我国葡萄扇叶衰退病相关病毒研究进展

葡萄扇叶衰退病(grapevine fanleaf degeneration disease,GFDD)是葡萄栽培中常见的病毒病害,在我国葡萄产区发生普遍,危害严重。引起该病的病毒种类有10余种,症状表现受葡萄品种、病毒种类、栽培条件等多种因素影响。由于高通量测序技术的发展与应用,我国鉴定发现了除葡萄扇叶病毒(grapevine fanleaf virus,GFLV)之外的3种GFDD相关病毒,即葡萄浆果内坏死病毒(grapevine berry inner necrosis virus,GINV)、灰比诺葡萄病毒(grapevine Pinot gris virus,GPGV)和葡萄蚕豆萎蔫病毒(grapevine fabavirus,GFabV)。系统综述了我国GFDD的主要病原及其侵染状况,可为该病害的精准防控提供参考。

5种苹果病毒多重PCR检测体系的建立

苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNMV和ASSVd 3种病毒的检测引物ACL-F1/R1、ApN-F2/R2和ASS-F1/R1,片段的大小分别为1112、1025、213 bp。利用新设计和已报道的苹果病毒特异性引物,通过引物检测效果比较、组合筛选、用量优化及退火温度调试,建立了5种苹果病毒多重PCR检测体系。该检测体系的扩增片段大小分别为ACLSV1112 bp、ApNMV640 bp、ASGV449 bp、ASPV349 bp和ASSVd213 bp。利用多重PCR和单一PCR分别对50份田间苹果样品进行病毒检测,结果显示,各样品多重PCR检测与单一PCR检测结果一致,表明本研究建立的多重RT-PCR方法可准确、快速、高效地检测单一或复合侵染的5种苹果病毒。

苹果茎沟病毒侵染对嘎拉苹果果实品质的影响

为了明确苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)侵染对苹果果实品质的影响,以单一接种ASGV的嘎拉苹果盆栽树为材料,测定果实单果重、纵横径、硬度、维生素C、可溶性固形物、糖酸组分、花色苷组分以及香气物质含量等。结果表明,与健康植株相比,感染ASGV植株的果实纵横径无明显变化,单果重、果实硬度、可溶性固形物含量和可溶性糖含量显著降低,有机酸含量增加,香气组分占比发生改变,果皮中4种花色苷的含量均显著降低。

葡萄试管苗热处理脱毒技术研究

为加快培育葡萄优良品种无病毒苗木,提高脱毒效率,开展了葡萄试管苗热处理脱毒技术研究。将携带葡萄扇叶病毒(GFLV)、葡萄斑点病毒(GFkV)、沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)、葡萄卷叶相关病毒-1(GLRaV-1)和葡萄卷叶相关病毒-2(GLRaV-2)的8个葡萄品种试管苗进行恒温热处理,对分离成活的62个茎尖进行RT-PCR和ELISA检测。结果显示,62个茎尖中,29个茎尖脱除了上述5种病毒,葡萄卷叶相关病毒-1、葡萄斑点病毒、葡萄扇叶病毒、葡萄卷叶相关病毒-2和沙地葡萄茎痘病毒的脱毒率分别为81.8%、80.0%、78.1%、75.0%和61.5%。采用试管苗热处理结合茎尖培养方法可获得良好的脱毒效果,适用于葡萄无病毒原种母本树的培育。

热处理脱除梨病毒技术研究

1996～1997年采用恒温热处理、变温热处理两种方法，对11个梨优新品种进行脱毒试验，获得10个梨品种38株无病毒单株。其脱毒率恒温热处理为58．1％，变温热处理为74．7％。

苹果热处理脱毒技术的改进

苹果热处理脱毒技术的改进张尊平，洪霓，姜修风，张少瑜（中国农业科学院果树研究所辽宁兴城１２５１００）苹果潜隐病毒发生普遍，我国各苹果产区现已栽培的多数品种潜带率已经饱和［１］。苹果病毒均经嫁接传染，随接穗、苗木及无性系砧木远距离扩散。迄今尚未发现传毒...

