HPLC测定注射用头孢他啶中的有关物质

目的采用HPLC法测定注射用头孢他啶中的有关物质。方法采用ShiseidoSPOLARC18色谱柱（4．6mm×250mm，5um），以磷酸盐缓冲溶液（取磷酸氢二钠3．6g，磷酸二氢钾1．4g，加水溶解并稀释至1000mL，用10％磷酸溶液调节pH至4．0）和乙腈分别为流动相A和流动相B进行梯度洗脱，柱温40℃，流速1．0mL／min，紫外检测波长254nm。结果头孢他啶检测限为0．4272ng（S／N=3），从头孢他啶样品中共分离出21个杂质，且21个杂质问具有良好的分离度。头孢他啶在0．44017．580ug／mL范围内与峰面积具有良好的线性关系（r2=0．9998），有关物质的限量控制在2．0％以下。结论所建方法专属性强、准确、简便、快速，适用于注射用头孢他啶中有关物质的检查。

医院制剂苯甲酸水杨酸软膏中主药含量检测方法改进

目的采用RP-HPLC法同时测定苯甲酸水杨酸软膏中苯甲酸和水杨酸的含量。方法采用Kromasil C18色谱柱,以甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶1）为流动相,检测波长：270nm,流速：1.0mL·min^-1,柱温：30℃。结果苯甲酸、水杨酸分别在122.2～1221.6μg·mL^-1、59.8～598.0μg·mL^-1范围内具有良好的线性关系（r=0.9998）;回收率分别为99.2%、99.6%,RSD分别为0.6%、0.4%。结论本法经方法学验证可用于苯甲酸水杨酸软膏中主要成分的含量测定,可作为该医院制剂质量标准修订的依据。

HPLC测定利可君片的主药含量

采用高效液相色谱法测定利可君片中主药的含量。采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱（4.6×250 mm,5μm）,流动相为磷酸二氢钾缓冲液（称取磷酸二氢钾1.36 g,加水溶解并稀释至1000 m L,用磷酸调节p H值至3.0）-乙腈（60∶40）,柱温35℃,流速1.0 m L·min-1,检测波长210 nm,进样量20μL。利可君在10.01~250.2μg·m L-1浓度范围内有良好的线性关系（相关系数r=1）,平均回收率为100.45%。利可君溶液在室温下不稳定,应临用新制。所建方法专属性好、准确、快捷,适用于利可君片的含量测定。

基于HILIC-MS/MS法同时测定干细胞治疗产品中肾上腺素和利多卡因

目的:建立亲水相互作用色谱-三重四极杆质谱法(HILIC-MS/MS)测定干细胞治疗产品中肾上腺素和利多卡因。方法:采用Waters ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);以水-乙腈(95∶5,含有0.1%甲酸)为流动相A,水-乙腈(15∶85,含有0.1%甲酸)为流动相B,梯度洗脱;柱温30℃;流速0.4 ml·min^(-1);选用多反应监测(MRM)模式进行定量分析。结果:肾上腺素在0.0534-10.68 ng·ml^(-1)范围内呈良好的线性关系(r=0.9981);平均回收率为99.5%,RSD为11.2%(n=9);精密度RSD小于5%;检出限为0.0160 ng·ml^(-1)。利多卡因在0.0139-1.387 ng·ml^(-1)(r=0.9995)和13.87-485.52 ng·ml^(-1)(r=0.9967)范围内呈良好的线性关系;平均回收率为100.5%,RSD为6.7%(n=9);精密度RSD小于5%;检出限为0.00332 ng·ml^(-1)。结论:所建方法操作简便、选择性好、灵敏度高,适用于干细胞治疗产品中肾上腺素和利多卡因的测定。

超高效液相色谱串联质谱法测定重组胶原蛋白中氨苄西林残留

目的:建立超高效液相色谱串联质谱法测定重组胶原蛋白中氨苄西林残留分析方法。方法:采用Shimadzu Shimpack VeloxS P-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水为流动相A,以乙腈为流动相B进行梯度洗脱,柱温:40℃,流速为0.4 ml·min^(-1),选用多反应监测(MRM)模式进行定量分析。结果:氨苄西林在0.05~100 ng·ml^(-1)范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为97.6%,RSD为3.6%(n=9);方法检出限为0.015 ng·ml^(-1),定量限为0.05 ng·ml^(-1)。结论:所建方法操作简便,选择性好,灵敏度高,适用于重组胶原蛋白中氨苄西林的测定。

