抗Mi-2抗体阳性的皮肌炎患者的临床和肌组织病理特征

目的:通过检测多发性肌炎/皮肌炎患者血清中的抗Mi-2抗体,分析该抗体阳性患者的临床特征和肌肉病理学特点。方法:用免疫印迹法检测125例多发性肌炎/皮肌炎患者(其中皮肌炎89例,多发性肌炎36例)血清中抗Mi-2抗体的阳性率,并通过系统的文献回顾,分析此抗体阳性患者的临床特征。结果:125例患者中抗Mi-2抗体阳性5例,均为皮肌炎患者,多发性肌炎患者中未检出;在皮肌炎患者中占5.6%。该抗体阳性的患者与阴性的患者相比,Gottron皮疹、Heliotrope疹、面部红斑、四肢肌肉受累的发生率较高,但无统计学差异。该抗体阳性者的肺间质病变、吞咽困难也较为常见,但合并心脏受累较少见,与伴发肿瘤无明显关联,免疫治疗应答率高。肌组织病理主要表现为血管周围炎症细胞浸润,肌细胞组织相容复合物-1表达上调,T淋巴细胞浸润为主。结论:抗Mi-2抗体对皮肌炎诊断较为特异,阳性率低,与皮疹和肌肉受累关系密切,治疗反应良好,预后个体差异较大。

肌球蛋白结合蛋白C的表达和鉴定

目的:探讨优化原核表达方法以及用亲和层析的方法制备重组人快型肌球蛋白结合蛋白C(MYBPC2)。方法:根据MYBPC2的序列设计一对引物,在上下游引物的5’端分别加上BamHI和HindⅢ酶切位点。以健康人骨骼肌cDNA为模版,扩增第284位至第579位氨基酸残基对应的碱基序列,经双酶切后插入pMalc-5e载体中,测序鉴定重组质粒的序列,将构建好的重组质粒转化大肠杆菌中,IPTG诱导重组蛋白MYBPC2-MBP的表达,亲和层析纯化重组蛋白,蛋白电泳法鉴定蛋白的分子量及纯度,测定蛋白浓度并估算蛋白纯化后得率。用商品化的抗MYBPC2抗体证实所表达蛋白序列的正确性。以纯化的蛋白免疫动物获得动物免疫血清,用Western Blot的方法鉴定此蛋白的免疫原性。结果:人MYBPC2蛋白表达载体构建成功,每升大肠杆菌菌液可生产纯化后的重组MYBPC2蛋白约30mg,Western Blot显示重组蛋白与其抗体及抗血清特异结合。结论:本方法可以高效制备生产人MYBPC2蛋白片段,具备良好的抗原特异性和免疫原性。

血清骨代谢标记物对预测类风湿关节炎关节破坏的意义

目的：探讨血清骨代谢标记物与RA患者关节破坏的相关性。方法选取140例住院RA患者，90例同期健康人作为研究对象。采用DEXA测定RA者腰椎（ L1～L4）及股骨上端骨密度值，根据T值分为正常骨量、低骨量、骨质疏松组3组；另根据双手X线结果显示关节破坏程度分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期组；同时检测患者血清CTX、25（ OH） D、TRACP－5b、PTH、血钙、血磷、抗CCP抗体、RF、CRP、ESR。结果 RA组TRACP－5b、CTX水平明显高于健康对照组（Z＝－2．747，－4．809，P＜0．01），25（OH）D水平明显低于健康对照组（Z＝－6．152，P＜0．001）；TRACP－5b与病程、关节压痛个数、CTX呈正相关（r＝0．193， r＝0．189， r＝0．196，P＜0．05），随着疾病活动度的加重，TRACP－5b水平呈现递增趋势，且骨质疏松组TRACP－5b水平高于正常骨量组，但未达统计学差异；CTX与关节肿胀个数、25（OH）D呈正相关（r＝0．215， r＝0．192，P＜0．05），其水平在疾病重度活动组明显高于中低度组；X线Ⅰ期组患者与其他各组相比年龄较小，病程较短，关节破坏程度轻；Ⅰ期、Ⅱ期组骨质疏松患病率明显低于Ⅲ期、Ⅳ期组（ P＜0．05）；骨量丢失随年龄增长、病程的延长、疾病活动度的加重而增加。结论骨代谢标记物与RA患者关节破坏有一定的相关性，联合检测多种骨代谢标记物可望预测关节破坏的程度。

