靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响

为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,经DNA测序证实与设计完全一致.随后采用WST法及克隆形成抑制观察细胞增殖抑制情况、划痕实验来观察细胞迁移能力,流式细胞术、Hoechest33258染色、细胞线粒体膜电位改变检测细胞凋亡.在转染HepG2细胞48h后,pShPCNA组细胞PCNAmRNA表达明显下调,并出现明显的增殖抑制作用,明显抑制细胞克隆的形成和细胞的迁移力,且呈剂量-效应关系.流式细胞术检测发现:pShPCNA组细胞明显阻滞于G0/G1期,并出现明显的亚二倍体凋亡峰,出现明显的早期凋亡细胞群.荧光显微镜检测表明,细胞线粒体膜电位降低,并且细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学变化.上述结果表明,成功构建了靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,pShPCNA转染HepG2细胞48h后,能够显著抑制细胞的生长增殖、诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞于G0/G1期.

Bcr/abl融合基因的小干扰RNA对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的观察特异性bcr/abl融合基因的siRNA对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并化学合成bcr/abl融合基因融合位点b3:a221个核苷酸siRNA作用于K562细胞,用WST-8法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR检测bcr/abl mRNA表达水平;PI单染流式细胞仪检测细胞周期;AnnexinV-PI双染测定细胞凋亡比例;Hochest33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果①Bcr/ablsiRNA作用K562细胞24,48,72h后,明显抑制K562细胞增殖,各浓度组间的增殖抑制率差异无显著性(P>0.05);②Bcr/ablsiRNA能显著下调bcr/abl mRNA水平,各浓度组间差异无显著性(P>0.05);③Bcr/ablsiRNA作用组细胞周期阻滞于G1期;④Bcr/ablsiRNA作用后细胞出现明显的早期凋亡群,各浓度组间的早期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),细胞出现核固缩、核边集、凋亡小体等改变。结论特异性bcr/ablsiRNA可显着抑制K562细胞bcr/abl融合基因的表达,抑制细胞的增殖,诱导凋亡,但其作用未显示明显的剂量依赖性。

PEI介导PKC-α反义核酸对肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用

目的:研究聚乙烯亚胺(PEI)-PKC-α反义脱氧核寡酸(ASODN)对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。方法:RT-PCR检测肝癌SMMC-7721细胞、HepG2细胞PKC-α mRNA表达的差异,细胞增殖抑制实验检测PEI和ASODN混合的最佳质量比,WST法和克隆形成抑制实验检测细胞增殖抑制作用,免疫荧光检测PKC-α的表达水平。结果:SSMC-7721细胞PKC-α mRNA表达相对较高,PEI和ASODN的质量比为0.75/1时是PEI转染反义核酸的合适比例,对SMMC-7721细胞具有明显的增殖克隆抑制作用,且呈剂量-效应关系;ASODN和PEI-ASODN对SMMC-7721的IC50分别为16.6μmol/L和0.58μmol/L;PEI-ASODN能够有效抑制PKC-α蛋白的生物合成。结论:PEI-ASODN能显著抑制SMMC-7721细胞增殖和克隆形成,下调PKC-α蛋白的表达。

槐耳清膏诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的研究槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制。方法用终浓度为0、0.5、1、2、4、6 mg/mL的槐耳清膏和10μg/mL的5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用于SGC-7901细胞,分别于24 h和48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;48 h后收集各组胃癌SGC-7901细胞,琼脂糖凝胶电泳检测DNA,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA表达。结果MTT法检测显示,槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系(P<0.05);槐耳清膏6 mg/mL组的抑制率48 h后达到(77.9±2.3)%,5-Fu组为(53.4±1.6)%,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测显示,槐耳清膏4 mg/mL组的细胞凋亡率最高,早期凋亡细胞达33.2%;6 mg/mL组早期凋亡细胞6.3%,而晚期凋亡细胞为19.9%。RT-PCR结果显示,槐耳清膏组胃癌SGC-7901细胞survivin mRNA表达下调。结论槐耳清膏在体外对胃癌SGC-7901细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断槐耳清膏诱发胃癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关。

