颅脑损伤与脑血管病变

在法医尸体解剖及鉴定中 ,伴有脑血管病变的颅脑损伤占有相当比例 ,由于其外力大小与后果的不一致性 ,成为法医学鉴定中需要注重的问题。通过对尸检中的此部分病例进行回顾性研究 ,结合文献 ,探讨各类原发和继发性脑血管病变的病理改变和出血机制。

脑缺氧损伤后线粒体途径神经元凋亡

脑缺氧后神经元线粒体损伤不单使细胞发生能量缺失和功能丧失,还可以介导凋亡调节信号,是缺氧损伤后神经元凋亡的一个中心环节。线粒体膜通透性转变,释放细胞色素C活化特定的caspase蛋白酶,使细胞进入不可逆的凋亡程序中;Bcl-2家族促凋亡和抑制凋亡成员之间相互作用,调控细胞色素C释放,调节线粒体介导的凋亡过程。

颅脑损伤后大鼠海马能量代谢相关蛋白表达变化

目的本研究应用差异蛋白质组学技术,研究颅脑损伤后大鼠海马与能量代谢相关蛋白质组差异表达变化情况。方法采用侧方液压冲击装置,建立大鼠中度脑损伤模型,分别取外伤组(n=3)与对照组(n=3)大鼠海马组织总蛋白,通过差异荧光双向凝胶电泳(DIGE)、分离蛋白,获得蛋白质分离图谱,经胶内酶切、抽提酶解肽段、MALDI-TOF/TOF质谱分析差异的蛋白质点,鉴定差异蛋白。结果通过DeCyder5.0及BVA图象分析软件比较,发现有6个参与糖类能量代谢相关的酶类蛋白点表达水平具有显著差异变化。结论颅脑创伤后大鼠海马组织蛋白质表达谱存在差异,并初步鉴定出的脑损伤后与代谢及线粒体作用有关的差异表达,为深入研究颅脑创伤后神经细胞能量代谢变化在损伤后细胞凋亡及对多重细胞和分子水平的级联反应调控提供相关依据。

额部钻孔冲洗虹吸引流术治疗慢性硬膜下血肿(附139例报告)

目的探讨冲洗虹吸引流术治疗慢性硬膜下血肿的手术效果。方法回顾性分析2006年1月-2010年12月收治的139例慢性硬膜下血肿患者,其中男89例,女50例,年龄48～87岁,平均66.4岁。所有患者均经影像学确诊,依据手术方法不同分为3组,即顶部钻孔冲洗引流组(A组,n=47)、顶部钻孔冲洗抽吸引流组(B组,n=41)和额部钻孔冲洗虹吸引流组(C组,n=51)。术后行闭式引流,2～6d后拔管。在治疗前和治疗后第7天对所有患者进行日常生活能力(ADL)评定。术后随访12～36个月,观察治疗效果。结果 3组患者随访期间均无死亡发生。日常生活能力的改善(ADL评分)情况在C组明显优于B组和A组(P<0.05,P<0.01),且B组明显优于A组(P<0.05)。术后复发率在C组(0.02%)明显低于B组(12.19%,P<0.05)和A组(29.79%,P<0.01),且B组明显低于A组(P<0.05)。3组住院时间无明显差异(P>0.05)。结论额部钻孔虹吸冲洗引流术治疗慢性硬膜下血肿疗效确切,复发率低,并发症少,可适用于绝大部分患者。

B细胞淋巴瘤/白血病基因2在颅脑外伤后抗神经元凋亡作用

目的通过研究B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)高表达转基因小鼠和对照小鼠颅脑打击后神经元凋亡的差异,探寻Bcl-2抗凋亡及减轻颅脑损伤的作用。方法将构建的Bcl-2质粒转入C57BL/6J×CBA杂交小鼠的受精卵,培育得到携带Bcl-2的小鼠。Bcl-2转基因小鼠9只作为实验鼠,采用随机数字法分为实验1 d组、实验7 d组和实验14 d组,每组3只。同窝非转基因小鼠9只作为对照鼠,采用随机数字法分为对照1 d组、对照7 d组和对照14 d组,每组3只。采用液压打击法中侧方液压打击的方法,以中等打击力致小鼠中等颅脑外伤。余下3只同窝非转基因小鼠为假手术组,仅打开椎板,暴露硬脊膜,不予打击。分别于术后1、7、14 d处死小鼠,取脑组织切片行苏木精-伊红(H-E)染色,观察神经元变化;采用原位末端标记法(TUNEL)染色计数TUNEL标记的阳性细胞数即凋亡神经元,并计算TUNEL染色切片的积分光密度(IOD)值。结果经聚合酶链反应及Western印迹法检测证明所培育的转基因小鼠为Bcl-2高表达的小鼠。假手术组小鼠脑细胞未见明显变化。实验鼠和对照鼠的脑组织都有出血,结构被破坏,实验鼠的损伤肿胀及出现核固缩或解离的神经元数量少于对照鼠。假手术组小鼠的脑组织未见明显的凋亡神经元细胞。实验鼠和对照鼠的脑组织标本可见TUNEL染色阳性细胞,随时间的推移逐渐增多,在损伤后7 d达到高峰,然后稳定并逐渐减少。实验1 d组、实验7 d组、实验14 d组小鼠的每个光学显微镜高倍镜视野内的TUNEL阳性神经元数(P值分别为0.042、0.039、0.033)和TUNEL染色切片的IOD值(P值均为0.000)均分别显著少于对照1 d组、对照7 d组、对照14 d组。结论 Bcl-2蛋白是中枢神经系统内在的重要的抗凋亡因子,高表达Bcl-2能够抑制颅脑损伤后神经元的凋亡,从而减轻大脑的损害。

