男性乙肝病毒感染对精液质量及宫腔内人工授精的影响

HBV感染呈世界性流行,全球约20亿人曾感染HBV,其中2.4亿人为慢性HBV感染者[1]。我国是HBV感染大国,2006年全国乙型肝炎流行病学调查表明,1~59岁一般人群HBsAg携带率为7.18%[2]。

他达拉非联合十一酸睾酮治疗伴有睾酮缺乏的中青年男性ED的临床研究

随着社会的发展，勃起功能障碍（erectile dysfunction，ED）的发病率越来越高。1995年全世界约有1．52亿男性患有ED，而到2025年估计患者数将达到3．22亿。20世纪90年代随着5型磷酸二酯酶（PDE5）抑制剂的研制成功，主要的治疗方式逐渐转变为口服PDE5抑制剂。他达拉非作为新一代PDE5抑制剂，可以显著改善勃起功能，帮助患者成功完成性生活，

腺病毒滴度不同测定方法比较

目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)扩增、纯化后,同时分别用OD260值法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法及CPE法测定病毒滴度,并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准,对各种方法所得结果进行比较研究。结果绿色荧光蛋白标记法、CPE法与壳蛋白免疫法同时测定4种腺病毒滴度,其结果无统计学差异(P>0.1)。荧光定量PCR法测定值明显高于壳蛋白免疫法(P<0.05),但与该法测定结果间存在良好的相关性(r=0.965),约为壳蛋白免疫法所测得结果的10倍。OD260法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性。结论绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法,其结果客观可靠,能真实地反映病毒的实际感染力。荧光定量PCR法测定结果反映的是完整的病毒颗粒数,能够间接反映病毒的感染力,且该方法操作简单,耗时短,同样有较高的实用性。

计算机辅助精液分析精子运动参数在体外受精中的应用

目的探讨计算机辅助精液分析(CASA)相关运动参数与行IVF治疗后正常受精率、卵裂率及优良胚胎率的关系。方法288例患者按受精情况分为正常受精率≥50%组,正常受精率<50%组;根据卵裂情况分为卵裂率≥90%组及卵裂率<90%组;根据优良胚胎形成情况分为优良胚胎形成率≥50%组,优良胚胎形成率<50%组,记录取卵前男方2次精液检查精子运动相关参数的均值,用t检验法确定各组间相关参数的均值是否存在统计学差异,从而判定与试管婴儿正常受精率、卵裂率及优良胚胎形成率相关的精子运动参数。结果正常受精率≥50%组VCL、VAP、ALH值明显高于正常受精率<50%组,差异具有统计学意义(P<0.05);卵裂率≥90%组VCL、VAP值明显高于卵裂率<90%组,差异具有统计学意义(P<0.05);优良胚胎形成率≥50%组与优良胚胎形成率<50%组间VCL、VSL、VAP、LIN、STR、WOB、ALH、BCF均无统计学差异(P>0.05)。结论正常受精率、卵裂率与精子运动能力有关;试管婴儿优良胚胎形成率的大小与精子运动参数无关。

采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库

目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库。方法分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO10,构建轻、重链抗体基因库,然后将轻、重链抗体基因库联合转染293T细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库,随机挑选的克隆经DNA序列分析显示轻、重链库的序列正确性达90%(9/10)和80%(8/10),流式细胞仪分析显示来自轻、重链库的上述克隆各有7个可检测到相应基因在293T细胞表面的表达,可表达抗体库库容量高达7.5×1010。结论 IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,抗体的多样性为下一步筛选特异性抗体奠定良好的基础。

哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建

目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源类风湿关节炎抗体库。方法分离类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长轻链基因和重链可变区基因,分别插入哺乳动物细胞表达载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO-10,分别构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,然后将抗体轻链、重链基因库联合转染293T细胞,用流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建了类风湿关节炎患者来源的IgG1-Kappa型抗体基因库,随机挑选单克隆经DNA序列分析显示轻链库、重链库的序列正确率分别为80%和60%,可表达的抗体库多样性为6.13×1010。结论类风湿关节炎抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,所展示的抗体库具有良好的多样性,能够为下一步筛选特异性抗体奠定基础。

Gluc-Fluc双荧光素酶质粒转染MB49细胞后荧光表达特性

目的利用生物发光成像技术对Gluc-Fluc双荧光素酶质粒转染MB49膀胱癌细胞后双荧光表达量变化特性进行研究。方法用pAAV2neo-Gluc和pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc分别转染MB49细胞,利用荧光照度计来研究双荧光素酶质粒中Gluc、Fluc的特性;利用体外活体成像系统对双荧光素酶质粒Gluc-Fluc转染MB49膀胱癌细胞后荧光表达情况的检测。结果荧光照度计检测结果显示:Gluc随着细胞数的增多或时间的延长,荧光表达量呈相应的增加。Fluc随细胞数目的增多,荧光表达量增加;但随时间的延长,荧光表达量变化不大。体外活体成像结果显示:Gluc-Fluc双荧光素酶质粒已转染入MB49膀胱癌细胞,经过G418加压筛选获得稳定表达的细胞株。结论双荧光素酶基因的构建并未改变Gluc的自身荧光表达特性。转染双荧光素酶质粒的MB49膀胱癌细胞,由于其Fluc在活体成像时的定位优势和Gluc易分泌、检测灵敏度高的定量优势,为后期动态检测肿瘤生长变化以及评价药物治疗效果提供了一个可靠的基石和平台。