促肝细胞生长素改善单侧输尿管梗阻大鼠肾脏纤维化的研究

目的:研究促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promoting factor,pHGF)改善梗阻性肾病肾小管间质纤维化的疗效和机制。方法:17只SD大鼠随机分为假手术组(SOR)、单侧输尿管梗阻组(UUO)和pHGF治疗组。给药组用促肝细胞生长素pHGF(30μg.kg-1.d-1)大鼠腹腔注射,其余组给予等剂量生理盐水。14 d后收获大鼠。通过测定肾皮质羟脯氨酸含量比较纤维化改变;肾脏病理分析用H.E.和Masson染色,免疫组化检测TGF-β1,α-SMA,FN在肾组织中的表达。结果:肾组织羟脯氨酸定量UUO组明显高于SOR组,pHGF组,pHGF组介于二者之间,P(0.01;Masson染色SOR组仅在血管和基底膜处有绿染的胶原纤维,UUO组胶原成分增多,而pHGF组较UUO组明显改善,P(0.01。免疫组化显示pHGF能明显降低梗阻肾组织TGF-β1,α-SMA,FN的表达水平降低,与UUO组比较,P(0.01。结论:pHGF能有效缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化。

新型军用头盔微晶显示器

液晶显示器以其高清晰度、低功耗、重量轻和无辐射等一系列优异性能发展十分迅速。本文介绍了一种采用虚拟显示技术研制的新型军用头盔微晶显示器 ,主要用于单兵系统中数字图像、数据和文字信息的传递 ,通过头盔显示器士兵可看到计算机产生的图形数据、战场地图、敌方情报、己方位置等信息。该显示器选用动态向列液晶材料 ,将液晶显示器 (LCD)微晶片紧贴到集成电路硅片上 ,由这些电路直接驱动微晶材料 ,并用发光二极管 (LED)作光源 ,使红、绿、蓝点光源按域顺序在微晶显示器上产生全彩色图像。该微晶显示器还利用人眼的视觉原理 ,设计特殊光学系统 。

CTGF反义寡核苷酸对大鼠肾间质纤维化的影响

目的研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化的影响,探讨CTGF ASODN应用于临床的可能。方法32只SD大鼠随机分为假手术组(sham-operation group,SOR)、单侧输尿管梗阻组(unilateral ureteral obstruction group,UUO)、CTGF错义寡核苷酸(missense oligodeoxynucleotide,MSODN)对照组和CTGFASODN治疗组。第15天收获大鼠。碱水解法测定肾组织胶原含量;Masson染色观测肾皮质胶原染色情况;免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤连蛋白(fibronectin,FN)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在肾皮质中的蛋白表达。RT-PCR检测肾皮质中α-SMA的mRNA表达水平。结果肾皮质胶原检测CTGF ASODN组与UUO组、CTGF MSODN组比较,胶原含量减少(均P<0.01);Masson染色:CTGF ASODN组较UUO组、CTGF MSODN组胶原染色面积减少;免疫组化:CTGF ASODN与UUO组、CTGF MSODN组比较,肾皮质α-SMA,FN,TGF-β1的阳性表达面积、阳性染色强度均下降(均P<0.05);RT-PCR:CTGF ASODN组抑制α-SMA的mRNA表达水平与UUO组、CTGF MSODN组比较差异均有显著性(均P<0.05)。结论CTGF ASODN有效缓解UUO大鼠肾间质纤维化。

PKC-α反义核酸提高SMMC-7721细胞对化疗药物的敏感性研究

目的探讨蛋白激酶C(protein kinase c)反义核酸(antisense oligonucleotides,ASODN)联合5-Fu、HCPT、As2O3三种化疗药物对肝癌SMMC-7721的体外高效抑制作用。方法以聚乙烯亚胺(poly-ethylenei mine,PEI)作载体转染PKC-αASODN,用WST-8法检测单纯使用5-Fu、As2O3、HCPT三种化疗药物以及其联合PEI-ASODN对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,并分别计算抑制率和IC50。结果5-Fu、As2O3、HCPT与PEI-ASODN物联合使用后,其IC50分别降低到3.9μg/ml、2.67μmol/L、1.46μg/ml,化疗药物的敏感性分别提高到单用化疗药物的2.86、1.84和4.01倍。结论PEI介导的PKC-αASODN与化疗药物5-Fu、As2O3、HCPT联合使用,可提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性,通过与化疗药物的相加或协同作用,减少化疗药物的用量。

