出限达0.0025μg/L,IC50为39.6μg/L,且与L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、青霉素、四环素、庆大霉素等的交叉反应率均小于0.01%,可满足我国对水产品中氯霉素残留检测的要求。

氯霉素残留一步式化学发光酶免疫法的建立

【目的】建立一种简便、快速、精确的氯霉素(CAP)残留检测方法。【方法】在常规两步式化学发光酶免疫法(CLEIA)的基础上,同时加入一抗和二抗,并进一步优化抗原包被条件、抗体工作浓度、竞争反应时间等试验参数,建立了检测CAP残留的一步式CLEIA。【结果】该方法最佳检测范围为0.045～128μg/L,检测灵敏度达3.16μg/L,最低检测限为0.01μg/L,可检出国际规定的CAP残留标准底限值以下的残留量。与常规两步法相比,在不影响检测限和灵敏度的前提下,可缩短反应时间1.5h。【结论】采用一步式CLEIA检测CAP残留,与常规两步式CLEIA的检测效果相近,且耗时短,更符合快速检测的要求。

猪IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系的建立

为了解猪体内细胞免疫应答机制,本研究建立猪细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系。以五指山小型猪cDNA为模板,扩增IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的基因保守区,构建相应的重组质粒,并将其作为标准品构建标准曲线。结果显示,各标准曲线的相关系数r值均大于0.990,扩增效率为90%～105%;该检测方法的敏感性较高,IL-4检测下限为1copies/μL,IL-2、IL-10及IFN-γ检测下限达为102copies/μL;重复性较好,批内重复试验与批间重复试验变异系数均小于5%。本研究为病毒感染后猪体内免疫应答等研究提供方法。

检测人细小病毒4的TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立与评价

目的检测血液和原料血浆中人细小病毒4(Parvovirus 4,Parv4)的污染情况,建立Parv4的TaqMan实时荧光定量PCR检测体系。方法将全基因合成的标准品质粒纯化后制备为阳性标准品,从而构建标准曲线并建立检测体系,然后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了Parv4的检测体系,其标准曲线的相关系数r=0.9997。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达10copies/μl;重复性好,批内重复和批间重复的变异系数均小于2%;特异性良好,以水貂肠炎病毒(MEV)和猪细小病毒(PPV)的核酸样品为模板进行检测时结果为阴性。结论本研究建立的基于TaqMan探针的Parv4荧光定量PCR检测方法可以很好地定量检测血液、原料血浆及血液制品中的Parv4,对于保障输血安全及血液制品的病毒安全性具有重要意义。

引水枢纽防沙设计

针对引水枢纽防止推移质泥沙进入取水口问题,提出了由“控制泥沙运动”的三个标准来确定冲沙闸、排沙闸的过流尺寸。因山区河道设置沉沙池的场地有困难,建议采用“水库沉沙,定期排沙”的运行方式,用以防止悬移质中有害粒径泥沙进入进水口,既可代替沉沙池的作用,又可保持日调节库容,并以马边县茶溪水电站引水枢纽防沙设计说明了该方法。

西河水电站引水防沙设计

西河水电站引水防沙设计张启模（四川联合大学）（一）概述西河水电站位于峨边县大渡河支流官料阿中游、坝址上游流域面积为５１７．４ｋｍ２，年径流为６１．２亿ｍ３，多年年平均流量１９．４ｍ３／ｓ。采用引水式开发，设计水头２６０ｍ，发电机组引用流量１８ｍ３／ｓ...

西河水电站设置沉沙池论证分析

西河水电站设置沉沙池论证分析张启模（四川联合大学）西河水电站建设在峨边县官料河中游，装机容量４万千瓦，设计水头２６０米，有压引水，引用流量２０ｍ３／ｓ。官料河属于多泥沙河流，对修建引水式电站是否需设置沉沙池的问题，本文根据泥沙资料和类似工程的实践情况...

四川第一高水头西普水电站设计特点

西普水电站为特高水头电站，设计水头高达８０８．４４ｍ，设计中电站的防排沙、高压钢管结构及软弱基础上的厂房等问题具有一些特点．电站于１９９３年５月建成发电．至今已安全运行两年多。电站单位千瓦投资为２１９４元／ｋＷ，成为省内造价最低的电站。

四川第一高水头西普水电站设计特点

四川第一高水头西普水电站设计特点张启模（四川联合大学）（一）工程概况西普水电站装机容量３台３２００千瓦，设计水头８０８．４４米，为四川省第一高水头的水电站（见封底照片），位于普格县黑水河支流各洛河上。各洛河全长１９．６公里，流域面积９０．２平方公里，...

对股份制若干问题的认识

一、股份制是姓“资”还是姓“社”党的十一届三中全会以来,有些省市相继推出了股份制这一企业改革措施,但在改革过程中几起几落,究其原因,主要是有人认为它是资本主义的东西。实际上,股份制是企业的一种财产组织形式,是社会化大生产和商品经济发展到一定阶段的产物。

不同代次广西巴马小型猪内源性反转录病毒3′UTR克隆及结构和调控元件分析

利用CDNA末端快速扩增技术(RACE)成功扩增了广西巴马小型猪近交系连续4代次及封闭群的猪内源性反转录病毒(PERV)3UTR,共获得8条序列(GenBank登录号分别为:GQ475493、GQ475494、GQ475495、GQ475496、GQ475497、GQ475498、GQ475499、GQ475500),分为638、749bp 2种不同的类型,都属于PERV-A亚型。以PERV-3UTR构建遗传进化树,PERV-A,B,C分群清晰,3UTR可作为PERV亚型区分的另一基因序列。对调控元件定位分析,推测具有749bp类型3UTR的PERV病毒转录水平更高。在所获得序列的209～227bp位置,发现了"CTTGAAACTT"10个碱基的1.9个重复。模拟RNA二级结构,广西巴马小型猪PERV-3UTR 2种类型无论从空间构型、自由能,还是茎环数量都存在明显的不同。这些结果为全面评价广西巴马小型猪来源的PERV病原安全性提供了参考。