南方红豆杉水提物通过氧化应激和线粒体损伤影响口腔鳞癌细胞CAL27的增殖和凋亡

目的研究南方红豆杉水提物(AETC)对口腔鳞癌(OSCC)细胞CAL27增殖、凋亡的影响及机制。方法CCK-8法检测不同质量浓度AETC(0、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 mg·mL^(-1))处理CAL27细胞的存活率并筛选后续浓度;克隆形成实验检测细胞增殖;qRT-PCR检测增殖相关指标Ki67和p21 mRNA的表达;流式细胞术检测细胞凋亡;DCF染色法检测活性氧(ROS)含量;ELISA试剂盒检测氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)]的水平;JC-1染色法评估线粒体膜电位变化;Western blot法检测增殖、凋亡和线粒体损伤相关蛋白(p21、Ki67、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2和Bax)的表达。结果与0 mg·mL^(-1) AETC组比较,CAL27细胞的存活率随着AETC质量浓度的增加而降低,后续选择0.250、0.500、1.000 mg·mL^(-1) AETC;与0 mg·mL^(-1) AETC组比较,0.500 mg·mL^(-1)组和1.000 mg·mL^(-1)组的AETC细胞克隆形成率显著降低、Ki67表达降低、p21表达增强、细胞凋亡率增加、活化Caspase-9和Caspase-3表达及Bax/Bcl-2增加、SOD水平降低、ROS、MDA和LDH水平增加、线粒体膜电位显著降低(均P<0.05)。结论AETC可抑制CAL27细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与细胞氧化应激和线粒体损伤增加有关。

短发夹RNA沉默HIPK2对口腔鳞癌SCC-25细胞株增殖、自噬和裸鼠移植瘤生长的影响

目的:探究HIPK2短发夹RNA对口腔鳞癌SCC-25细胞株增殖、自噬和裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将SCC-25分为未转染的Control组、转染shRNA-NC阴性对照载体的shRNA-NC组,转染HIPK2-shRNA1慢病毒载体的HIPK2-shRNA1组,转染HIPK2-shRNA2慢病毒载体的HIPK2-shRNA2组。RT-qPCR检测HIPK2 mRNA水平;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡;western blotting检测HIPK2、c-Myc、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Bcelin1、ATG7、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ蛋白表达水平。将转染HIPK2-shRNA2的SCC-25细胞皮下注射裸鼠建立裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为2组,Control组和HIPK2-shRNA2组,检测裸鼠肿瘤重量,TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡,免疫组化染色检测肿瘤Caspase-3阳性细胞数,western blotting检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果:体外实验中,与Control组比较,HIPK2-shRNA1组、HIPK2-shRNA2组HIPK2mRNA水平和蛋白表达水平降低,克隆形成率降低,细胞凋亡率升高,c-Myc蛋白表达水平降低,cleaved Caspase-3/Caspase-3、Bax/Bcl-2比值升高,Bcelin1、ATG7蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(均P<0.05)。体内实验中,与Control组比较,HIPK2-shRNA2组裸鼠肿瘤重量降低,Caspase-3阳性细胞数升高,肿瘤细胞凋亡率升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(均P<0.05)。结论:HIPK2短发夹RNA抑制SCC-25细胞增殖,诱导细胞凋亡和自噬,并抑制裸鼠移植瘤的生长。