辛伐他汀联合5-FU对K562细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨辛伐他汀(Sim)联合5-FU对白血病K562细胞增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:体外培养人白血病K562细胞,用MTT法观察Sim联合5-FU对细胞的增殖抑制作用,实时荧光定量RT-PCR观察对bcr/abl融合基因mRNA表达水平的影响。流式细胞术、Hoechst33258染色观察Sim与5-FU联合应用诱导细胞凋亡的作用。结果:低浓度的Sim与5-FU联合应用在抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡,均较各单一高浓度用药组的作用明显增强,并且下调bcr/abl融合基因mRNA表达。结论:Sim与5-FU联用具有明显的协同抑制细胞增殖的作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡,下调bcr/abl融合基因的表达有关。

甲状腺显示胸腺样分化的癌1例临床病理分析

目的探讨甲状腺显示胸腺样分化的癌(carcinoma showing thymus-like differentiation,CASTLE)的临床特点、组织学特征及鉴别诊断。方法回顾性分析1例CASTLE的临床特点、组织学形态及免疫表型,并复习相关文献。结果镜下见肿瘤细胞呈大小不等的小叶状、巢状和条索状排列。瘤巢被纤细的血管穿插,周围被含有浆细胞的纤维间质包围。肿瘤细胞似合体细胞样或鳞状细胞样,胞质轻度嗜酸性,细胞核圆形或卵圆形,空泡状,可见小核仁,核形态较一致,核分裂象少见。免疫表型:肿瘤细胞表达CD5、CD117。结论 CASTLE临床罕见,易误诊,结合临床、组织学形态及免疫表型,必要时辅以电镜检查可明确诊断。

INSM1联合CD117在肺神经内分泌肿瘤中的表达及其诊断价值

世界卫生组织(WHO)第5版胸部肿瘤分类中肺神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasm,NEN)分为典型类癌、不典型类癌、大细胞神经内分泌癌(large cell neuroendocrine carcinoma,LCNEC)以及小细胞癌(small cell lung carcinoma,SCLC)4种亚型,常用的NEN免疫组化标记物包括Syn、Cg A、CD56和NSE。

促肝细胞生长素部分逆转巨噬细胞趋化因子和马兜铃酸Ⅰ诱导的人肾小管上皮细胞转分化

目的观察促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promoting factor,pHGF)对巨噬细胞趋化因子(monocyte chemo-tatic protein-1,MCP-1)协同马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acidⅠ,AAⅠ)诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡及上皮细胞-间质细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法体外培养的HKC随机分为:空白对照组、转分化模型组及不同浓度pHGF(0.15、1.5、15、150、1500ng/ml)处理组。转分化模型组采用MCP-1(0.1μg/ml)协同AAⅠ(10μg/ml)诱导HKC转分化模型;pHGF处理组采用不同浓度pHGF对转分化模型HKC进行处理;空白对照组常规培养。采用WST-8法和流式细胞术观察各组细胞增殖和凋亡情况;RT-PCR检测各组细胞α-SMA mRNA表达;免疫组化检测各组细胞α-SMA、TGF-β1、FN蛋白的表达。结果与空白对照组相比,转分化模型组、不同浓度pHGF处理组HKC细胞增殖抑制率,凋亡细胞所占比例,α-SMA mRNA表达均明显升高(P<0.01),提示转分化模型制备成功。与转分化模型组细胞相比,pHGF(150ng/ml)处理组HKC增殖抑制率明显降低(P<0.01),各浓度pHGF处理组HKC凋亡细胞所占比例均明显降低(P<0.01),HKC细胞α-SMA mRNA表达下调(150ng/ml pHGF处理组尤明显);α-SMA、TGF-β1、FN蛋白表达下调。结论pHGF(150ng/ml)可部分逆转MCP-1协同AAⅠ诱导的HKC增殖抑制、凋亡和EMT。

