天麻抗真菌蛋白基因转化辣椒的研究

为获取辣椒的抗真菌种质资源,运用RT-PCR技术扩增出GAFP的cDNA序列,通过基因工程技术构建植物表达载体pBI121-GAFP,并导入遵椒1号辣椒。转化后再生的植株经PCR检测,初步证实GAFP基因已经整合到辣椒基因组中,得到了GAFP基因转化遵椒1号辣椒植株。

天麻抗真菌蛋白基因转化辣椒的研究

为获取辣椒的抗真菌种质资源，运用RT-PCR技术扩增出GAFP的cDNA序列，通过基因工程技术构建植物表达载体pB1121-GAFP，并导入遵椒1号辣椒。转化后再生的植株经PCR检测，初步证实GAFP基因已经整合到辣椒基因组中，得到了GAFP基因转化遵椒1号辣椒植株。

体外实验观察微泡-阳离子纳米脂质体复合物促进HGF基因转染

目的通过生物素-亲和素的特异结合,制备一种高效载肝细胞生长因子(HGF)基因的脂质微泡(LMB)-阳离子纳米脂质体复合物(LMB-CNLP),观察转染情况,探讨其对对数生长期的肝星状细胞株HSC-T6活性的影响。方法将HSC-T6细胞分为载HGF基因的LMB组、LMB-CNLP组和对照组(单纯质粒),超声辐照各组进行HGF转染。以荧光显微镜及流式细胞仪观测转染情况,ELISA试剂盒检测HGF蛋白表达情况,流式细胞仪检测HSC-T6细胞凋亡。结果 LMB-CNLP组HGF基因的转染率为41.29%,明显高于其他2组。转染后的细胞能持续表达HGF,且随着HGF蛋白增多,HSC-T6细胞凋亡率增高。结论超声辐照LMB-CNLP复合物能提高HGF基因在体外培养的HSC-T6细胞中的转染情况,促进HSC-T6凋亡,为基因治疗肝纤维化提供实验依据。

转基因辣椒离体子叶再生研究

探讨了不同浓度植物高活性制剂LCI、AA、GA3和NAA等对遵椒1号不定芽的诱导、伸长和生根各个阶段的影响。结果表明,最佳不定芽诱导分化培养基为：MS＋LC 1.0 mg/L＋IAA 0.1 mg/L＋ABA 0.3 mg/L＋Spm 100μmol/L＋AgNO35 mg/L＋PD 6 mL/L（pH 5.8-6.0）;最佳不定芽伸长培养基为：MS＋LC 0.1 mg/L＋IAA 0.2 mg/L＋GA31.0 mg/L＋Spm 100μmol/L＋AgNO35 mg/L＋PD 6 mL/L（pH 5.8~6.0）;最佳生根培养基为：1/2MS＋IAA 1.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L（pH 5.8-6.0）。

天麻抗真菌蛋白cDNA克隆及植物表达载体的构建

采用RT-PCR技术扩增出天麻抗真菌蛋白(Gastrodia antifungal protein,GAFP)的cDNA序列,通过pGM-T载体转入大肠杆菌JM109克隆,在培养基上筛选重组质粒酶切鉴定,阳性克隆经限制性内切酶Xba1和Sac1酶切与同样酶切的植物表达载体pBI121连接,构建天麻抗真菌蛋白(GAFP)的植物表达载体pBI121-GAFP。结果,天麻抗真菌蛋白(GAFP)的植物表达载体构建成功。