大鼠弥散性脑损伤hsp70mRNA表达的研究

目的 寻找脑损伤早期诊断指标。方法 复制大鼠弥漫性脑损伤模型 ,用原位杂交和图象分析技术检测不同损伤时间的大鼠脑干、丘脑、大脑皮层等部位神经元和神经胶质细胞中 hsp70 m RNA表达情况。结果 发现不同损伤时间 ,hsp70 m RNA表达的强弱不同 ;在损伤 5 m in后即可在脑干、丘脑、皮质等部位检测到 hsp70 m R-NA,6 h达高峰 ,12 h后减弱。结论 hsp70 m RNA可以作为早期脑弥散性损伤的指标 ,并可用于生前伤与死后伤的判定。

心脏肌钙蛋白T、I与心肌损伤及其法医学应用前景

心脏肌钙蛋白T、I具有很高的心脏特异性,敏感性高,能检测多种不同的心肌损伤,区别心肌损伤和骨骼肌损伤,并能用作心肌损害的危险程度分级和判断预后的指标,在临床上得到了广泛的应用。在法医学上也有一定的应用前景。

Bcl-2高表达转基因小鼠脊髓损伤后差异表达蛋白的蛋白质组学分析

目的通过建立B细胞淋巴瘤／白血病-2（B—celllymphoma／leukemia-2，Bcl-2）高表达转基因小鼠与野生型小鼠急性脊髓损伤组织的双向电泳图谱，比较蛋白质组的变化和差异表达，初步探讨Bcl-2保护脊髓损伤的分子机制。方法转基因（A组）及同窝非转基因小鼠（B组）各15只，随机分为三组（1d、7d、14d），采用垂直打击（weightdropping，WD）方法，以2．5×3．0g·cm致伤力致伤小鼠脊髓。于术后1d、7d、14d处死，取脊髓标本进行检测：①采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白，建立双向凝胶电泳图谱；②用ImageMaster软件分析图像，基质辅助激光解析电离飞行时间，质谱（MALDl2TOF2MS）分析获取肽质量指纹图谱（PMF）；③用Mascot软件系统和NCBIMS数据库检索确定蛋白质。结果鉴定出差异蛋白质33个，其中1d8个，7d12个，14d13个。与B组小鼠比较，A组小鼠表达上调的蛋白质有热休克蛋白、含缬酪肽蛋白、peroxiredoxin6等，下调的蛋白质为钙蛋白酶、泛素羧基末端水解酶-1等。多数差异蛋白质涉及到应激保护、抗氧自由基损伤、促进神经修复等过程，具有神经保护功能。结论除了抗凋亡作用，Bcl-2蛋白可能还具有抗氧自由基损伤、促进神经修复、加强应激等多方面的神经保护功能。

颅脑损伤法医病理分析

目的 探讨各类颅脑损伤引起死亡的死亡机制 ,为颅脑损伤致死案例的鉴定提供依据。方法 运用常规病理技术、免疫组化染色及特殊染色的方法对 15 7例颅脑损伤案例进行法医病理学研究。结果 颅脑损伤的病理类型具有规律性 ;颅内疾病患者因颅脑损伤死亡的 ,其死亡机制与所患疾病密切相关。结论 颅脑损伤的死亡机制与损伤的病理类型有关 ;疾病相关颅脑损伤致死案例的鉴定 ,应考虑损伤与疾病的参与度。

PPAR-γ在液压脑损伤大鼠皮层的表达

目的通过随机分组研究侧方液压冲击脑损伤大鼠皮层过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator2 activated receptor gamma,PPAR-γ)信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)的早期表达变化。方法雄性SD大鼠12只,随机分为两组:对照组(n=6);液压冲击脑损伤组(n=6),建立侧方液压冲击脑损伤大鼠模型,3 h后通过实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)法检测伤侧皮层PPAR-γmRNA变化。结果侧方液压打击组与对照组比较,PPAR-γmRNA相对表达量明显降低(P<0.05)。结论抑制PPAR-γ的表达,促进炎性因子的释放可能为脑损伤机制之一。