PKCα siRNAs有效序列的筛选及其对肺癌A549细胞的作用

目的探讨人蛋白激酶Cα(PKCα)小干扰RNA(siRNA)对肺癌A549细胞生长增殖及凋亡的影响。方法设计并化学合成6条PKCα siRNAs,转染A549细胞,通过改良MTT法及RT-PCR筛选;对3条效果较好的PKCα siRNAs,进一步采用克隆形成抑制实验、Hoechst 33258染色、PI单染和AnnexinⅤ/PI双染以及Western blot检测。结果6条PKCα siRNAs均显著下调了PKCα mRNA水平;除No.5siRNA外,其他5条siRNA均显著地抑制了A549细胞增殖(P<0.05)。3条效果较好的PKCα siRNAs转染组PKCα蛋白的表达显著下调,克隆形成抑制率、亚二倍体百分率和早期凋亡细胞比例均显著高于对照组(P<0.05),并出现了核固缩、边聚和裂解等凋亡形态学变化。结论本实验发现3条能显著抑制A549细胞增殖并诱导其凋亡的PKCα siRNAs。

肺平滑肌瘤性错构瘤合并肺腺癌1例

患者男性,73岁,因咳嗽、咳痰2个月入院。胸部CT示左上肺尖后段近叶间胸膜处见一类圆形结节状密度增高影,形态欠规则,大小18 mm×16 mm,边界模糊,牵拉邻近胸膜,平扫CT值约38 HU,增强扫描呈轻度强化,考虑周围型肺癌。左下肺后基底段胸膜下见一结节影,边界清楚,大小17mm×13 mm,CT值约14 HU,考虑错构瘤。

伴淋巴上皮涎腺炎样特征的胸腺增生临床病理学观察

目的探讨伴淋巴上皮涎腺炎样特征的胸腺增生临床病理学特征、免疫组化表型及鉴别诊断。方法收集2例LESA样胸腺增生患者的临床病理学资料,通过光镜形态学观察、免疫组织化学染色、原位杂交、Ig基因重排检测,并复习相关文献。结果2例患者中,男性1例,女性1例,发病年龄56和66岁(平均年龄61岁)。肿瘤最大径6 cm、13 cm。镜下:低倍镜下肿瘤呈分叶状结构,叶状结构周围为脂肪组织;具有生发中心的淋巴滤泡增多,滤泡间区可见浆细胞;胸腺上皮细胞增生,可见大量胸腺小体,胸腺上皮呈岛状、巢状,并相互汇合形成梁状结构;囊性变,囊壁内衬胸腺上皮,囊内见均质嗜酸性物及胆固醇裂隙,常伴异物巨细胞反应;淋巴细胞浸润胸腺上皮形成淋巴上皮病变。免疫组织化学CD20、CD79α示B细胞,CD3、CD5示T细胞,CK、CK19显示淋巴上皮病变,原位杂交EBER阴性,未检测到Ig基因发生单克隆重排。结论LESA样胸腺增生类似于涎腺良性淋巴上皮病变,是胸腺增生的一种新病理学形态,镜下主要表现为淋巴样组织浸润和淋巴上皮病变,预后良好,手术切除后,无复发和转移。

羽扇豆醇联合miR-145-5p对前列腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨羽扇豆醇(lupeol)联合微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对前列腺癌细胞株LNCaP增殖与凋亡的影响。方法:将hsa-miR-145-5p和lupeol作用于LNCaP细胞24、48和72 h后用MTT法检测细胞活力抑制率;PI单染流式细胞术检测细胞周期;annexin V/PI双染流式细胞术和TUNEL实验检测细胞凋亡;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;细胞集落形成实验计算集落形成抑制率。结果:细胞对照组、非特异性对照组和溶剂组未出现有效的LNCaP细胞活力抑制、迁移抑制和侵袭抑制,而hsa-miR-145-5p组和lupeol组细胞活力、迁移和侵袭受到显著抑制,并出现早期凋亡;联合用药(hsa-miR-145-5p+lupeol)组比单独用药组出现更有效的生长抑制作用。结论:hsa-miR-145-5p和lupeol均可抑制LNCaP细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导体外早期凋亡;lupeol可增强hsa-miR-145-5p对LNCaP细胞的抑增殖和促凋亡作用。