炎症体在皮肌炎与多发性肌炎肌肉组织中的表达

目的:研究炎症体在皮肌炎(DM)和多发性肌炎(PM)受累肌肉中的表达情况,探讨其在发病机制中的意义。方法:采用免疫组织化学的方法检测新发病并未经治疗的成年DM/PM患者肌肉标本10例(DM 4例,PM 6例)及5例健康对照肌肉组织NALP1、NALP3、衔接蛋白ASC及半胱天冬酶-1(caspase-1)的表达情况。结果:4例DM患者肌肉组织中CD3+T细胞及CD20+B细胞均表达ASC及caspase-1,其中2例表达NALP3。6例PM患者中仅1例肌肉组织中CD3+T细胞及CD20+B细胞表达NALP3、ASC及caspase-1。10例患者均不表达NALP1。5例正常对照肌肉组织均不表达NALP1、NALP3、ASC及caspase-1。DM组ASC及caspase-1的表达阳性率显著高于PM组及正常对照组(P<0.01,P<0.05),NALP3的表达阳性率亦高于PM组及正常对照组,但均无统计学意义(均P>0.05)。结论:固有免疫反应与调节在DM和PM中起不同的作用。炎症体可能参与DM的发病过程,部分由NALP3激活。而炎症体激活可能并不参与大部分PM的发病。

多发性肌炎/皮肌炎患者血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的测定及其临床意义

目的：检测多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）患者血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）的水平及其在多发性肌炎/皮肌炎中的临床意义.方法：采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测2012年10月～2013年8月中日友好医院风湿免疫科40例PM/DM患者,20例健康人血清中sTRAIL的水平.分析sTRAIL水平与PM/DM各临床特点的关系.结果：PM/DM患者组血清sTRAIL水平为1380.71±126.49ng/L,显著高于健康对照组493.89±33.32ng/L（P＜0.05）.吞咽困难的PM/DM患者血清sTRAIL水平（1775.76±321.95ng/L）显著高于无吞咽困难者（958.24±155.66ng/L,P＜0.05）.是否合并肺间质病变,其血清sTRAIL水平无显著性差异（P＞0.05）.Jo-1阳性的患者组血清sTRAIL水平为562.36±52.99ng/L,显著低于Jo-1阴性的患者组1334.57±181.21ng/L（P＜0.05）.PM/DM患者血清sTRAIL水平与乳酸脱氢酶（LDH）显著负相关（r=-4.03,P＜0.05）.结论：TRAIL在多发性肌炎/皮肌炎的发病机制中起作用,其异常表达与患者的临床特征密切相关.

蒙脱石吸附尿酸和降低血尿酸的作用

目的研究蒙脱石吸附尿酸和降低血尿酸的作用。方法用离体实验研究蒙脱石对尿酸的吸附作用;用小鼠高尿酸血症模型研究蒙脱石降低血尿酸的作用;用磷钨酸还原法测定尿酸含量。结果蒙脱石在模拟肠液中对尿酸具有较强的吸附作用,且其吸附作用有明显的浓度依赖关系;同一浓度的蒙脱石(20g/L)对不同浓度的尿酸的吸附率差别不大;时效曲线显示其吸附作用快,半小时内吸附率超过60%,1h后基本达到平衡;在酸性环境中(pH2-6)吸附率高,碱性环境下(pH8-10)吸附率下降。尿酸灌胃小鼠的血尿酸浓度和肠道中的尿酸浓度均随着蒙脱石灌胃剂量的增加而下降;通过腹腔注射尿酸造成急性高尿酸血症模型,灌胃的蒙脱石组的血尿酸浓度明显低于模型组。结论蒙脱石有显著的吸附尿酸作用,并能降低高尿酸血症模型小鼠的血尿酸水平。

