哈慈杯对中药黄芩中黄芩甙浸邮量的HPLC测定

用高效液相色谱仪 ,研究中药黄芩甙浸出量的对比实验 ,用开水浸泡黄芩甙的浸出量 ,在哈慈杯中要比在普通杯中高约 46～ 60 % ,相对提高 5 3%。而用酒浸泡则产生负效应 ,说明磁场对乙醇活性抑制 ,浸出量要低约 2 9～ 5 7%。相对抑制 41 %。进一步证实了磁处理的双向效应。

哈磁杯对中药黄芩中黄芩甙浸出量的HPLC测定

用高效液相色谱仪,研究中药黄芩。甙浸出量的对比实验,用开水浸泡黄芩甙的浸出量,在哈磁杯中要比在普通杯中高约46～60%,相对提高53%。而用酒浸泡则产生负效应,说明磁场对乙醇活性抑制,浸出量要低约29～57%。相对抑制41%。进一步证实了磁处理的双向效应。

硅藻土、珍珠岩微生物限度检查方法的探讨

文章尝试对助滤剂微生物计数方法和控制菌大肠埃希菌检查法进行适用性试验,建立助滤剂微生物限度检测方法,对血液制品生产过程中添加的助滤剂进行微生物控制。具体通过采用涂布法、倾注法、薄膜过滤法、涂布(分解求和)法对珍珠岩和硅藻土进行微生物回收试验,计算各试验菌回收率;用控制菌检查法对控大肠埃希菌检查法进行确认。结果发现涂布法各试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值均在0.5~2.0范围内,微生物计数方法通过;控大肠埃希菌检查法通过。

不同规格鲎试剂对人血白蛋白热原进行检测的对比分析

目的:比较几种规格鲎试剂检测人血白蛋白热原的结果,选出高灵敏度、少稀释的规格备用。方法:按《中国药典》2020年版通则中的“1143细菌内毒素检查法”进行人血白蛋白热原的检测,采用不同厂家、不同灵敏度的鲎试剂对不同批号的人血白蛋白分别进行干扰试验。结果:在验证条件下,选用0.06 EU·mL^(-1)鲎试剂,供试品以BET水稀释1~27倍(5 g/L)、2~55倍(10 g/L),对细菌内毒素检查法无干扰作用。结论:文中建立的方法用于检查人血白蛋白的热原可行,且稳定性良好。

珍珠岩细菌内毒素干扰试验研究

目的:判断珍珠岩细菌内毒素检查溶液的获取方式对使用鲎试剂(凝胶法)检测细菌内毒素有无干扰作用。方法:采用细菌内毒素凝胶法检测助滤剂珍珠岩的细菌内毒素,确认珍珠岩被高温干烤和未经高温干烤所得到的细菌内毒素检查溶液对内毒素检测的干扰。结果:样品前处理采用180℃干烤3 h与未干烤相比较均对检测方法无干扰,检测珍珠岩细菌内毒素的鲎试剂选择标示灵敏度为0.06 EU/mL。珍珠岩细菌内毒素检查溶液的获取方式:将供试品加细菌内毒素检查用水将供试品稀释8倍混匀4 000 r/min离心10 min提取后,选择经过验证不含内毒素和干扰因子的稀释剂Ⅱ与供试品按照1∶1的比例进行稀释,能有效避免珍珠岩对细菌内毒素检查的干扰。结论:通过采用稀释剂Ⅱ对样品进行稀释及中和,珍珠岩能够采用鲎试剂检测细菌内毒素。

