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Eps8抗原HLA-A* 0201限制性CTL表位的预测和鉴定
1
作者
杜静文
王雨馨
+5 位作者
周炜均
姜春俊
谢晓灵
张宏毫
贺艳杰
李玉华
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期865-872,共8页
目的:寻找并鉴定肿瘤相关抗原Eps8来源的HLA-A*0201限制性CTL表位,为临床开展基于Eps8表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法:通过在线生物学软件从C-末端酶切位点、MHC-I类分子结合力及TAP转运效率3个方面初步预测Eps8抗原的HLA-A*0201...
目的:寻找并鉴定肿瘤相关抗原Eps8来源的HLA-A*0201限制性CTL表位,为临床开展基于Eps8表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法:通过在线生物学软件从C-末端酶切位点、MHC-I类分子结合力及TAP转运效率3个方面初步预测Eps8抗原的HLA-A*0201限制性CTL表位,通过肽/MHC分子结合力及肽/MHC分子复合物稳定性实验初步验证预测结果,利用酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immuospot assay,ELISPOT)方法检测候选表位刺激健康志愿者外周血单个核细胞(PBMNC)分泌IFN-γ的能力,以及LDH细胞毒实验验证其体外杀伤肿瘤细胞的功能,最后在HLA-A*0201/Kb转基因小鼠中检测候选表位的体内免疫功能。结果:通过在线生物学软件筛选得到4个候选表位。结合力实验结果显示,p360-368具有高结合力,p101-109、p276-284具有中等结合力。稳定性实验结果显示,该3个表位的DC50均大于8 h。LDH细胞毒实验中p101-109、p276-284、p360-368都能诱导产生特异性CTL,对靶细胞具有显著的杀伤效应,还能提高效应细胞分泌IFN-γ的水平。在HLA-A*0201/Kb转基因小鼠体内免疫功能检测中同样证实该Eps8抗原表位能产生强烈的免疫应答。结论:天然表位p101-109、p276-284、p360-368可能是Eps8抗原HLA-A*0201限制性CTL表位。
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关键词
Eps8
肿瘤相关抗原
多肽疫苗
表位
下载PDF
职称材料
Eps8抗原改造表位HLA-A*0201限制性抗肿瘤能力观察
2
作者
姜春俊
周炜均
+4 位作者
谢晓灵
杜静文
张宏毫
贺艳杰
李玉华
《山东医药》
CAS
北大核心
2016年第26期1-5,共5页
目的观察人表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)抗原改造表位是否有人白细胞抗原A(HLA-A)*0201限制性抗肿瘤能力。方法替换Eps8抗原锚定位点氨基酸获得改造肽,用BIMAS、SYFPEITHI在线数据库及Aotodock 4.2软件预测改造表位与HLA-A*0201分...
目的观察人表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)抗原改造表位是否有人白细胞抗原A(HLA-A)*0201限制性抗肿瘤能力。方法替换Eps8抗原锚定位点氨基酸获得改造肽,用BIMAS、SYFPEITHI在线数据库及Aotodock 4.2软件预测改造表位与HLA-A*0201分子的结合力,筛选出稳定结合的改造表位E1-9V(ILDDIEFFV)、E1-1Y9V(YLDDIEFFV)。用经典肽结合力实验检测各改造表位与HLA-A*0201分子的亲和力。制备天然表位(E1)、E1-9V、E1-1Y9V特异性杀伤性T淋巴细胞(CTLs)。用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测并比较E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对MCF-7细胞、沉默Eps8的MCF-7细胞(MCF-7/shRNA)和抗HLA-A2抗体预孵育的MCF-7细胞(MCF-7/A2Ab)的杀伤率,E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对SW480、U251、K562、IM-9细胞的杀伤率,E1、E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对T2细胞的杀伤率。结果 E1-9V、E1-1Y9V均可与HLA-A*0201分子B、F对接口袋的氨基酸形成稳定氢键。肽结合力实验结果显示E1-9V、E1-1Y9V与HLA-A*0201均具有高亲和力,且高于天然表位E1,P均<0.05。E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对MCF-7/shRNA、MCF-7/A2Ab细胞杀伤率明显低于MCF-7细胞,P均<0.05。E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对SW480、U251细胞杀伤率明显高于K562、IM-9细胞(P均<0.05)。E1-1Y9V特异性CTLs对T2细胞的杀伤率显著高于E1、E1-9V特异性CTLs,P均<0.05。结论 Eps8抗原改造表位E1-9V、E1-1Y9V与天然表位E1相比具有更高的HLA-A*0201分子亲和力,保留了原有的免疫原性,并且E1-1Y9V抗肿瘤免疫效应强于天然表位E1。
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关键词
表皮生长因子受体通路底物8
抗原改造改造表位
细胞毒性T淋巴细胞
肿瘤疫苗
人白细胞抗原A*0201
下载PDF
职称材料
题名
Eps8抗原HLA-A* 0201限制性CTL表位的预测和鉴定
1
作者
杜静文
王雨馨
周炜均
姜春俊
谢晓灵
张宏毫
贺艳杰
李玉华
机构
南方医科大学珠江医院血液科
南方医科大学第二临床医学院
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期865-872,共8页
基金
国家自然科学基金面上项目(81372249)
国家自然科学基金青年项目(81300431)
+5 种基金
广东省自然科学基金博士启动项目(S2013040014449)
