兰州地区乙型及丙型病毒性肝炎基因型分布研究

目的探讨兰州地区乙型肝炎病毒(HBV)与丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布特点。方法采用PCR-荧光探针法对2018年1月至2023年8月在该院就诊的1130例HBV感染者、1781例HCV感染者进行基因型检测。采用SPSS26.0统计学软件进行数据分析。结果HBV感染者基因型分布以C型最多,为925例(82.0%),其次为B型124例(11.0%);B、C、D基因型间患者性别分布比较,差异无统计学意义(χ^(2)=3.66,P=0.09),而在各年龄段患者中比较,差异有统计学意义(χ^(2)=33.88,P=0.01)。HCV感染者基因型分布主要为2a型930例(52.2%),其次为1b型737例(41.4%);各基因型间患者性别分布比较,差异有统计学意义(χ^(2)=46.31,P=0.01);各年龄段患者1b、2a基因型分布比较,差异有统计学意义(χ^(2)=18.36,P=0.01)。结论在兰州地区病毒性肝炎患者中,HBV C型与HCV 2a型为主要感染基因型;HBV B、C、D型分布与年龄有关;HCV各基因型分布与性别有关,HCV 1b、2a型分布因年龄不同而有差异。

炎症小体及细胞焦亡在肠道稳态中的研究进展

炎症小体是一种细胞内多蛋白复合物,主要包括NLRP3、AIM2、NLRP6、NLRP12等亚型。识别相关刺激后,炎症小体进行组装并激活caspase-1,激活的caspase-1促进IL-1β和IL-18成熟和分泌。另外,活化的caspase-1也可裂解gasdermin D(GSDMD),导致特殊形式的细胞死亡——细胞焦亡。肠道稳态在维持机体健康中起重要作用,而炎症小体及细胞焦亡通路在肠道稳态维持中发挥重要作用。本文主要阐述炎症小体及细胞焦亡在肠道稳态维持中的最新研究进展。

2017-2022年某三甲医院血流感染病原菌临床特征及耐药趋势分析

目的研究分析2017-2022年血培养分离细菌的临床分布情况及对主要抗菌药物的耐药性,为临床抗感染方案的选择和院内感染的防控提供指导。方法收集2017年1月-2022年12月兰州大学第二医院阳性血培养分离菌株,采用全自动微生物质谱检测系统VITEK MS、全自动细菌鉴定及药敏分析系统VITEK2 Compact以及纸片扩散法进行菌株鉴定和抗菌药物敏感性实验,WHONET 5.6软件对菌株的临床科室分布及耐药情况进行统计分析。结果检出非重复病原菌5094株,其中革兰氏阴性菌2632株(51.67%),主要有大肠埃希菌(20.95%)、表皮葡萄球菌(12.94%)、肺炎克雷伯菌(9.23%)、金黄色葡萄球菌(7.68%)等,分布科室主要有重症医学科(19.34%)、普外科(19.18%)、儿科(17.03%)等。大肠埃希菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率下降至0.60%,鲍曼不动杆菌对多种抗菌药物的耐药性呈持续上升趋势,对美罗培南的耐药率由2017年的62.50%上升至2022年的81.00%,铜绿假单胞菌对头孢他啶近6年的平均耐药率为25.30%,金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率在90.00%以上,屎肠球菌对万古霉素100.00%敏感。碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的检出率2018年达到29.10%,2022年下降至14.70%,但依旧高于甘肃省以及全国的平均检出率。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率由2017年的65.10%下降至2022年的26.40%,超广谱β-内酰胺酶阳性菌株检出率2017年为44.20%,2022年为15.50%。结论血培养分离菌株种类地区差别不明显,但在科室分布、对抗菌药物耐药性及其变化趋势均存在不同程度的地区差异性,规范血培养检测,做好本地区细菌耐药监测对血流感染疾病诊疗、院内感染防控及遏制微生物耐药有着非常重要的意义。

重组人KGF基因减毒沙门氏菌菌株的构建及鉴定

目的构建携带人角质细胞生长因子(KGF)基因真核表达载体的减毒沙门氏菌,并进行稳定性检测及体外表达鉴定,为探索制备针对高原急性肺损伤的细胞因子保护剂提供理论和实验依据。方法采用RT-PCR法从正常人皮肤组织总RNA扩增出KGF cDNA全长,测序正确后将其定向插入到pcDNA3.0(+)质粒BamHⅠ和EcoRⅠ之间;以电转化法将构建成功的质粒转化入减毒沙门氏菌Ty21a中,获得重组减毒沙门氏菌菌株TPK,并将其在卡那霉素(+)和卡那霉素(-)的LB培养板上分别传代培养40代,每隔10代提取质粒进行PCR及酶切鉴定;TPK菌株转染A549细胞,转染24 h及48 h后以RT-PCR及ELISA法检测KGF基因及蛋白表达水平。结果成功构建了携带KGF基因的重组减毒沙门氏菌TPK,其可稳定遗传,不因无选择性压力而使质粒丢失,并能在体外稳定表达KGF基因及蛋白。结论携带KGF基因减毒沙门氏菌TPK的成功构建和体外稳定表达为进一步研究角质细胞因子KGF对肺损伤的保护作用提供了实验依据。