供试品制备方式对气相色谱法测定人血白蛋白辛酸钠含量影响的研究

目的:验证两种供试品制备方式对气相色谱法测定人血白蛋白辛酸钠含量结果的影响,为提高辛酸钠含量测定的准确性、规范辛酸钠含量测定方法提供参考依据。方法:参照《中华人民共和国药典》2020年版通则中“3111辛酸钠测定法”进行辛酸钠含量测定,但加入三氯甲烷离心后不进行挥干处理,直接注入1μL于气相色谱仪中进行分析[色谱条件:色谱柱HP-FFAP(0.53 mm×30 m×1.0μm);气化室温度230℃;色谱柱温度160℃;检测器温度230℃;载气为氮气;柱流速为15.29 mL/min;进样模式为不分流]。分别采用加1.5 mol/L高氯酸溶液之后进行混合的方式和在振荡器上边混合边加1.5 mol/L高氯酸溶液的方式进行供试品处理,并对试验结果进行对比研究。结果:加1.5 mol/L高氯酸溶液之后进行混合的供试品在离心后会偶然产生凝块,且检测结果偏小;在振荡器上边混合边加1.5 mol/L高氯酸溶液的供试品离心后不会产生凝块,且检测结果稳定。结论:采用气相色谱法测定人血白蛋白辛酸钠含量供试品制备中加1.5 mol/L高氯酸溶液方式的不同对辛酸钠含量结果的影响比较明显,在进行人血白蛋白供试品制备时在振荡器上边混合边加1.5 mol/L高氯酸溶液可保证检测结果的准确性。

红金银花不同外植体组织培养直接成苗培养基筛选

以红金银花顶芽、当年生幼茎、叶片为试验材料,利用仿自然气候的培养条件,通过对培养苗形态指标的综合分析,对3种红金银花外植体组织培养一次性成苗的培养基进行筛选。结果表明:顶芽为最佳外植体,其次是叶片和幼茎。最适合顶芽的培养基为MS+1.0 mg/LKT+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L-αNAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂粉+0.3%活性碳,pH 6.0;最适合幼茎的培养基为MS+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L-αNAA+30 g/L蔗糖+8g/L琼脂粉+0.3%活性碳,pH 6.0;最适合叶片的培养基为MS+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L6-BA+0.3 mg/L-αNAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂粉+0.3%活性碳,pH 6.0。

实验室几种常用菌悬液制备方法的探讨

目的:找到制备含有特定活菌数的菌悬液的方法,为试验结果的准确性提供依据。方法:采用浊度计法制备标准浊度的浓菌液,再进行梯度稀释后做活菌平板计数。结果:在1号麦氏浊度下,铜绿假单胞菌菌悬液、大肠埃希菌菌悬液稀释至10^(-7),金黄色葡萄球菌菌悬液稀释至10^(-6)后3 mL菌液+7 mL稀释液,枯草芽孢杆菌菌悬液、生孢梭菌菌悬液稀释至10^(-6),白色念珠菌菌悬液稀释至10^(-5)后3 mL菌液+7 mL稀释液,黑曲霉孢子悬液稀释至10^(-4)后3 mL菌液+7 mL稀释液,活菌数小于100 cfu。结论:在同一特定浊度下,不同试验菌的稀释梯度差异很大,菌体越小的试验菌,稀释梯度越大。

人凝血酶原复合物的小鼠急性毒性实验研究

采用完全随机法对小鼠分组,通过剂量摸索性实验、预实验和最大耐受剂量实验对人凝血酶原复合物在小鼠体内的急性毒性进行了初步研究。结果表明:人凝血酶原复合物的最大浓度为16IU/mL,最大体积为0.5mL/20g鼠次;尾静脉注射后,小鼠行为、活动、体重、死亡等指标以及摄食、饮水、大小便均未发生异常;人凝血酶原复合物对小鼠的最大耐受量为800IU/kg,人凝血酶原复合物注射显示的临床剂量安全无毒。

原子吸收分光分光度法测定破伤风人免疫球蛋白中铝残留量

建立破伤风人免疫球蛋白中铝残留量检测方法。方法 利用Triton X-100溶液稀释破伤风人免疫球蛋白,采用原子吸收分光光度法测定破伤风人免疫球蛋白铝残留量。结果 在本实验条件下,铝残留量在2. 0-40. 0 g /L范围内线性关系良好;精密度实验中铝残留的精密度相对标准偏差(RSD)为11.88%,平均回收率为105.24%,RSD为5.56%。结论 使用Triton X-100溶液稀释破伤风人免疫球蛋白测定破伤风人免疫球蛋白铝残留量检测结果准确,提高了检测结果精密度,可用于破伤风人免疫球蛋白铝残留量的测定。

