激素在现代生殖调控技术中的发展与应用

动物的生殖过程主要是由生殖激素调控的。这种调控是精密严格的,深入研究生殖激素对于畜牧生产具有重要的指导意义。综述了几种重要的生殖激素以及生长因子的来源和生物学特性等,并对影响生殖的因素进行了总结。

亚硒酸钠对鼠胚胎干细胞及奶山羊-鼠异种重构胚发育率的影响

为了探索亚硒酸钠对小鼠胚胎干细胞和延边奶山羊-鼠异种重构胚抗氧化损伤的保护能力,以及亚硒酸钠提高小鼠胚胎干细胞和延边奶山羊-鼠异种重构胚发育率的作用,通过MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测在亚硒酸钠处理下,小鼠胚胎干细胞和奶山羊-鼠异种重构胚抗氧化损伤的增殖能力,并统计重构胚和异种重构胚的发育率。结果显示,经3.5μmol/L亚硒酸钠处理的90.0μmol/L H2O2氧化损伤的小鼠胚胎干细胞的增殖率显著提高。亚硒酸钠处理的小鼠胚胎干细胞重构胚和延边奶山羊-鼠胎儿皮肤成纤维细胞异种重构胚的卵裂率显著高于未经亚硒酸钠处理的胚胎干细胞。表明亚硒酸钠可提高小鼠胚胎干细胞重构胚和延边奶山羊-鼠胎儿皮肤成纤维细胞异种重构胚的发育率。

咖啡因对奶山羊成纤维细胞及奶山羊-鼠异种重构胚抗氧化性的影响

近几年来,对于细胞核移植技术,细胞介导转基因技术的探索与发展是社会上研究热点之一.此技术不仅能够精确改良动物的基因型,而且比传统育种方法更为有效.通过同种体细胞核移植已经成功获得了很多转基因动物,但异种核移植胚胎发育率较低.胎儿皮肤成纤维细胞较容易分离及培养,适合用做核移植供体细胞并能够生产出各种转基因动物[1-4],而且也已经构成生产转基因动物应用体系.

过氧化氢诱导延边奶山羊乳腺上皮细胞氧化损伤模型的建立

为了建立过氧化氢诱导延边奶山羊乳腺上皮细胞(DGMECs)氧化损伤模型,用体外培养的延边奶山羊乳腺上皮细胞传代后进行试验,用DMEM/F12培养基将H2O2稀释为5、50、100、200、500μmol/L,以DMEM/F12培养基作为空白对照组。以H2O2处理4 h后,用MTT法观察H2O2对乳腺上皮细胞活力的影响,用Hoechst33342/PI荧光染色法观察H2O2损伤对乳腺上皮细胞的促凋亡情况,DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量。MTT活性检测结果表明,各处理组的细胞存活率与未处理组差异显著(P<0.05)。5、50、100μmol/L H2O2作用4 h后,细胞存活率分别为91.21、77.50%、54.48%;而200、500μmol/L H2O2作用4 h后,细胞存活率仅为35.53%、27.79%,乳腺上皮细胞死亡过多。Hoechst33342/PI染色结果表明,H2O2通过诱导乳腺上皮细胞的凋亡及坏死来降低细胞的存活率。利用荧光探针DCFH-DA分析DGMECs的ROS水平,结果显示,细胞经H2O2处理后会明显增加细胞内ROS水平。H2O2100μmol/L处理细胞4 h后,约导致50%的细胞死亡,坏死比例小,ROS含量也相对较少,在此浓度下,细胞还具有恢复其功能的可能性,因此选用100μmol/L H2O2处理细胞4 h来建立延边奶山羊乳腺上皮细胞氧化损伤模型。

氧化应激与胚胎的氧化还原调节

由活性氧(Reactive oxygen species,ROS)引起的氧化应激是胚胎发育受阻的主要原因之一。氧化应激能通过氧化细胞内核酸、蛋白质、脂质等生物分子而导致细胞的衰老或者死亡。在体外受精(In vitro fertilization,IVF)和胚胎体外培养等辅助生殖过程中降低氧化应激是非常重要的。在另一方面,ROS在细胞信号转导中发挥重要作用,也是细胞正常生理活动所必需的。基于ROS的这种双重作用,很难解决由其引起的氧化应激现象。本文对ROS在卵子发生和胚胎发育过程中作用机制的研究进展作一综述。

亚硒酸钠对延边奶山羊乳腺上皮细胞过氧化氢所致氧化损伤的保护作用

研究了亚硒酸钠对过氧化氢导致的延边奶山羊乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用。将延边奶山羊乳腺上皮细胞分为3组:正常组(对照组1)、过氧化氢损伤组(对照组2)、亚硒酸钠保护组。MTT方法检测细胞活力,Hoechst33342/PI双染、Giemsa染色法检测细胞凋亡情况,DHE染色法检测细胞内ROS含量。结果表明,与对照组2相比,浓度为0.25、0.5、1.0μg/mL的亚硒酸钠保护组的延边奶山羊乳腺上皮细胞活力上升,细胞凋亡数目减少,活性氧含量减少。其中以0.5μg/mL亚硒酸钠处理组效果最显著。说明0.5μg/mL的亚硒酸钠可以减少过氧化氢所致的延边奶山羊乳腺上皮细胞的氧化损伤,提高细胞活力,抑制细胞凋亡,减少细胞内ROS含量。表明亚硒酸钠对延边奶山羊乳腺上皮细胞过氧化氢所致氧化损伤具有保护作用。