二维超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术鉴定氯化琥珀胆碱原料药中的杂质

目的:建立鉴定氯化琥珀胆碱原料药中杂质的方法。方法:采用二维超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术。一维色谱柱为Hypersil GOLD C_(18),以缓冲液(含22 mmol/L戊烷磺酸钠+50 mmol/L氯化钠+5 mmol/L硫酸)为流动相A,以乙腈为流动相B,流动相A、B的体积比为95∶5,柱温为40℃,流速为1.0 m L/min,检测波长为214 nm;二维色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C_(18),以0.1%氨水为流动相A,以乙腈为流动相B,采用梯度洗脱,柱温为30℃,流速为0.4 m L/min;离子化模式为ESI+,毛细管电压为2.5 k V,离子源温度为120℃,雾化气温度为450℃,雾化气流速为900 L/h,采集模式为MSE。结果:通过一维液相色谱在氯化琥珀胆碱原料药中检出琥珀酸、琥珀酰氯(工艺中间体)及吡啶(试剂)等杂质;另有4个比较明显的未知杂质,分别命名为杂质1、杂质2、杂质3、杂质4,其中尤以杂质2的表观含量最高。通过二维液相色谱质谱联用法推断杂质2为脱氢琥珀酰单胆碱,杂质4为氯化琥珀酰单胆碱,杂质1、杂质3在质谱中均未被检测到信号。结论:本研究建立了鉴定氯化琥珀胆碱原料药中杂质的方法,其研究结果可用于评价氯化琥珀胆碱原料药的质量。

盐酸倍他司汀片加热降解杂质的定性检测

建立了盐酸倍他司汀片加热降解杂质的定性检测方法。样品粉末105℃下加热4 h后,用流动相溶解,滤过后采用二维液质联用(2D-LCMS-IT-TOF)杂质鉴定系统,对盐酸倍他司汀热降解杂质进行定性检查。结果表明:热降解杂质1和杂质2在质谱上没有响应。通过样品信息和多级高分辨质谱结果推断出杂质3可能的分子式,并推导其可能的质谱裂解规律,给出其可能的结构式。结论本法准确、简便、快速,可用于盐酸倍他司汀热降解杂质定性检查。

HPLC测定佐米曲普坦中的有关物质

目的采用HPLC法测定佐米曲普坦中的有关物质。方法采用Waters Symmetry shieldTMC18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为磷酸二氢钾缓冲溶液(取6.8 g磷酸二氢钾、1.01 g庚烷磺酸钠,加水溶解并稀释至1 L,用三乙胺调pH6)-乙腈(82∶18),流速1.0 mL.min-1,在波长224 nm处采用不加校正因子的主成分自身对照法对其有关物质进行检查。结果佐米曲普坦的检测限为0.109 ng(S/N=3),杂质与主成分能完全分离,有关物质的限量控制在0.5%以下。结论所用方法专属性强、准确、简便、快速,适用于佐米曲普坦中有关物质的检查。

盐酸倍他司汀片有关物质检测方法研究

目的：建立测定盐酸倍他司汀片中乙烯吡啶、2-羟乙基吡啶、N-甲基-2吡啶乙胺等有关物质的检查方法。方法：采用高效液相色谱法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以缓冲液（称取醋酸铵0.69 g,用1 000 m L水溶解,以冰醋酸调节p H至4.7后,再加4.43 g十二烷基硫酸钠溶解,脱气）-乙腈（60∶40）为流动相,流速1.0 m L·min^-1,检测波长259 nm,柱温40℃。结果：各杂质与主成分能完全分离,乙烯吡啶、2-羟乙基吡啶、N-甲基-2吡啶乙胺最低检测限（S/N=3）分别为0.4、0.4、4 ng,回收率分别为97.9%、98.1%、101.7%,浓度与峰面积均呈线性（r〉0.999）。4个生产企业119批样品检验,共检出已知杂质2个（2-羟乙基吡啶、N-甲基-2吡啶乙胺）及未知杂质6个,各批次间检查的杂质个数及杂质量不同：2-羟乙基吡啶、N-甲基-2吡啶乙胺含量分别为0.005%-0.47%、0.040%-1.26%,总杂质量在0.2%-5.3%范围内。结论：本文建立的方法符合方法学验证要求,可用于盐酸倍他司汀有关物质检查。根据样品检测结果,建议将总杂质量定为2%。