破伤风毒素作用于小鼠的死亡时间推断

推断破伤风毒素作用于小鼠体内致其死亡后的死亡时间。方法按照破伤风抗毒素效价测定法(小鼠试验法)相关方法进行实验,观察小鼠的发病症状、尸僵程度,测量尸温。结果 尸温随死亡时间变化的过程分为三个阶段:(0~3)h;(3~6)h;(6~10)h。各阶段的尸温与死亡时间均呈高度负相关性,相关系数依次为-0.982,-0.968,-0.987,回归方程分别为Y36.515-4.5264X、Y26.85?1.0227X、Y23.691?0.4509X。尸僵程度分为四个阶段:Ⅰ阶段(0~0.5h)、Ⅱ阶段(0.5~4h)、Ⅲ阶段(4~10h)、Ⅳ阶段(10~24h)。小鼠死亡0.5小时后进入尸僵形成阶段,大概4小时达到完全状态,维持6小时开始缓解,达到24小时的时候尸僵基本缓解。结论 本实验中小鼠尸温死后3h内变化最快,死后约10h尸温降至与环境温度相同,尸温适合推断死亡时间的范围是(0~10)h。尸僵经历4h达到完全,维持6h后开始缓解,死后24h基本完全缓解,在24h后尸体进入腐败阶段,尸僵适合推断死亡时间的范围是(0~24)h。

第二批人血白蛋白国家对照品的研制标定

目的研制第二批人血白蛋白国家对照品,用于人血白蛋白等相关产品的质量活动。方法选择批签发检验合格的人血白蛋白产品作为原料进行合并、除菌、分装。制备后按照2020年版《中国药典》三部人血白蛋白各论要求,选择蛋白质含量、辛酸钠含量、乙酰色氨酸含量、多聚体含量、钠离子含量、pH、吸光度共7个检验项目进行多实验室协作标定。除乙酰色氨酸由5家实验室协作标定外,其余项目均由11家实验室完成协作标定。在LAB01开展对照品的稳定性监测。结果依据各实验室协作标定结果,该批国家对照品确立的参考范围分别为:蛋白质含量均值204.03 g·L^(-1),95%可信区间(203.05,205.00)g·L^(-1),参考范围(204.03±2.90)g·L^(-1);辛酸钠含量均值16.21 mmol·L^(-1),95%可信区间(15.98,16.44)mmol·L^(-1),参考范围(16.21±0.70)mmol·L^(-1);乙酰色氨酸含量均值16.28 mmol·L^(-1),95%可信区间(15.82,16.74)mmol·L^(-1),参考范围(16.28±0.74)mmol·L^(-1);多聚体峰面积百分比均值7.43%,95%可信区间(7.30,7.56)%,参考范围(7.43±0.38)%(HPLC-SEC);pH值均值6.95,95%可信区间(6.92,6.98),参考范围(6.95±0.08)[测定温度(22±5)℃];吸光度均值0.06,95%可信区间(0.06,0.06),参考范围(0.06±0.01);钠离子含量均值135.2 mmol·L^(-1),95%可信区间(131.2,139.2)mmol·L^(-1),参考范围(135±12)mmol·L^(-1)。所有检测项目结果在考察期内量值没有发生趋势性变化。结论该批人血白蛋白国家对照品符合相关要求,可以发放使用。

纳米膜过滤和低pH孵放法去除/灭活静注人免疫球蛋白中病毒效果的验证

目的验证纳米膜过滤法和低pH孵放法去除/灭活静注人免疫球蛋白中病毒的效果。方法纳米膜过滤法选用猪细小病毒为指示病毒,低pH孵放法选用水疱性口炎病毒、辛德比斯病毒、HIV和伪狂犬病毒为指示病毒,高浓度静注人免疫球蛋白在pH4.6~5.0、30~32 ℃条件下作用不同时间后,取样检测样品中残余病毒滴度以评价病毒灭活效果。结果纳米膜过滤可降低猪细小病毒滴度达4.50~4.68 lg,低pH孵放法对伪狂犬病毒、辛德比斯病毒、水疱性口炎病毒、HIV等指示病毒的滴度降低量均大于4 lg。结论纳米膜过滤法和低pH孵放法均能有效去除/灭活指示病毒,提高静注人免疫球蛋白产品的安全性。

