JNK通路在AngⅡ所致肾小球足细胞内质网应激性凋亡中的作用

目的研究内质网应激(ERS)在AngⅡ所致肾小球足细胞损伤中的作用及c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路在AngⅡ所致肾小球足细胞凋亡中的促进作用及其特异性抑制剂SP600125的保护。方法足细胞诱导分化,随机分为对照组(N组);AngⅡ组(A组);AngⅡ+SP600125组(A+S组),作用48h后,倒置显微镜下观察足细胞形态变化,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量PCR测定GRP78mRNA、p-JNK mRNA表达,Western blot测定GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达。结果经统计学分析后,A组与N组比较,细胞凋亡率增加,GRP78mRNA、p-JNK mRNA的表达增多,且GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达较N组增多,差异有统计学意义(P<0.05);A+S组足细胞凋亡率、p-JNK mRNA、p-JNK蛋白的表达较A组均有减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高AngⅡ可以在体外诱导足细胞发生凋亡。高AngⅡ诱导足细胞凋亡是由ERS途径所介导的,并通过了JNK途径引起细胞凋亡。JNK途径特异性抑制剂SP600125通过抑制c-Jun氨基末端激酶通路的激活抑制了足细胞的凋亡。

天麦消渴片治疗肥胖伴胰岛素抵抗型多囊卵巢综合征疗效观察

目的:观察新型胰岛素增敏剂天麦消渴片对肥胖伴胰岛素抵抗(IR)型多囊卵巢综合征(PCOS)患者排卵、糖、脂代谢及生殖激素方面的影响。方法:在饮食运动控制基础上应用天麦消渴片治疗肥胖伴胰岛素抵抗型多囊卵巢综合征患者70例,持续12周,采用自身对照法观察患者治疗前、后体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)、空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、相同时间点空腹胰岛素(FINS)、餐后2h胰岛素(PINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、黄体生成激素(LH)、卵泡刺激素(FSH)和睾酮(T)、LH/FSH水平的变化。结果:70例患者中57例(81.4%)月经和排卵功能改善,其中2例(2.85%)妊娠。BMI较治疗前相比有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05),WHR较治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05);FPG、2hPG、FINS、PINS、HbA1c、HOMA-IR较治疗前显著下降(P<0.05);治疗后TC、TG、LDL-C较治疗前显著下降(P<0.05),HDL-C较治疗前显著升高(P<0.05);治疗后LH、T和LH/FSH均显著下降(P<0.05),但FSH无明显变化(P>0.05)。结论:天麦消渴片可通过增加胰岛素敏感性改善胰岛素抵抗,从而改善肥胖伴胰岛素抵抗型多囊卵巢综合征患者异常的糖代谢、脂肪代谢、调节生殖激素水平,恢复排卵功能。

α-硫辛酸对高糖 高同型半胱氨酸诱导的小鼠足细胞凋亡的影响

目的探讨α-硫辛酸对高糖、高同型半胱氨酸(Hcy)作用下小鼠足细胞凋亡及Nephrin mRNA表达的影响。方法将体外培养的足细胞用高糖(25mmol/L)、Hcy(1mmol/L)、α-硫辛酸(0.5mmol/L)干预,分别在干预24、48、72h时收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Nephrin mRNA表达。结果 24h时,高糖组、高Hcy组及混合组未见明显细胞凋亡(P>0.05);48h时,上述3组可见明显的细胞凋亡,且混合组凋亡更加明显(P<0.01);72h时,上述差异更加明显(P<0.01);α-硫辛酸可对抗高糖、高Hcy引起的足细胞凋亡(均P<0.05),且有一定的时间依赖性;高糖、高Hcy环境下,足细胞Nephrin mRNA表达呈下降趋势,且有一定的时效性;α-硫辛酸可对抗上述趋势。结论α-硫辛酸可减弱高糖、高Hcy对足细胞促凋亡作用,还可对抗其下调Nephrin mRNA的表达。

高同型半胱氨酸对小鼠足细胞CD2AP表达的影响

目的观察α-硫辛酸对高同型半胱氨酸(Hcy)作用下小鼠足细胞胞CD2AP mRNA表达的影响,探讨α-硫辛酸对足细胞的保护作用。方法将体外培养的足细胞分为正常组、Hcy组、Hcy+α-硫辛酸组,培养24、48、72h时分别收集细胞,RT-PCR法检测CD2APmRNA表达。结果 Hcy组,足细胞CD2AP mRNA表达自24h开始下调(P<0.05),且有一定的时效性,72h达到下调高峰(P<0.01);Hcy+α-硫辛酸组,48h时,CD2AP mRNA表达较Hcy组增高(P<0.05),72h仍有上述差异(P<0.05)。结论α-硫辛酸对足细胞有一定的保护作用,可能与其可对抗高同型半胱氨酸下CD2AP mRNA表达下调有关。