不同首发症状皮肌炎的特点分析

目的分析不同首发症状皮肌炎(DM)的临床特点及实验室结果。方法回顾性分析2019年1月1日至2021年1月1日就诊于郑州大学第一附属医院的136例DM患者的临床资料,根据首发症状的不同,将患者分为皮疹组、肌无力组、关节炎组、呼吸道症状组和非典型症状组。分析各组的一般特征、临床表现及实验室结果。结果在136例DM患者中,皮疹是最常见的首发症状,其次是呼吸道症状、关节炎、肌无力和非典型症状。皮疹组的抗转录中介因子1γ(TIF1γ)抗体阳性率高于关节炎组和呼吸道症状组(P<0.05)。非典型症状组的抗TIF1γ抗体阳性率也均高于关节炎组和呼吸道症状组(P<0.05)。呼吸道症状组间质性肺炎(ILD)的发生率高于皮疹组和非典型症状组(P<0.05),且呼吸道症状组的用力肺活量(FVC)和肺一氧化碳弥散率(DLCO)低于皮疹组、关节炎组和非典型症状组(P<0.05)。结论皮疹是DM最常见的首发症状,不同首发症状组在肌炎抗体类型、ILD阳性率及肺功能检查结果方面存在差异。

少见型抗合成酶综合征2例并文献复习

目的分析2例少见型抗合成酶综合征(ASS)的临床特点、自身抗体及预后,提高临床医师对少见型ASS的认识。方法收集2020年7月至2022年8月在郑州大学第一附属医院风湿免疫科就诊的2例少见型ASS患者的临床资料,并进行相关文献复习。结果2例少见型ASS患者分别是抗苯丙酰酮tRNA(抗Zo抗体)和抗酪氨酰抗体(抗Ha抗体)阳性,均以间质性肺疾病(ILD)为主要临床表现,同时合并抗Ro52抗体阳性。ANA荧光核型表现为胞质型,但与常见的几种抗氨酰tRNA合成酶(ARS)抗体的胞质致密颗粒型有所不同。经糖皮质激素和免疫抑制剂治疗后,例1因病程长、确诊较晚,死于呼吸衰竭,例2病程短,经积极治疗后肺部病变显著好转。结论临床中遇到胞质型ANA荧光核型,尤其合并抗Ro52抗体阳性的ILD患者,需积极完善全套肌炎特异性抗体筛查,以排除少见型ASS。

小鼠组氨酰tRNA合成酶与麦芽糖结合蛋白融合基因在大肠杆菌中的表达与鉴定

目的在大肠杆菌中表达小鼠组氨酰tRNA合成酶（HARS）与麦芽糖结合蛋白（MBP）融合基因，通过亲和层析纯化以获得具有抗原特异性的重组蛋白。方法提取C57BL／6小鼠肌肉组织总RNA，反转录为cDNA，利用软件设计一对特异性引物，扩增HARS基因上游591对碱基序列。对扩增产物和载体质粒pMALc-5e分别进行双酶切，再用T4连接酶连接得到重组质粒。将其转化大肠杆菌感受态细胞，挑取单克隆培养并鉴定质粒序列。异丙基-β-D硫化吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白表达后亲和层析纯化，聚丙烯酰胺凝胶电泳对融合蛋白进行相对分子质量粗鉴定，蛋白印迹法鉴定抗原特异性。结果重组HARS—MBP融合蛋白基因在大肠杆菌胞质中高效表达，亲和层析纯化后的融合蛋白与预测相对分子质量66000相符，与抗体具有良好的特异结合能力。结论小鼠HARS-MBP融合基因能够在大肠杆菌中稳定高效地表达，表达的蛋白具有良好的抗原特异性，为后续炎性肌病的研究提供了基础。