WY14643对小鼠早期胚胎抗氧化损伤的影响

旨在研究WY14643对小鼠早期胚胎发育的影响,探讨WY14643对早期胚胎抗氧化损伤的机理。通过H2O2诱导建立胚胎氧化损伤模型,添加WY14643对胚胎进行体外培养,DCHFDA测定胚胎内部H2O2含量,分别用超氧化物歧化酶(SOD)和微量丙二醛试剂盒测定胚胎不同发育阶段SOD活性和丙二醛MDA含量,并观察后续胚胎发育情况。结果表明:(1)不同浓度WY14643处理2h后,0.1μmol·L-1 WY14643处理组4-细胞率、囊胚率显著高于其他各组(P<0.05);(2)经0.1μmol·L-1 WY14643和H2O2联合处理后,其胚胎发育率显著高于单独H2O2处理组和对照组(P<0.05);(3)DCHFD荧光检测发现,WY14643添加组胚胎内部H2O2水平显著低于其他各组(P<0.05);(4)经SOD、MDA检测,发现添加WY14643胚胎内部各时期SOD水平显著高于其他各组(P<0.05),MDA水平显著低于其他各组(P<0.05)。综上表明,氧化应激对早期胚胎发育是不利的,WY14643通过增加抗氧化酶SOD活性、降低脂质损伤等途径减少胚胎内部ROS,增加抗氧化能力,促进胚胎在体外更好地发育。

动物科学专业实施双语教学模式的研究与思考

双语教学有利于推动教学改革,培养国际化人才。在阐述教学模式内涵的基础上,以动物科学专业动物繁殖学课程为例,通过双语教学来加强学生的识记和理解能力,并采用多媒体课件来形象生动地加以展现,进而在知识面、外语、计算机等方面促进学生的全面发展,培养新世纪的高素质复合型畜牧人才,并且建立英文原著、多媒体教学、双语教学三结合的崭新教学模式。

褪黑素对小鼠卵母细胞氧化应激及孤雌发育的影响

通过小鼠卵母细胞自发成熟体外培养模型研究了褪黑素(MT)对外源性H2O2刺激的小鼠卵母细胞体外成熟及其孤雌发育的影响。结果表明:(1)随着H2O2剂量依赖性的增加,卵母细胞PB1的排出率下降,当增加H2O2(>250μmol·L-1)时,显著下降(19.4%vs.92.0%,P<0.05);(2)培养液中添加MT(0.1、1.0、10.0ng·mL-1)后均能阻止H2O2的抑制作用,其中10.0ng·mL-1的MT作用效果显著(P<0.05);(3)取GV期卵母细胞经H2O2(500μmol·L-1)和MT(0.000、0.001、0.010、0.100ng·mL-1)联合培养后孵育在2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCF-DA)中,荧光显色表明,MT清除了由于H2O2引起的细胞内大量的活性氧(Reactive oxygen species,ROS),其中0.100ng·mL-1的MT效果最显著(P<0.05),极大程度的降低了氧化应激损伤,提高了成熟率;(4)统计卵母细胞孤雌激活后的发育情况,MT浓度为10-9～10-3 mol·L-1组培养的孤雌胚2-细胞发育情况无显著差异(88.2%、91.4%、91.8%、88.8%vs.88.1%,P>0.05),MT浓度为10-7～10-3 mol·L-1组的4～8-细胞率差异显著(58.8%、73.8%、43.6%vs.23.4%,P<0.05),MT浓度为10-9～10-5 mol·L-1均明显促进囊胚发育(24.6%、46.6%、49.2%vs.8.0%,P<0.05)。氧化应激对卵母细胞的成熟是不利的,MT保护了卵母细胞免受氧化应激的影响,MT浓度为10-5 mol·L-1为卵母细胞孤雌发育能力的最适浓度。由此可推出MT作为细胞内的自由基清除剂,可能是提高卵母细胞和胚胎质量的重要条件之一。

延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟的研究

[目的]对延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟进行研究。[方法]以延边奶山羊为试验对象,研究不同超排方案对羔羊卵泡发育的影响,比较了羔羊超排处理后与成年母羊卵巢内的卵母细胞体外成熟的差异。[结果]延边奶山羊的最佳超排方案为CIDR+PMSG 800 IU注射1次+FSH(加拿大)20 IU/次,间隔12 h注射6次;宁波产FSH超排效果不稳定,卵泡回收率低。成年母羊卵母细胞的体外成熟率显著高于母羔羊超排卵母细胞。[结论]该研究为建立延边奶山羊JIVET技术体系提供依据。

活性氧对鼠早期胚胎抗氧化酶基因表达的影响

通过检测鼠早期胚胎内过氧化物酶体数量及过氧化物酶体中抗氧化酶基因表达水平,以探讨活性氧对鼠胚胎2-细胞期过氧化物酶体数量的变化及过氧化物酶体中抗氧化酶基因表达量的影响。结果表明:Mn-SOD、GPX-1和GPX-4目的基因在鼠胚胎4-细胞期表达量最高;CAT和GPX-2目的基因在卵母细胞表达量最高;Cu/Zn-SOD目的基因在2-细胞期表达量最高;GPX-3目的基因在卵母细胞、1-细胞、2-细胞和4-细胞期间表达无明显差异。H2O2处理组中PMP-20、Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和GPX-3基因表达量较高,GPX-2基因表达量较低,而GPX-4基因在体外培养组中表达量最高,GPX-1基因表达量无显著变化,CAT基因没有表达。由此可知,不同抗氧化酶基因表达量在鼠早期胚胎发育的不同时期有所不同,Mn-SOD、GPX-1和GPX-4基因表达量随着胚胎的发育不断增高,而过氧化物酶体数量同时也随之增加。