三种不同降糖方案 治疗新诊2型糖尿病患者的临床疗效研究

2型糖尿病(T2DM)又称成人发病型糖尿病,大多数于35~40岁之后开始发病,占糖尿病总数90%以上,是内分泌系统中主要疾病之一,目前对于T2DM的初始治疗尚无定论,仍主要以控制血糖在标准范围内的传统治疗方法为主[1]。本次研究通过对二甲双胍、二甲双胍联合甘精胰岛素以及门冬胰岛素联合甘精胰岛素三种不同胰岛素治疗方案对治疗T2DM的临床疗效进行了探讨,现报告如下。

硫辛酸对高糖所致小鼠足细胞内质网应激性凋亡的影响

目的：观察条件永生化的小鼠足细胞在高糖及硫辛酸干预环境下，足细胞凋亡率及内质网应激反应（ ERS ）标志分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（ Caspase-12）和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达量，探究足细胞凋亡的发生与内质网应激反应的关系。方法将分化良好的足细胞随机分为：正常葡萄糖浓度对照组（5.6 mmol/L）、甘露醇高渗对照组（25 mmol/L）、高糖组（25 mmol/L）、高糖＋硫辛酸组（25 mmol/L高糖＋500μmol/L硫辛酸）。作用48 h后，流式细胞仪测定各组足细胞凋亡率；实时定量聚合酶链反应（ RT-PCR）技术检测GRP78及Caspase-12 mRNA的表达水平，Western blotting技术检测GRP78及Caspase-12蛋白质表达水平，各组之间凋亡率及GRP78与Caspase-12的mRNA与蛋白的表达量比较采用LSD-t检验。结果（1）流式细胞仪检测各组足细胞凋亡率发现：正常葡萄糖浓度对照组足细胞凋亡率与高渗对照组足细胞凋亡率相似（ P＞0.05）；高糖组足细胞凋亡率较正常葡萄糖浓度对照组明显升高[（14.0±1.1）％比（3.4±0.6）％，t＝9.12，P＜0.05]；高糖＋硫辛酸组足细胞的凋亡率与高糖组相比明显降低[（14.0±1.1）％比（7.8±0.6）％，t＝7.73，P＜0.05]。（2）高糖组GRP78与Caspase-12 mRNA的表达量与正常葡萄糖浓度对照组相比，表达量均明显增加（分别为2.62±0.57比0.85±0.24，10.04±2.28比1.28±0.97， t ＝6.75、25.84，均 P ＜0.05），高糖＋硫辛酸组GRP78与Caspase-12 mRNA的表达量与高糖组相比表达量均明显下降（分别为0.82±0.22比2.62±0.57，4.98±0.55比10.04±2.28，t＝3.83、11.83，均P＜0.05）。（3）高糖组GRP78与Caspase-12蛋白表达量与正常葡萄糖浓度对照组相比明显增加（分别为：2.48±0.19比0.37±0.04，2.07±0.18比0.47±0.08，t＝17.55、12.34，均P＜0.05），高糖＋硫辛酸组GRP78与Caspase-12蛋白质表达量与高糖组相比表达量均明显下降（分别为0.61±0.15比2.48±0.19，0.89±0.18比2.07±0.18，t＝4.42、3.25，均P＜0.05）。结论高糖可以通过引起内质网应激反应诱导足细胞发生凋亡，硫辛酸可以通过减弱内质网应激反应，对足细胞起到保护作用。