葡萄病毒及类似病害指示植物鉴定初报

葡萄指示植物可以鉴定多种葡萄病毒及类似病害。采用绿枝嫁接技术分别在指示植物110R、Kober5BB、河岸葡萄、沙地葡萄圣乔治和LN33上嫁接18个葡萄样品。结果表明,在河岸葡萄上观察到脉斑驳病典型症状,在110R上观察到脉坏死病典型症状,在沙地葡萄圣乔治上观察到斑点病和扇叶病典型症状,在Kober5BB上观察到叶片黄斑和皱缩症状,在LN33上观察到卷叶病症状。其中河岸葡萄显症最早,嫁接后3个月即表现症状,其余则在第2年春季开始表现症状。

我国葡萄主栽区卷叶病相关病毒种类的检测分析

田间调查200个葡萄品种,结果82个品种表现葡萄卷叶病症状,其中欧亚种群表现葡萄卷叶病症状的品种最多,发病率最高,发病症状最重;欧美杂种发病率和严重度均比欧亚种群低;未发现美洲种群的品种表现葡萄卷叶病症状。从58株表现卷叶病的葡萄上采集休眠枝条进行卷叶病毒ELISA和RT-PCR检测,葡萄卷叶病毒-1,2,3,4,5和7(GLRaV-1,2,3,4,5和7)等6种葡萄卷叶病毒的检出率分别为20.7%,17.2%,62.1%,3.4%,5.2%和15.5%。回收PCR产物进行克隆和序列分析,并将测序结果提交至GeneBank。以葡萄卷叶病毒HSP70基因序列构建系统进化树分析其进化关系,GLRaV-1、3和7,GLRaV-2、4和5分别聚为2大类,其中GLRaV-1和3,GLRaV-4和5在各自的聚类中关系更近。

葡萄病毒脱除技术研究进展

葡萄是我国的一种重要果树,在长期的无性繁殖过程中受扇叶病、卷叶病、皱木复合病和斑点病等多种病毒病的危害,给葡萄的产量和品质带来了严重的影响。在生产上,无病毒的繁殖材料是控制病毒病的主要途径。总结了茎尖培养、热处理、化学处理、体细胞胚再生、电疗法和超低温脱毒等方法的脱病毒原理及在葡萄病毒脱除中的应用效果,分析了不同方法所适合脱除的病毒种类。通过对上述研究进展的综述,以期为我国葡萄病毒脱除技术研究提供参考信息。

地高辛标记cDNA探针检测苹果茎痘病毒

Partial sequence(314 bp) of ASPV was cloned and used as a probe labelled with digoxigenin-11dUTP.The total RNA extracted from samples with Apple stem pitting virus and a series of dilutions of plasmid with ASPV-cDNA were detected by dot blot hybridization.The results showed that the probe was sensitive and specific.The probe couldn’t hybridize with total RNA of Apple stem grooving virus,Apple mosaic virus and Apple chlorotic leaf spot virus samples as well as negative control,only hybridized with that extracted from dormant shoot infected with ASPV.The sensitivity for detection of plasmid contained ASPV-cDNA was 1.64 μg.

沙地葡萄茎痘相关病毒RT-PCR检测

为建立快速、灵敏、可靠的沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)检测方法,以总RNA为模板,采用2组GRSPaV特异性引物对29个品种52株葡萄样品进行RT-PCR检测,并对扩增产物进行了测序和分析。结果表明,从20个品种25株葡萄样品中检测到GRSPaV,平均带毒株率为48.1%。外壳蛋白基因片段引物F1/R1从25个样品中扩增到905bp的特异片段,复制酶基因片段引物F2/R2从20个样品中扩增到498bp的特异片段,表明GRSPaV外壳蛋白基因比复制酶基因更加保守,RT-PCR检测时采用F1/R1则更为适宜。PCR产物测序结果与GenBank中登录的GRSPaV序列比较,同源性为97.90%～98.11%。

梨树病毒及其类似病害概述

病毒病的发生和危害给梨树生产带来重大的损失,引起世界各国极大的关心和重视.作者综述了目前国际上梨树病毒的研究现状、水平和动向;梨树病毒病种类及地理分布、传播途径;主要病毒发生和危害特点;鉴定方法和检测手段;防治对策及培育无病毒梨树的途径;并提出了当前国内梨树病毒病研究和防治上应解决的问题.