气温变化对精液检查结果的影响

目的探讨气温变化对无精子症、极重度少精子症、精液量、精子浓度、精子前向运动、精子总活力、精子存活率的影响。方法对收集的4 194份精液标本,根据检查当天的日平均气温,将所有标本分为5个组:其中日平均气温A组≤15℃、15℃<B组≤20℃、20℃<C组≤25℃、25℃<D组≤30℃、30℃<E组,分别比较各组间无精子症、极重度少精子症(浓度小于1×10~6·m L^(-1))的比例及精液量、精子浓度、精子前向运动、精子总活力、精子存活率是否存在差异。结果 5组间的无精子症比例差异无统计学意义,而D、E两组的极重度少精子症比例明显高于A、B、C 3组(P<0.05)。A组精液量(3.58±1.49)m L最多,E组精液量(3.29±1.50)m L最少,A组精液量显著高于E组(P<0.05),而B、C、D 3组间差异无统计学意义;精子浓度B>A>C>E>D,A、B、C 3组的精子浓度明显高于D、E两组(P<0.05);前向运动精子比率:A>C>B>D>E,A、B、C 3组明显高于D、E两组(P<0.05);精子总活力、精子存活率的比较结果跟前向运动精子比率比较结果类似,均为A、B、C 3组明显高于D、E两组(P<0.05)。结论气温变化对精液质量有明显影响,气温>25℃时极重度少精子症的比例明显升高,气温<15℃时精液量最多,而气温<25℃时,精子的浓度、前向运动、总活力、存活率均明显优于气温大于25℃时。

男性因素宫腔内人工授精临床妊娠率的独立危险因素分析

目的分析男性因素宫腔内人工授精(IUI)临床妊娠率的独立危险因素。方法回顾性分析2013年1月~2018年10月广东省汕头市中心医院收治的966个周期IUI患者的临床资料,探讨女方年龄、男方年龄、不孕年限、促排方案、不孕类型、IUI周期数、处理后前向精子总数等因素与IUI妊娠率的关系。结果单因素分析结果显示,女方年龄、男方年龄、促排方案、不孕类型、IUI周期数对男性因素IUI妊娠率的影响比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不孕年限≤3年的妊娠率高于不孕年限>3年,处理后前向精子总数>107的妊娠率高于处理后前向精子总数≤107,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素分析结果显示,不孕年限≤3年(β=0.459,OR=1.582,95%CI=1.055~2.372)及处理后前向精子总数>107(β=0.671,OR=1.114,95%CI=0.289~1.385)为影响男性因素IUI妊娠率的主要因素(P<0.05)。结论在男性因素IUI中,不孕年限及处理后前向精子总数均是影响临床妊娠率的独立危险因素;而女方年龄、男方年龄、促排方案、不孕类型、IUI周期数则无显著影响作用。

采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库

目的构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库。方法分离膀胱癌患者的外周血单核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,用RT-PCR方法扩增全套IgG1重链可变区(VH)和Kappa型轻链全长(LCκ)基因,经过相应的限制性内切酶酶切后分别插入pDGB-HC-TM载体,分别构建膀胱癌特异性的抗体重链基因库和轻链基因库(一级抗体库)。随机挑取20个单克隆测定抗体基因序列,并瞬时转染FCHO细胞,结合流式细胞仪检测细胞表面抗体的表达。将上述构建好的轻重链基因库通过4片段连接方法插入双表达载体pDGB4,构建二级抗体库,转染FCHO后用流式细胞仪检测细胞表面抗体表达。结果分别成功构建了膀胱癌特异性的重链基因库和轻链基因库,随机挑取的轻重链单克隆各有7个和9个含有正确的抗体基因编码序列,且能展示于哺乳动物细胞表面,理论库容量达到3.32×10^(11)[(1.7×10~6×70%)×(3.1×10~5×90%)]。成功构建了膀胱癌二级抗体库,库容量为9×10~5。结论利用哺乳动物细胞表面展示技术,我们成功构建了膀胱癌特异性的全长人源抗体基因库,一级抗体库的库容量达到3.32×10^(11),二级抗体库库容量达到9×10~5,为下一步筛选特异性、高亲和力抗膀胱癌抗体奠定了基础。

Kartagener综合征伴男性不育的卵泡浆内单精子注射治疗(1例报告及文献复习)

Kartagener综合征（Kartagener＇s syndrome,KS）是一种罕见的常染色体隐性遗传性疾病,又称鼻窦炎-支气管扩张-内脏转位三联征[1]。临床表现主要是以反复呼吸道化脓性感染、咯血为特征的支气管扩张症状、副鼻窦炎、右位心和男性不育。由于这部分男性病人存在精子纤毛超微结构的异常,无法自然妊娠,国内尚无KS患者临床妊娠的病例报告。本病例报告我院1例KS伴全部不动精子的不育患者,

不同季节对宫腔内人工授精结局的影响

目的:探讨不同季节行宫腔内人工授精(IUI)对精液质量、助孕结局的影响。方法:将我中心行宫腔内人工授精的1923周期,按照IUI当天所属的季节分为春、夏、秋、冬4个组,比较4组间IUI日的精液质量及IUI助孕结局。结果:4组间的精液量、总活动精子比例、生化妊娠率、双胎妊娠率比较差异无统计学意义,冬季精子浓度明显高于春季、秋季,而春季、冬季前向运动精子比例明显高于秋季,春季临床妊娠率明显高于秋季,冬季流产率明显高于春季。结论:在本地区春季行IUI可能改善临床结局。

漂流

今年暑假,爸爸带我到杭州双溪进行了一次竹筏漂流,其情景至今仍记忆犹新。记得那天一到渡口,我就兴奋地跳上了一个由十二根大竹竿绑成的竹筏,没想到竹筏马上沉了下去又浮了起来,我一晃,真吓了一大跳!