急性创伤昏迷大鼠中脑calpainⅡ、Nach6的表达

目的通过随机分组研究急性创伤昏迷大鼠中脑钙蛋白酶Ⅱ(CalpainⅡ)及电压门控钠通道亚型(Nach6)的早期表达变化。方法雄性SD大鼠12只,随机分为两组:假手术对照组(n=6);急性创伤昏迷组(n=6)。建立急性创伤昏迷大鼠模型,1h后通过实时定量PCR法检测中脑钙蛋白酶Ⅱ及电压门控钠通道亚型(Nach6)变化。结果逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)法结果显示钙蛋白酶Ⅱ在创伤昏迷组的中脑表达相对含量增加(P<0.01),电压门控钠通道亚型(Nach6)在创伤昏迷组的中脑组织表达相对含量增加(P<0.05)。结论急性创伤昏迷早期钙蛋白酶Ⅱ激活、钠离子内流导致中脑神经细胞及胶质细胞损伤可能为急性创伤昏迷早期分子生物学机制之一。

消肿散瘀丸对脑出血大鼠脑组织水肿的影响

目的观察消肿散瘀丸对大鼠脑出血后神经功能缺损评分、脑组织含水量和水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响。方法按照Rosenberg方法建立大鼠脑出血模型,将150只SD雄性大鼠随机分为模型组(n=50)、消肿散瘀丸大剂量治疗组(n=50,消肿散瘀丸悬液40mg/kg灌胃,2次/d)和消肿散瘀丸小剂量治疗组(n=50,消肿散瘀丸悬液20mg/kg灌胃,2次/d),后两组再随机分为术后12h及1、3、7、10d组(n=10)。比较3组大鼠脑出血后神经功能缺损评分、脑组织含水量、AQP4蛋白表达水平的差异。结果与模型组比较,小剂量组术后3、7、10d神经功能缺损评分、脑组织含水量、AQP4蛋白表达水平明显降低,大剂量组术后1、3、7、10d神经功能缺损评分、脑组织含水量、AQP4蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。与小剂量组比较,大剂量组术后7、10d脑组织含水量明显降低,术后3、7、10d神经功能缺损评分,AQP4蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论脑出血后早期给予消肿散瘀丸可使AQP4表达降低,从而减轻细胞内水肿,改善脑出血的预后。

Bc1-2高表达小鼠模型的建立

目的建立Bcl-2高表达的转基因小鼠品系,为在活体动物上研究bcl-2蛋白的功能提供动物模型。方法构建含人Bcl-2基因的质粒;通过显微注射将该质粒转入C57BL/6J×CBA的杂交小鼠的受精卵,并植入假孕母鼠的子宫,PCR检测后携带人Bcl-2基因的小鼠即为"Founder"鼠;将"Founder"鼠与C57BL/6J×CBA杂交小鼠不断回交,经PCR和Western bilotting筛选后即可获得阳性小鼠。结果共获得5只"Founder"鼠,其中#6、#14成功建系,连续回交繁殖7代后,PCR和Western筛选后获得bcl-2高表达阳性小鼠42只。结论成功将人bcl-2基因转入小鼠基因组内,并稳定传代,建立Bcl-2高表达小鼠,为进一步研究Bcl-2蛋白提供了很好的动物模型。

链脲佐菌素糖尿病小鼠睾丸内生精细胞减少与PCNA和Ki67表达降低

目的通过检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Ki67在正常及糖尿病小鼠睾丸组织中表达的差异,探讨糖尿病对生精细胞增殖的影响。方法 30只正常雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组(10只)和糖尿病组(20只)。采用腹腔注射链脲佐菌素的方法建立糖尿病小鼠模型,对照组注射相同体积的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液。造模成功3周后处死动物,取睾丸组织,常规固定、石蜡包埋、切片HE染色观察睾丸组织的形态学变化;免疫组织化学SP法检测PCNA及Ki67在睾丸组织中的表达;图像分析技术分析组织中PCNA及Ki67免疫组织化学表达水平。结果 HE染色显示,糖尿病小鼠睾丸内处于精子发生前半期的生精小管内生精细胞排列疏松,细胞层数偏少,附睾管内精子密度相对较低;免疫组织化学染色显示,PCNA和Ki67在糖尿病小鼠睾丸生精小管中的表达均明显降低。结论高糖可能通过降低生精细胞的增殖进而影响睾丸精子的发生。

