平邑甜茶发根农杆菌介导转化体系构建与优化

【目的】建立并优化平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd.)幼苗简单、高效、快速的发根农杆菌转化体系。【方法】以不同苗龄的平邑甜茶幼苗为材料,使用携带GFP及GUS过表达质粒的发根农杆菌K599,通过注射法、活化菌液浸染及菌株涂抹方法侵染平邑甜茶根颈部诱导毛状根,利用GFP荧光检测、GFP蛋白印迹检测、DNA检测和GUS染色方法进行转基因株系验证,同时对成功转化株系根、茎、叶组织的表达量进行分析,检测发根农杆菌在转化平邑甜茶株系中的迁移性。【结果】不同苗龄平邑甜茶幼苗诱导毛状根能力具有较大差异,其中三叶龄幼苗诱导毛状根率最高,为96%,五叶龄幼苗最高的毛状根诱导率为65%,以使用菌株涂抹方式转化植株的毛状根分布为最佳、毛状根诱导率为最高。发根农杆菌在成功转化株系中存在随机向地上部迁移的现象,并能够整合目的基因至叶片叶柄及部分主叶脉基因组中,但在培养30 d时无法通过蛋白印迹方式在蛋白水平上检测到蛋白信号。【结论】建立并优化了简单、高效的发根农杆菌介导的平邑甜茶转化体系,鉴定了发根农杆菌在转化株系中随机向地上部迁移规律,为发根农杆菌技术的进一步利用提供理论依据。

海藻酸钠和壳聚糖静电复合弹性支架的制备和表征

通过静电作用和相分离技术制备海藻酸钠/壳聚糖静电复合弹性支架,研究了冷冻温度和固含量对支架材料孔径的影响及组分比对材料力学性能、亲水性、降解性能和生物相容性的影响.固含量为2%（质量分数）及冷冻温度为-24℃时,支架孔径为110~170μm,并且亲水性良好,平衡溶胀度大于1400%.改变固含量和组分比可调控材料的力学性能;循环力学测试表明,湿态支架具有良好的弹性和一定的耐疲劳性;降解速率可由组分比调控;兔脂肪干细胞（rASCs）在支架上的培养结果表明,羧基和氨基摩尔比为2∶1和1∶1时细胞以聚集体存在;羧基和氨基摩尔比为1∶2时细胞黏附于支架上,实现细胞黏附/聚集体的调控.

四氧化三铁纳米粒子表面接枝聚L-谷氨酸苄酯多孔微载体的构建和性能

在氨基化改性的四氧化三铁(Fe_3O_4)纳米粒子表面引发N-羧酸酐L-谷氨酸苄酯(BLG-NCA)开环聚合,制得四氧化三铁/聚L-谷氨酸苄酯(PBLG)复合材料(Fe_3O_4-g-PBLG).改变单体和引发剂比例可以调控Fe_3O_4-g-PBLG的接枝率,采用热失重分析(TGA)测得实际接枝率分别为66.36%,79.66%和89.52%.通过双乳液挥发法制备磁性Fe_3O_4-g-PBLG多孔微载体,其中接枝率为89.52%的微载体密度为1.034 g/m L,孔隙率为92.57%,粒径为200~300μm,孔径为40~50μm,保水率为370%~400%.同时Fe_3O_4-g-PBLG微载体具有超顺磁性,在外加磁场作用下可排布成任意形状,对治疗复杂结构的骨缺损具有显著优势.因此Fe_3O_4-g-PBLG多孔微载体在骨组织工程领域具有潜在应用价值.

臭氧改性碳纤维/聚酰亚胺复合材料的制备与性能研究

采用臭氧氧化的方法对碳纤维进行表面改性,并用作热塑性聚酰亚胺树脂的增强体。采用单丝拉伸试验、XPS研究臭氧处理时间对碳纤维单丝拉伸强度和表面官能团的影响。结果表明,臭氧处理时间越长,碳纤维力学性能的下降程度越大,而表面含氧官能团含量越多。优选单丝拉伸强度保留率较高、含氧官能团含量较丰富的碳纤维与热塑性聚酰亚胺制成复合材料,并评价其层间剪切强度(ILSS)。结果表明,臭氧处理5 min就可使碳纤维/聚酰亚胺复合材料的ILSS提升43%,说明臭氧处理可显著提升碳纤维/热塑性聚酰亚胺的界面性能。

三种苹果砧木在K^+缺乏情况下的生理生长状况分析

K+作为矿质元素中的一种重要的营养元素,参与了苹果树体的许多生理进程并且决定了产量与品质。本试验以苹果砧木平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd)、丽江山定子(Malus rockii Rehd)、小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为材料,研究了三种砧木缺钾乏的生理反应,结果显示低钾处理抑制了三种苹果砧木幼苗的生长,降低了幼苗的生长量、光合速率、叶绿素含量,但三种砧木表现不同,小金海棠在K+缺乏相比于其它两种砧木生长较好,具有较高钾利用效率。

胺解改性聚L-谷氨酸苄酯引导骨再生膜的制备

以聚L-谷氨酸苄酯(PBLG)为原料,通过溶剂浇铸与粒子沥滤法分别构建PBLG单层致密和PBLG单层多孔膜,利用乙醇胺对薄膜表面改性,构筑双层引导骨再生膜.研究了不同胺解改性时间对PBLG-s-PHEG双层膜亲水性和力学性能的影响,结果表明,随着PBLG分子量的增大,薄膜的力学性能增强而降解速率减缓.延长胺解改性时间可提高薄膜亲水性和体内外降解速率.细胞实验结果表明,双层薄膜的致密结构能够有效阻隔成纤维细胞的侵入,多孔结构能够支持细胞贴壁黏附和铺展.体外生物活性评价结果表明,表面改性的PBLG基材料可用于体内骨缺损修复.本文所构建的双层引导骨再生膜在体外具有良好的力学性能和降解性能,与组织具有一定的贴合性,同时可有效阻碍成纤维细胞侵入,具有潜在应用价值.