FDC网扩大的套细胞淋巴瘤病理特征及预后因素分析

套细胞淋巴瘤(MCL)是一类比较少见的B细胞侵袭性非霍奇金淋巴瘤。由形态较单一的小至中等大小的淋巴样细胞构成,核轻微至显著不规则,类似于中心细胞,伴有CCND1的易位。淋巴结是最常累及的部位,脾、骨髓也是较常见部位。此外,最常见的结外累及部位是胃肠道和Waldeyer环。主要见于老年男性,预后差,中位生存期3-5年左右,大多数患者不能治愈[1]。现回顾性分析10年来广州市番禺区中心医院和佛山市南海区人民医院病理科诊断的MCL29例,分析其组织病理形态、免疫表型,探讨其可能的预后因素。

乳腺实性乳头状癌中MUC系列的表达及意义

目的 探讨乳腺实性乳头状癌(SPC)免疫组化MUC系列染色表达情况与临床病理特征的关系。方法 收集24例SPC患者的临床病理学资料,观察光镜形态学、免疫组织化学染色,特殊染色。并与DCIS、导管内乳头状瘤伴DCIS进行对比,分析MUC系列染色表达情况。结果 24例SPC中,年龄32~82岁(平均年龄68岁,中位年龄71岁),肿瘤直径1~3 cm,平均1.8 cm。镜下形态:原位SPC病变导管膨胀性扩张形成圆形界限清楚的结节状团块。肿瘤细胞呈实体性增生充填整个导管腔,瘤细胞间有不明显的纤维血管轴心,轴心周围细胞呈栅栏状排列或围绕轴心形成假菊形团。浸润性SPC缺乏肌上皮细胞并有不规则的轮廓,并在结缔组织间质中形成地理拼图模式,以及不规则实性乳头状巢浸润脂肪组织。免疫表型:ER、PR呈80%~100%强阳性,阳性率100%,HER-2均阴性,Ki-67为5%~35%。SPC、DCIS和导管内乳头状瘤伴DCIS三者MUC系列表达情况:MUC1在三者中均出现弥漫胞质阳性及腔缘阳性;70.8%的SPC中含黏液细胞胞质(包括印戒样细胞)表达MUC2,分布情况与黏液卡红染色和AB染色阳性细胞一致,而对照组均不表达MUC2;MUC4在SPC中显示局灶或部分区域胞质阳性,阳性率为62.5%,导管内乳头状瘤伴DCIS显示局灶胞质阳性,阳性率为40%,DCIS为阴性;MUC5AC在三者中均表现阴性;MUC6在SPC中显示弥漫性中至强的胞质阳性,阳性率为87.5%,而对照组均显示阴性。结论 MUC2、MUC6联合CK5/6、P63、CgA、Syn、CD56、ER、PR等染色使用有助于SPC的诊断。

单纯型乳腺黏液癌临床病理分析

目的探讨乳腺单纯型黏液癌的病理特征及预后。方法收集我院乳腺癌患者1128例,其中单纯型乳腺黏液癌患者32例(2. 8%),分析单纯型黏液癌的组织形态、免疫组化、淋巴结转移情况及预后,并复习相关文献。结果 32例患者均为女性,年龄41~83岁,中位年龄54岁,平均年龄61岁。肿瘤直径0. 7~8.5cm,中位直径2. 9cm,平均直径3. 5cm。肿瘤细胞均为低-中级别核,40%为富于细胞型黏液癌,60%为少细胞型黏液癌。其中1例出现同侧腋窝淋巴结转移,余病例未见淋巴结转移。ER阳性率100%,PR阳性率100%,Ki-67增殖指数5%~40%,2例Her-2显示过表达。随访9~99个月,3例失访,1例术后(19个月)出现淋巴结转移,1例术后(18个月)出现胸壁复发。该2例单纯型乳腺黏液癌Her-2显示过表达,Ki-67增殖指数分别为30%、15%。结论在ER、PR高表达的黏液癌中,Her-2阳性的单纯型乳腺黏液癌预后差于Her-2阴性的单纯型乳腺黏液癌。