颅脑创伤后亚低温脑保护的蛋白质组研究

目的本研究应用差异蛋白质组学技术，探讨亚低温和常温条件下，创伤性颅脑损伤大鼠海马组织蛋白质的表达变化。方法采用侧方液压冲击装置，建立大鼠中度脑损伤模型，亚低温组（n=3）于伤后维持体温（33±0．5）℃持续3h，常温组（n=3）始终维持体温（37±0．5）℃。取大鼠海马组织，通过差异荧光双向凝胶电泳、分离蛋白，获得二维的蛋白质分离图谱，然后通过胶内酶切、抽提酶解肽段、基质辅助激光解吸飞行时间质谱分析差异的蛋白质点，鉴定出变化的蛋白质。结果通过DeCyder5．0（GE Heahhcare）软件分析报告发现差异1．5倍以上的蛋白点17个（P〈0．05）。通过对这些蛋白考染点进行质谱鉴定，鉴定出14个蛋白质，2个为同一种蛋白，实际差异蛋白数为13个。分别是细胞骨架蛋白、介导能量代谢的酶类、参与核酸合成、氧化应激反应的蛋白质、神经突触功能蛋白、细胞内信号传递蛋白及未知蛋白。结论脑损伤后亚低温及常温条件下，大鼠海马组织蛋白质存在表达差异，鉴定出的差异蛋白质可能与亚低温保护效应的潜在作用机制有关。

脑损伤后大鼠海马差异蛋白质组学分析

目的研究脑损伤后大鼠海马组织蛋白质组差异表达变化情况。方法采用侧方液压冲击装置，建立大鼠中度脑损伤模型，分别取外伤组（3只）与假手术组（3只）大鼠海马组织总蛋白，通过差异荧光双向凝胶电泳（DIGE）分离蛋白，获得蛋白质分离图谱，经胶内酶切、抽提酶解肽段、MALDI—TOF／TOF质谱分析研究差异的蛋白质点，鉴定出变化的蛋白质。结果经DeCyder5．0及BVA图像分析软件比较，发现17个蛋白点表达水平具有显著差异变化。鉴定出的蛋白质考染点含有14个蛋白质，2个为同一种蛋白，实际差异蛋白数为13个。依其功能属于细胞骨架蛋白、介导能量代谢的酶类、参与核酸合成及氧化应激反应的蛋白质、神经突触功能蛋白、细胞内信号传递蛋白及未知蛋白。结论脑损伤后大鼠海马组织蛋白质表达谱存在差异，并初步鉴定出脑损伤后差异表达蛋白，为深入研究脑损伤的病理机制奠定基础。

亚低温对脑损伤海马即早基因组表达的影响

目的筛选出亚低温对创伤性颅脑损伤大鼠海马影响的即早差异表达基因。方法采用液压冲击装置，建立大鼠中度颅脑损伤模型。亚低温组（n=3）于伤后维持体温（33±0．5）℃持续3h，常温组（n=3）始终维持体温（37±0．5）℃。采用Affymetrix大鼠全基因组芯片检测两组动物海马基因表达的变化，获取差异表达基因。结果筛选出显著性差异表达（P〈0．01）基因共有133个，其中上调57个，下调76个。结论亚低温对中度颅脑损伤大鼠海马即早基因表达有明显影响，这些差异表达基因可能与亚低温脑保护作用相关。

高泌乳素血症166例分析

目的探讨高泌乳素血症（HPRL）的临床表现、治疗方法及其与泌乳素腺瘤的关系。方法分析同济大学附属东方医院神经外科自2005年1月至2010年1月确诊为HPRL的166例患者临床资料、激素指标，其中4年为回顾性分析，1年为前瞻性研究。结果大部分患者的年龄分布在20-40岁，月经不调是最常见的临床表现，见于141例患者（84．9％）；其次是溢乳，见于114例患者（68．7％）。发病原因中，泌乳素微腺瘤见于62例患者（37.3％），无功能性垂体大腺瘤见于26例患者（15．7％）。泌乳素微腺瘤患者泌乳素水平为（161．2±60．6）ng／mL，和其他任一原因导致的HPRL患者泌乳素水平比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论泌乳素微腺瘤是HPRL最常见的病因，其次为特发性HPIU。单从血清泌乳素的水平并不能确定患者是否一定存在微腺瘤。

脑损伤昏迷大鼠中脑神经组织microRNA表达谱的变化特征

目的检测急性脑损伤昏迷大鼠中脑神经组织中microRNA表达谱的变化特征。方法采用正中液压脑损伤致伤体系，对大鼠进行中等力度致伤，伤后1h取大鼠中脑组织，经RNA抽提检测后，利用表达谱芯片进行检测，扫描杂交结果并对荧光强度进行标准化后行统计分析。结果芯片杂交结果表明，损伤昏迷大鼠中脑节段脑组织中，33种microRNA表达上调，38种microRNA表达下降。结论损伤昏迷大鼠中脑神经组织中microRNA的表达谱出现特征性变化，可能为损伤昏迷的致伤机制，也可能是昏迷保护的神经生物学途径。