他汀类药物相关免疫性肌病的临床表现及研究进展

他汀类药物是3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂，除调节血脂外，还包括改善内皮功能、抗血栓作用、抗氧化作用等，在降低心血管事件病死率、脑卒中等方面发挥重要作用^[1]。自1987年上市以来在临床上广泛应用。此类药物一般需要长期服用，虽然多数患者对他汀类药物有良好的耐受性，但肌肉受累是这类药物较为常见的不良反应。

肌球蛋白结合蛋白C诱导免疫性肌炎模型的研究

目的：采用重组人快型肌球蛋白结合蛋白C（MYBPC2）免疫小鼠获得自身免疫性肌炎模型。方法将MYBPC2与完全弗氏佐剂乳化后，以皮下多点注射免疫C57BL/6小鼠（0 d、7 d），同时腹腔注射百日咳毒素2μg。①探索不同剂量MYBPC2免疫小鼠，在不同时点肌肉病理变化情况。②以600μg/次免疫小鼠，在第21天检测其肌肉耐力，观察肌肉组织主要组织相容性复合体（MHC）-Ⅰ类分子以及炎症细胞浸润等病理变化。采用Mann-Whitney U检验进行统计分析。结果①随免疫剂量增加，肌肉损伤和炎症趋于严重，在21、28 d肌组织损伤最显著，模型组小鼠肌组织可见肌纤维变性、坏死和炎细胞浸润。②小鼠模型组肌肉耐力[（6.1±1.3） min]与对照组[（9.2±1.6） min]相比明显下降（U=2.00，P=0.017）。模型组肌纤维表面MHC-Ⅰ类分子阳性，肌纤维间及血管周围区域可见散在CD4＋及CD8＋T细胞、CD68＋巨噬细胞浸润，CD20＋B细胞主要分布于血管周围区域，肌纤维间少见。结论在国内首次采用MYBPC2成功诱导小鼠自身免疫性肌炎。 MYBPC2诱导的新型自身免疫性肌炎模型具备人类多发性肌炎相似的临床和肌肉病理特征，能够作为研究肌炎发病机制的新型工具。

特发性炎性肌病骨骼肌功能异常的发生机制

特发性炎性肌病（idiopathic inflammatory myositis，IIM）是一组以进行性对称性近端肌无力为主要特点，可伴有发热、关节痛、吞咽困难、肺间质病变、心肾受累等表现的临床综合征，临床以多发性肌炎（polymyositis）和皮肌炎（dermatomyosi．tis）最常见。IIM的肌肉病理改变并不全相同，其肌无力的发生、发展和转归机制目前并不十分清楚。多发性肌炎，皮肌炎最常累及的肌肉群依次为髋屈肌、髋伸肌、髋外展肌、颈屈肌、肩外展肌，多发性肌炎肌无力的程度常常重于皮肌炎。

全新认识中性粒细胞在自身免疫病中的致病作用

以往对中性粒细胞的认识，主要停留在其在先天免疫系统中所起的重要作用。中性粒细胞是人体内数量最多的免疫细胞，是抵抗病原微生物的第一道防线。作为固有免疫系统的主要效应细胞，它可产生多种细胞因子，对适应性免疫起重要的辅助和调节作用。长期以来，人们认为中性粒细胞依靠强大的趋化及吞噬作用来清除病原微生物。2004年，Brinkmann等发现，中性粒细胞在激活后可释放出一种由DNA和组蛋白等构成的网状结构，来捕获并杀灭病原微生物，从而提出了中性粒细胞新的杀菌方式——“中性粒细胞胞外网状陷阱”（neutrophil excellurlar traps，NETs）。这种全新的防御模式不同于坏死和凋亡，它在诱捕并杀灭病原微生物的同时伴有自身的死亡，被称之为NET0sis。NETs的形成，伴有大量胞内和核内自身抗原的暴露，若NETs大量形成或清除不及时，则可诱导机体产生众多的自身抗体。