梨树苹果茎沟病毒的脱毒技术研究

１９９３—１９９６年，采用热处理材料茎尖培养及试管苗热处理方法，对１３个梨品种及矮化砧材料进行苹果茎沟病毒脱毒试验的结果表明，二者对茎沟病毒的脱除率分别较单纯茎尖培养高５７．０％和６２．４％。脱毒苗生根率和移栽成活率分别达７０％和８０％。

苹果坏死花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的建立

根据GenBank数据库已登录序列设计了12对苹果坏死花叶病毒(apple necrotic mosaic virus,ApNMV)的检测引物,通过引物筛选和体系优化,建立了以ApN1-F3/R3为引物的ApNMV的TB Green染料法实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测技术。该技术标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为97.3%,相关系数为0.997,灵敏度是常规PCR的100倍。采用q PCR方法对60份田间苹果样品进行检测,结果显示,常规PCR对ApNMV的检出率为51.7%,而qPCR的检出率为56.7%。该技术适用于田间样品的检测。

我国主要苹果病毒及其研究进展

苹果病毒病是危害苹果的一类重要病害,给产业的发展带来巨大的影响,树体感染病毒后很难根除。目前,防治苹果病毒病最根本的途径是培育无病毒繁殖材料,栽培无病毒苗木。本文对我国主要苹果病毒及其研究现状进行综述,为苹果病毒的脱除提供理论依据。

葡萄卷叶病毒3 RT-PCR检测技术研究

采用改进的二氧化硅吸附法和2组特异性引物进行葡萄卷叶病毒3(GLR aV-3)RT-PCR检测。结果表明,二氧化硅吸附法提取总RNA纯度好、浓度高、操作简便;随机引物合成cDNA能同时用于多种病毒及不同引物的PCR,可简化检测程序,降低检测费用;LC 1/LC 2引物进行RT-PCR检测,病毒检出率高于PU/PD引物和EL ISA方法。建立了规范、灵敏、稳定、快速、经济的GLR aV-3RT-PCR检测技术体系。

葡萄卷叶伴随病毒2实时荧光定量RT-PCR技术的检测应用

通过引物筛选和体系优化建立了葡萄卷叶伴随病毒2 Grapevine leafroll-associated virus 2(GLRaV-2)的SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量RT-PCR检测技术。该技术标准曲线扩增效率为102.2%,决定系数为0.999,最低检出限可达10-3稀释梯度,是常规RT-PCR的100倍。对不同季节和不同部位葡萄样品的检出率普遍高于常规RT-PCR。春夏秋季样品检出率分别为67%、89%和86%,比常规RT-PCR检出率分别高42%、28%和17%。冬季休眠枝条检出率最高(100%),与常规RT-PCR相同。夏季老叶柄和卷须、秋季和冬季枝条等样品检测效果最好,检出率均为100%。对来自我国17个省38个品种的116份田间葡萄样品检测结果表明,qRT-PCR共检测到10个样品为阳性,检出率略高于常规RT-PCR。

葡萄病毒B CP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化

葡萄病毒B Grapevine virus B(GVB)是葡萄皱木复合病中栓皮病的病原,为开展抗GVB转基因研究,本研究利用RT-PCR技术克隆GVB外壳蛋白(coat protein,CP)基因,与植物表达载体pRI 101-AN连接构建植物表达载体pRI-GVB CP。采用电击转化法将植物表达载体pRI-GVB CP导入农杆菌LBA4404,并利用农杆菌介导的叶盘转化法将外源基因导入西方烟‘37B’。共获得16个烟草再生株系,PCR检测其中3个株系为阳性,阳性株系播种获得的64株T_1代植株中有30株扩增到目的条带,阳性率为46.9%,表明目的基因GVB cp成功导入烟草并可成功遗传到子代。28株T_1代转基因植株接种病毒进行抗病性鉴定,其中有6株对接种病毒GVB具有抗性。

苹果母本树脱除病毒的研究

栽培无病毒苗木是防治苹果病毒病害的根本途径。1982—1989年,采用热处理、茎尖组织培养和热处理与茎尖培养相结合的3种脱毒方法,培育成21个品种的苹果无病毒母本树,连同交换、引[的共有41个品种的苹果无病毒母本树.保存于兴城苹果无病毒中心母本园中。1986年以来,分別向辽宁、山东、陕西等8省提供无病毒苹果原种苗1200多株,接穗1700多条。建立省级无病毒苹果母本园23处,繁育苹果无病毒苗木240万株,新建无病毒苹果园5.11万亩。无病毒树长势健壮,整齐一致,有明显的增产优势。为发展我国苹果无病毒化生产,提高产量,改善品质,解决病毒病防治问题,打下了良好基础。