静注人免疫球蛋白纯化用层析介质使用寿命的验证

目的验证用于静注人免疫球蛋白生产的Fractogel®EMD TMAE(简称TMAE)层析介质的使用寿命。方法建立TMAE凝胶层析缩小模型,通过对层析介质运行过程中的层析图谱、蛋白回收率、IgA、IgM、分子大小分布、压力、理论塔板数、对称系数和总有机碳(total organic carbon,TOC)进行趋势分析。对每次层析过程中的参数进行比对,分析随着循环次数的增加关键参数的变化情况,确定层析介质使用寿命。结果IgA检测均值≤100μg/mL,IgM检测均值≤50μg/mL,IgG单体与二聚体含量之和>95.0%,均符合产品质量标准。层析介质的压力呈逐步升高的趋势,蛋白回收率下降,均在可接受范围内,同时层析柱的每米理论塔板数和对称系数符合使用要求。结论用于静注人免疫球蛋白生产的TMAE层析凝胶使用寿命暂定为240次。

人凝血因子Ⅷ的小鼠急性毒性实验研究

为探究人凝血因子Ⅷ对机体的毒性效应,于2013年6~7月采用完全随机法对小鼠分组,通过剂量摸索性实验、预实验和最大耐受剂量实验对人凝血因子Ⅷ在小鼠体内的急性毒性进行了初步研究。结果表明,人凝血因子Ⅷ最大浓度64IU/ml,最大体积0.5 ml/20g鼠次;尾静脉注射,每日2次（相隔6h）,剂量为3 200IU/kg,20只小鼠摄食、饮水、大小便及行为、活动、体重、死亡等指标均未发生异常病变;人凝血因子Ⅷ对小鼠的最大耐受量推算为3 200IU/kg,人凝血因子Ⅷ注射显示的临床剂量安全无毒。

全自动酶免仪孵育和常温放置时间延长对质控及检测结果的影响

ELISA实验过程中温度是催化反应的条件,在不同实验步骤孵育时间的延长会影响中间反应物的生成。本文为探究相应的时间变化对相应实验的质控及结果的影响。文中改变不同实验步骤中的时间,使用全自动酶免仪对弱阳标本(质控品1:2稀释)、阴性标本双孔加样进行HBsAg、HCV抗体、HIV-1和HIV-2抗体、梅毒螺旋体抗体检测,对实验结果进行统计分析并讨论。实验得出孵育和常温放置时间延长阴性标本S/CO值变化没有统计意义;HBsAg检测过程中延长相应的孵育时间对结果影响均较大;HCV抗体检测过程中延长相应的时间对弱阳性标本结果的影响均大于对质控结果的影响,为了HCV抗体检测过程中结果的可靠性建议尽量避免对实验的时间进行延长;HIV-1和HIV-2抗体检测过程中延长相应的时间对结果影响均较小;梅毒螺旋体抗体检测过程中延长相应的时间对结果影响均较大。

重庆市献血浆者病毒核酸与酶联免疫筛查效果研究

调查重庆市单采血浆站血浆标本增加病毒核酸筛查的效果,评价其在降低血液制品使用相关感染风险和保障血液制品安全中的作用。方法:通过对重庆市2020-2021年献血浆者血浆标本中乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)和梅毒螺旋体(TP)检测结果的统计学分析,与酶联免疫筛查结果进行比对,得到重庆市不同地区献血浆者阳性数据。结果:545360份血浆标本中,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测和NAT检测总阳性率为0.032%(171/545360),其中ELISA方法检测总阳性率为0.013%(70/545360),NAT阳性率为0.019%(104/545360),两种检测方法同时检出标本(5份)。结论:增加NAT检测可以更早发现窗口期标本中的病原体,能有效提高血液制品安全,降低经血液制品传播传染病的风险。