基于连续流动注射安培法定量检测多糖蛋白结合疫苗中氰化物的残留量

目的 建立基于连续流动注射安培法的多糖蛋白结合疫苗中氰化物残留量的检测方法,并进行验证。方法 超滤法去除样品中的大分子物质后,采用3700全自动化学分析仪检测氰化物残留量,进样时间为:35 s;进样体积为:200μL;泵速为:40%;样品周期时间为:140 s;紫外波长为:312 nm;安培检测器。验证方法的专属性、基质效应、线性范围、检出限、定量限、准确性、精密性及稳定性。采用建立的方法检测5个厂家生产的b型流感嗜血杆菌结合疫苗及A群C群脑膜炎球菌结合疫苗多糖衍生物原液(13批)、结合物原液(21批)中氰化物残留量。结果 空白样品对检测无干扰;b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖衍生物和结合物原液、A群C群脑膜炎球菌结合疫苗多糖衍生物和结合物原液基质效应溶液的回收率分别为97.4%、102.4%、96.8%、99.8%,CV均<15%;氰基浓度在0.312 5~80 ng/mL范围内,与峰高呈良好的线性关系,回归方程为:y=133.13 x+57.556,R^(2)=0.999 1;检出限为0.2 ng/mL,定量限为0.6 ng/mL;加入氰基浓度为5、10、20 ng/mL对照溶液样品的回收率均值分别为108.9%、106.5%、103.5%,RSD为6.4%;精密性验证的CV均<15%;氰基浓度为80、40、20、5 ng/mL的对照溶液连续进样20针的平均浓度分别为76、38、18、5 ng/mL,CV均<15%。13批多糖衍生物原液样品均有检出氰化物残留,21批结合物原液样品中2批未检出,其他均有检出。结论 本研究建立的方法具有良好的准确性、精密性及稳定性,可应用于多糖蛋白结合疫苗中氰化物残留量的定量检测。

UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析人血白蛋白及人免疫球蛋白中非目标蛋白成分

目的采用超高效液相色谱-串联线性离子阱-轨道阱组合高分辨质谱技术对人血白蛋白及人免疫球蛋白中非目标蛋白成分进行定性分析。方法采用ACQUITY UPLC peptide BEH C_(18)(300Å,1.7μm,2.1 mm×100 mm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,质谱采用Full MS/dd-MS^(2)(TopN)扫描模式。结果从人血白蛋白及人免疫球蛋白中共鉴定出非目标蛋白52个,其中人血白蛋白样本中鉴定非目标蛋白25个,人免疫球蛋白样本中鉴定非目标蛋白27个。结论建立的定性方法可快速、准确、系统地识别出人血白蛋白及人免疫球蛋白中多种蛋白,为该类制剂质量控制及进一步的临床应用提供参考。

头孢他啶杂质H研究

目的:对国产头孢他啶中共有的杂质H进行研究。方法:制备液相色谱采用Phenomenex Luna C18柱(150 mm×21.2 mm,5μm),流动相A为醋酸盐缓冲液(20 mmol·L-1醋酸铵,用醋酸调节pH为4.0),流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速15 mL·min-1,柱温为室温。收集目标物冻干后利用紫外光谱、红外光谱、质谱、核磁共振对头孢他啶杂质H进行结构确认;并利用斑马鱼模式生物比较头孢他啶及其杂质H的胚胎发育毒性。结果:通过实验证实头孢他啶杂质H的结构为(6R,7R)-7-[[(2-氨基-1,3,4-噻唑-4-基)-2-(1-甲氧基2-甲基-1-氧代内烷-2-基)氧亚氨乙酰]氨基]-8-氧代-3-(吡啶-1-鎓-1-基-甲基)-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸;头孢他啶杂质H在斑马鱼胚胎毒性实验中的致畸作用是头孢他啶的25倍、致死作用是头孢他啶的8倍。结论:头孢他啶杂质H应予以严格控制。

基于WHO疫苗国家监管体系评估等标准和指南要求对OOS分析工作的思考

随着我国通过世界卫生组织(WHO)疫苗国家监管体系(NRA)评估,以及疫苗批签发能力建设的不断推进,越来越多的省级药品检验机构陆续加入疫苗批签发体系。本文基于WHO疫苗NRA评估要求,结合国际上疫苗相关主要法规或指南,探讨疫苗及药品检验结果超标(OOS)分析工作中需要重点关注和易混淆的内容,以期对相关人员开展工作有所启示。

静注人免疫球蛋白生产工艺中活化凝血因子Ⅺ的形成与去除

目的调查活化凝血因子Ⅺ(activated coagulation factorⅪ,FⅪa)在静注人免疫球蛋白各个生产环节中的分布及含量,分析其在生产过程中的主要形成过程、去除过程及其影响因素。方法采用底物显色法对合并血浆、组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ(fractionⅠ+Ⅱ+Ⅲ,FⅠ+Ⅱ+Ⅲ)上清液、FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液、FⅠ+Ⅲ沉淀溶解液、FⅠ+Ⅲ上清液、FⅡ沉淀溶解液、FⅡ精制滤过液以及超滤配制后、低pH孵放后制品的FⅪa含量进行检测。添加硅藻土对合并血浆的FⅪ进行激活,将FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液采用双层滤纸过滤或离心进行FⅪa去除。结果FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离阶段合并血浆FⅪ被激活形成FⅪa,其激活量为合并血浆的2500倍。FⅠ+Ⅲ分离阶段可去除合并血浆FⅪ活化后形成的约99.8%的FⅪa。结论FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离阶段为FⅪa形成的主要阶段,该阶段硅藻土启动内源性凝血途径形成FⅪa;FⅠ+Ⅲ分离阶段为FⅪa去除的主要阶段,该阶段废弃吸附了FⅪa的硅藻土以去除工艺中形成的FⅪa;硅藻土为FⅪa形成与去除的主要影响因素。

