嗜热菌HB8 Fe-S簇生物合成相关酶SufS与SufE重组酶的体外复合体功能

Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用，参与电子传递和基因调节等过程．以嗜热菌HB8基因组为模板，通过PCR扩增获得Fe—S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因．将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上，构建重组质粒,CS-pET28a和sufE-pGEX-6P-1．重组质粒转化E．coli BL21（DE3）菌株进行蛋白质表达及亲和层析纯化．研究证明，sufS具有脱硫酶活性，而SufE的存在可增强其活性．体外重组实验表明，在60℃孵育SufS和SufE1．0～2．5h，其复合体脱硫酶活性约是单体sufS的2倍，但两者相互作用时间短暂．若通过交联剂Mts—Aft-Biotin使SufS与sufE共价连接，此时SufsE酶活性是SufS的6倍左右，并可持续72h．

酶法催化降解2,4,6-三硝基甲苯的研究进展

2,4,6-三硝基甲苯(TNT)作为一种广泛使用的含能材料,发挥巨大作用的同时也给环境带来了严重的污染,对人类健康构成一定威胁。目前国内外的TNT处置主要有物理、化学、生物及酶法等方法,其中酶法作为一种新兴的方法,显示了良好的应用潜力,受到研究者的广泛关注,。比较了各类处理方法的优缺点,重点介绍近年来涉及TNT降解的酶学研究进展,并对酶法在TNT废水处理和土壤修复中的应用前景进行展望。

嗜热菌铁硫簇合成途径中SufB、SufC和SufD蛋白的表达、纯化及其功能初步研究

铁硫簇广泛存在于各种生物中,参与电子传递、底物结合和激活、基因表达和调控等重要功能.本文利用嗜热菌Thermus thermophilus HB8研究铁硫簇合成SUF系统中的三个关键蛋白SufB、SufC、SufD.以HB8的基因组为模板,通过PCR技术获得其sufB、sufC、sufD三个基因,随后构建了蛋白表达载体sufB-pET28a(+)、sufC-pET28a(+)、sufD-pGEX-6P-1,将其转入大肠杆菌Rosetta(DE3)进行蛋白表达,再利用亲和层析与凝胶过滤层析进行蛋白纯化.随后对SufB、SufC、SufD功能进行了初步研究,证明SufC对ATP具有亲和性,其亲和常数为15.2μmol/L;证明SufB与SufC在体外具有相互作用,并得到了复合体SufBC,为进一步探讨其作用机制奠定了基础.