高糖、高同型半胱氨酸致足细胞内质网应激时白藜芦醇对CHOP通路的影响

目的观察体外高糖、高同型半胱氨酸(high homocysteine,hHcy)以及高糖和hHcy共同环境下,小鼠肾小球足细胞内质网应激相关蛋白:葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)、转录因子CHOP/GADD153(growth arrest and DNA damage-inducible gene 153)的表达,探讨高糖、hHcy及hHcy和高糖共同诱导足细胞凋亡的内质网应激相关机制,观察抗氧化剂白藜芦醇(Resveratrol,RES)对足细胞的保护作用。方法分化后的条件永生化小鼠足细胞分组:正常对照组、高渗组(glucose 5 mmol/L+甘露醇15 mmol/L)、高糖组(glucose 20 mmol/L)、hHcy组(hHcy 200μmol/L)、hHcy+高糖组(hHcy 200μmol/L+glucose 20 mmol/L)、混合+RES组(RES20μmol/L预干预半小时+hHcy 200μmol/L+glucose 20 mmol/L),作用24 h。流式细胞术AnnexinV-FITC/PI测定各组细胞凋亡率。real-time PCR、Western blot分析各组细胞GRP78、CHOP的表达。结果高糖组与hHcy组的凋亡率、GRP78、CHOP的mRNA及蛋白表达均高于正常组(P<0.05);hHcy+高糖组的上述指标分别与高糖组、hHcy组比较均显著升高(P<0.05);混合+RES组较hHcy+高糖组上述指标显著下降(P<0.05),差异均有统计学意义。结论高糖、hHcy体外能诱导足细胞凋亡,hHcy和高糖共同环境下对足细胞损伤及致凋亡作用更明显,提示两者有协同作用,内质网应激参与其凋亡机制之中,抗氧化剂白藜芦醇能抵抗高糖和hHcy诱导的足细胞凋亡,阻断内质网应激CHOP通路为其机制之一。

白藜芦醇预先干预对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠足细胞内质网应激性凋亡的影响

目的 研究内质网应激及c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）所致肾小球足细胞损伤中的作用及白藜芦醇对其的保护机制.方法 小鼠足细胞诱导分化,随机分为对照组（C组）、高AngⅡ组、白藜芦醇干预（AngⅡ＋Res）组、JNK通路特异抑制剂SP600125干预组,对照组采用RPMI 1640培养,AngⅡ浓度为10-8mol/L,白藜芦醇浓度为20μmol/L,SP600125浓度为20 μmol/L.作用48 h后,倒置显微镜下观察各组足细胞形态,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量聚合酶链反应（PCR）和Western blotting法分别测定葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和磷酸化JNK（p-JNK）mRNA及蛋白的表达.各组间数据比较采用t检验.结果 与对照组相比,AngⅡ组细胞凋亡率升高,GRP78 mRNA、p-JNK mRNA的表达增多（t=9.318、6.063、7.160,均P＜0.05）,且GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达也上调（GRP78蛋白和p-JNK蛋白Ⅰ、Ⅱ条带t=4.116、5.085、5.117,均P＜0.05）.与AngⅡ组相比,AngⅡ＋Res干预组足细胞凋亡率降低,GRP78mRNA、蛋白表达减少（t=14.328、4.530、3.977,均P＜0.05）,p-JNK mRNA、p-JNK蛋白的表达亦减少（mRNA和蛋白Ⅰ、Ⅱ条带t=4.590、4.990、4.991,均P＜0.05）.与AngⅡ组相比,SP600125干预组足细胞凋亡率降低（t=10.756,P＜0.05）,p-JNK mRNA、蛋白的表达亦减少（mRNA和蛋白Ⅰ、Ⅱ条带t=5.408、4.901、4.886,均P＜0.05）.结论 高AngⅡ可在体外诱导足细胞发生凋亡,通过了内质网应激途径,并由JNK通路引起细胞凋亡.白藜芦醇通过抑制内质网应激通路及JNK通路的激活抑制了足细胞的凋亡.

利格列汀联合地特胰岛素对老年2型糖尿病的临床观察

探讨老年2型糖尿病采用利格列汀联合地特胰岛素的临床疗效。方法 选取山西省煤炭中心医院收治的150例老年2型糖尿病患者,随机分为对照组与研究组,两组观察例数均分为75例。对照组睡前给以皮下注射地特胰岛素,研究组联合利格列汀治疗。评估两组疗效与安全性。比较两组治疗前后糖代谢与脂代谢。结果 研究组患者与对照组临床治疗总有效率相比显著升高(P<0.05)。与治疗前比较,两组治疗后血糖与血脂水平显著降低(P<0.05),研究组患者空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、胆固醇等均较对照组显著降低(P<0.05)。研究组与对照组均无不良反应发生。结论 利格列汀联合地特胰岛素治疗老年2型糖尿病具有很高的疗效和安全性,可以有效改善糖脂代谢。