离子色谱法测定氯化琥珀胆碱原料及注射液中的氯化胆碱和氯化琥珀酰单胆碱

目的采用离子色谱法测定氯化琥珀胆碱原料及注射液中的氯化胆碱和氯化琥珀酰单胆碱。方法采用Dionex RFICTM Ionpac CS17色谱柱(4 mm×250 mm),以甲烷磺酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),采用抑制电导检测器进行测定。结果氯化胆碱、氯化琥珀酰单胆碱浓度分别在18.0～562.8μg·m L^(-1)(r=0.999 9)和14.4～449.8μg·mL^(-1)(r=0.999 9)内线性关系良好,定量限均为0.01μg·mL^(-1)。原料中氯化胆碱、氯化琥珀酰单胆碱回收率分别为103.4%～105.7%和102.4%～107.1%;注射液中氯化胆碱、氯化琥珀酰单胆碱回收率分别为95.6%～100.2%和94.4%～103.5%。结论该方法专属性强、准确、简便、快速,适用于氯化琥珀胆碱原料及制剂中的有关物质测定。

超高效液相色谱-串联质谱法测定禽蛋中2种色素残留

目的建立测定禽蛋中斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯残留的定性和定量方法。方法采用固相萃取技术处理样品,通过超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)对禽蛋中的斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯进行分离和检测,通过考察方法的检测限、精密度、回收率等指标对方法学进行验证。结果斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯的检测限分别为1、10μg/kg,回收率在72.2%~91.9%之间,RSD在4.6%~7.1%(n=5)之间。结论本法准确、快速、灵敏度高,可对禽蛋中斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯残留进行快速分析。

不同厂家盐酸倍他司汀片溶出度考察

目的对4个厂家生产的盐酸倍他司汀片的溶出度进行考察比较,并探讨各厂家生产的盐酸倍他司汀片的质量差异。方法采用小杯法,以盐酸溶液(9→1 000)250 m L为溶出介质,分别考察了50r·min-1和75r·min-1,用吸收系数法测定不同时间点的溶出量,对不同厂家生产的盐酸倍他司汀片的溶出速率曲线进行分析和比较。结果各厂家产品溶出行为差别较大,产品质量存在差异。结论不同厂家的盐酸倍他司汀片溶出度存在显著差异,有必要建立盐酸倍他司汀片溶出度检查方法,并对市售产品进行溶出度检查,从而控制药品质量,保证临床用药的有效性。

HPLC测定氢溴酸加兰他敏中的有关物质

目的采用HPLC法测定氢溴酸加兰他敏中的有关物质。方法采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为磷酸盐缓冲液(磷酸调pH6.5)-乙腈(95∶5),流动相B为磷酸盐缓冲液(磷酸调pH6.5)-乙腈(40∶60),梯度洗脱,柱温55℃,流速1.0 m L·min-1,检测波长230 nm。结果各杂质与主成分能完全分离,N-去甲加兰他敏、O-去甲加兰他敏、N-氧化加兰他敏、力克拉敏、表-加兰他敏的最低检测限分别为0.6、0.6、0.6、0.6、0.7 ng(S/N=3),回收率分别为96.7%、96.7%、99.4%、99.5%、97.6%,在给定的浓度范围内与峰面积的线性关系良好(r>0.999)。结论所用方法专属性强、准确、简便、快速,适用于氢溴酸加兰他敏中有关物质的检查。

电感耦合等离子体质谱法检测吸附破伤风疫苗及预灌封注射器包装中的多元素残留量

目的 采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定吸附破伤风疫苗及预灌封注射器包装中的23种元素残留量。方法 样品经1%硝酸稀释后直接进样,对ICP-MS的参数进行调谐优化后,利用在线内标法,消除基质干扰,测定吸附破伤风疫苗及包装系统中Li、B、Mg、Si、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Zn、Cu、As、Ba、Sb、Sn、Pb、Cd、W、Ce、Hg等23种元素的残留量,并进行方法学验证。结果 所用方法的相关系数在对应的浓度范围内线性关系良好(r>0.9900),各元素的平均加样回收率为90.4%~105.9%,RSDs为0~4.57%(n=9)。结论 所用方法简便、快速、准确,可用于测定吸附破伤风疫苗及包装系统中23种元素的含量。