中性粒细胞胞外网状陷阱与皮肌炎患者伴发的间质性肺病的相关性研究

目的探讨中性粒细胞胞外网状陷阱（NETs）与皮肌炎患者间质性肺病（ILD）发生的关联性。方法研究纳入36例皮肌炎患者，其中19例伴发ILD。同时选择47名健康成年人作为健康对照组。比较2组血浆诱发NETs形成和降解NETs的能力。结果皮肌炎患者的血浆较健康对照组的血浆能诱发更多的正常中性粒细胞形成NETs[（246＋93）RFUs和（192±53）RFUs，P=-0．002]。皮肌炎患者的血浆对NETs的降解显著低于健康对照，而且与不伴ILD的皮肌炎患者相比，伴发ILD的皮肌炎患者降低更明显[（83±13）％和（59±21）％，P〈0．01]。进一步分析皮肌炎伴发ILD的亚组发现，4例伴发亚急性ILD的患者对NETs的降解显著低于慢性或无症状ILD的皮肌炎患者[（36±14）％和（65％±19）％，P=-0．0139]。结论皮肌炎患者的血浆诱发NETs形成显著增加，伴发ILD的皮肌炎患者不能完全降解形成的NETs；提示NETs的清除异常在皮肌炎及皮肌炎伴发的ILD中起一定作用。

肌炎动物模型的研究进展

特发性炎性肌病（idiopathic inflammatory myopathies,ⅡM）是一组病因未明的异质性疾病,主要包括PM、DM和包涵体肌炎（inclusion body myositis,IBM）3种类型.其具体发病机制尚不明确,主要涉及自身免疫反应及非免疫性代谢途径两个方面[1].由于ⅡM的异质性、复杂性和病程的迁延性,临床研究受到多方面的限制.因此,合适的动物模型是研究ⅡM发病机制及新型特异性靶向治疗的重要手段.迄今为止,有关肌炎的动物模型可分为抗原免疫诱导的肌炎模型、基于基因的非免疫途径诱导的肌炎模型、感染诱导的肌炎模型等几种类型,不同类型的动物模型所涉及的机制各有不同,本研究就这几种动物模型类型的优缺点及其意义等方面做一综述.

DNaseⅠ在多发性肌炎和皮肌炎中的作用

目的研究DNaseⅠ在多发性肌炎和皮肌炎发病机制中的作用。方法选择2011年12月至2012年10月在中日友好医院风湿免疫科住院患者中符合多发性肌炎(PM)/皮肌炎(DM)诊断标准的61例患者作为病例组。同期选择48例健康成年人作为对照组。辐射状酶扩散法测定血浆Ⅰ型脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)活性,并与患者血清学指标进行相关性分析。在DNaseⅠ活性受损的患者血浆中添加外源性DNaseⅠ和微球菌核酸酶(MNase),进一步分析DNaseⅠ活性受损的原因。结果 DNaseⅠ活性在PM/DM组为(0.3353±0.1894)U/ml,显著低于健康对照组[(0.5441±0.2536)U/ml,P<0.0001]。36例DNaseⅠ活性显著受损的患者血浆中添加外源性重组DNaseⅠ后,11例患者的血浆不能明显恢复DNaseⅠ活性,而添加MNase后,患者血浆对底物dsDNA的降解完全恢复,说明这些患者血浆中存在DNaseⅠ的特异性抑制剂。相关性分析提示DNaseⅠ活性与血清球蛋白(r=0.366,P=0.005)和IgG(r=0.322,P=0.012)呈正相关。结论 PM/DM患者血浆DNaseⅠ活性显著低于健康对照;部分PM/DM患者血浆中存在DNaseⅠ的特异性抑制剂;DNaseⅠ的活性受损可能在PM/DM发病中起一定作用。