珠江医院人才培养基金资助项目
南方医科大学科研启动计划资助项目(B1012038)
广州市科技计划项目(12C22121595)
广东省教育厅科技创新项目(2012KJCX0025)
教育部高等学校博士学科点专项科研基金联合资助课题(20114433110012)资助
文摘
目的:寻找并鉴定肿瘤相关抗原Eps8来源的HLA-A*0201限制性CTL表位,为临床开展基于Eps8表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法:通过在线生物学软件从C-末端酶切位点、MHC-I类分子结合力及TAP转运效率3个方面初步预测Eps8抗原的HLA-A*0201限制性CTL表位,通过肽/MHC分子结合力及肽/MHC分子复合物稳定性实验初步验证预测结果,利用酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immuospot assay,ELISPOT)方法检测候选表位刺激健康志愿者外周血单个核细胞(PBMNC)分泌IFN-γ的能力,以及LDH细胞毒实验验证其体外杀伤肿瘤细胞的功能,最后在HLA-A*0201/Kb转基因小鼠中检测候选表位的体内免疫功能。结果:通过在线生物学软件筛选得到4个候选表位。结合力实验结果显示,p360-368具有高结合力,p101-109、p276-284具有中等结合力。稳定性实验结果显示,该3个表位的DC50均大于8 h。LDH细胞毒实验中p101-109、p276-284、p360-368都能诱导产生特异性CTL,对靶细胞具有显著的杀伤效应,还能提高效应细胞分泌IFN-γ的水平。在HLA-A*0201/Kb转基因小鼠体内免疫功能检测中同样证实该Eps8抗原表位能产生强烈的免疫应答。结论:天然表位p101-109、p276-284、p360-368可能是Eps8抗原HLA-A*0201限制性CTL表位。
关键词
Eps8
肿瘤相关抗原
多肽疫苗
表位
Keywords
Eps8
tumor associated antigen
peptide vaccine
epitope
分类号
R730.51 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
Eps8抗原改造表位HLA-A*0201限制性抗肿瘤能力观察
2
作者
姜春俊
周炜均
谢晓灵
杜静文
张宏毫
贺艳杰
李玉华
机构
南方医科大学珠江医院
出处
《山东医药》
CAS
北大核心
2016年第26期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(81372249)
国家自然科学基金青年项目(81300431)
+1 种基金
广东省中国科学院全面战略合作专项基金资助项目(2013B091500072)
广东省高等教育"创新强校工程"专项基金资助项目(2014GKXM029)
文摘
目的观察人表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)抗原改造表位是否有人白细胞抗原A(HLA-A)*0201限制性抗肿瘤能力。方法替换Eps8抗原锚定位点氨基酸获得改造肽,用BIMAS、SYFPEITHI在线数据库及Aotodock 4.2软件预测改造表位与HLA-A*0201分子的结合力,筛选出稳定结合的改造表位E1-9V(ILDDIEFFV)、E1-1Y9V(YLDDIEFFV)。用经典肽结合力实验检测各改造表位与HLA-A*0201分子的亲和力。制备天然表位(E1)、E1-9V、E1-1Y9V特异性杀伤性T淋巴细胞(CTLs)。用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测并比较E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对MCF-7细胞、沉默Eps8的MCF-7细胞(MCF-7/shRNA)和抗HLA-A2抗体预孵育的MCF-7细胞(MCF-7/A2Ab)的杀伤率,E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对SW480、U251、K562、IM-9细胞的杀伤率,E1、E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对T2细胞的杀伤率。结果 E1-9V、E1-1Y9V均可与HLA-A*0201分子B、F对接口袋的氨基酸形成稳定氢键。肽结合力实验结果显示E1-9V、E1-1Y9V与HLA-A*0201均具有高亲和力,且高于天然表位E1,P均<0.05。E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对MCF-7/shRNA、MCF-7/A2Ab细胞杀伤率明显低于MCF-7细胞,P均<0.05。E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对SW480、U251细胞杀伤率明显高于K562、IM-9细胞(P均<0.05)。E1-1Y9V特异性CTLs对T2细胞的杀伤率显著高于E1、E1-9V特异性CTLs,P均<0.05。结论 Eps8抗原改造表位E1-9V、E1-1Y9V与天然表位E1相比具有更高的HLA-A*0201分子亲和力,保留了原有的免疫原性,并且E1-1Y9V抗肿瘤免疫效应强于天然表位E1。
关键词
表皮生长因子受体通路底物8
抗原改造改造表位
细胞毒性T淋巴细胞
肿瘤疫苗
人白细胞抗原A*0201
Keywords
epidermal growth factor receptor pathway substrate No. 8 (Eps8)
modified epitope
cytotoxic T lymphocytes
tumor vaccine
human leukocyte antigen A (HLA-A) * 0201
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Eps8抗原HLA-A* 0201限制性CTL表位的预测和鉴定
杜静文
王雨馨
周炜均
姜春俊
谢晓灵
张宏毫
贺艳杰
李玉华
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
下载PDF
职称材料
2
Eps8抗原改造表位HLA-A*0201限制性抗肿瘤能力观察
姜春俊
周炜均
谢晓灵
杜静文
张宏毫
贺艳杰
李玉华
《山东医药》
CAS
北大核心
2016
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