携带IL-2和NK4双基因真核共表达载体的减毒沙门菌株的构建

目的构建携带IL-2/NK4双基因真核表达载体的减毒沙门菌菌株。方法利用分子克隆技术将IL-2及NK4基因分别插入PIRES-SEQ质粒IRES序列的上下游中,构建为双基因真核共表达载体pCMV-IL-2-IRES-NK4,将该质粒利用脂质体转染入细胞,采用ELISA及PCR法检测pCMV-IL-2-IRES-NK4转染细胞后IL-2/NK4基因及蛋白表达情况。将所构建质粒以电转化法转化减毒沙门菌菌株Ty21a,从而得到能够表达IL-2/NK4双基因的重组减毒沙门菌菌株。结果 ELISA及PCR法检测该质粒可在细胞中以较高的效率稳定表达IL-2及NK4基因和蛋白;同时表达IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株TPIN构建成功。结论本研究成功构建了携带IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株。

冠心病患者半胱氨酸蛋白酶抑制剂C及同型半胱氨酸水平与冠状动脉病变程度的关系

目的探讨冠心病患者半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)、同型半胱氨酸(Hcy)水平与冠状动脉病变程度的相关性。方法根据冠状动脉造影结果将研究对象分为冠心病组(268例)和非冠心病组(268例),统计冠心病组患者病变累及支数,并按冠状动脉狭窄程度计算Gensini积分。分别测定并比较两组血清Hcy、Cys C等生化指标结果,分析Cys C、Hcy水平与Gensini积分、病变支数的相关性。结果冠心病组Cys C、Hcy水平明显高于非冠心病组(P均<0.01);Cys C、Hcy水平与Gensini积分呈正相关(r分别为0.245,0.232,P均<0.01);多元逐步回归分析表明Cys C、Hcy对Gensini积分的影响有统计学意义(β=20.255,t=2.749,P<0.05;β=0.327,t=2.093,P<0.05);随着病变支数的增加,Cys C、Hcy水平与Gensini积分均增高(P<0.05)。结论Cys C和Hcy水平增高在一定程度上可以反映冠状动脉病变的严重程度,可为临床开展危险分层与治疗提供参考。

兰州地区儿童过敏原特异性IgE定量检测分析及临床意义

目的探讨兰州地区儿童过敏原特异性IgE定量检测分析及临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验对1 184例疑似过敏儿童进行食入及吸入过敏原血清总免疫球蛋白E(tIgE)和特异性免疫球蛋白E(sIgE)抗体检测,分析其在不同性别和年龄群患儿中的差别。结果在1 184例受试者中,96.62%呈现出tIgE阳性,而36.15%呈现出sIgE阳性。所有吸入性过敏原中,猫/狗毛皮屑检出率最高(12.5%),其次是霉菌(9.12%);食入性过敏原中牛奶检出率最高(6.76%),其次是蛋清(3.55%)。常见过敏原检出率的比较,差异有统计学意义(χ2=80.57,P<0.05)。不同年龄组患儿艾蒿/豚草花粉和牛奶的检出率差异有统计学意义(P<0.05);同时艾蒿/豚草花粉的检出率随年龄增长而升高,牛奶检出率随年龄增加而降低。过敏原阳性患儿中,1种过敏原阳性218例(50.93%),2~3种过敏原阳性178例(41.59%),4种及以上过敏原阳性32例(7.48%)。不同年龄组间比较,差异无统计学意义(χ2=0.222,P=0.895)。结论兰州地区吸入性过敏原以猫/狗毛皮屑为主,食入性过敏原以牛奶为主,血清过敏原IgE测定有利于了解患儿的过敏状态,有助于过敏性疾病的诊断。

肿瘤生物治疗的新技术——靶向基因治疗

目前，恶性肿瘤已经成为影响人类健康和危及生命的主要疾病。传统的肿瘤治疗方法主要有手术、放疗和化疗，尽管能在短时间内取得较好的效果，但是肿瘤细胞自身的毒副作用和残留成分往往会导致肿瘤细胞的转移复发率增加，而且它对于机体自身的正常细胞尤其是造血系统和免疫系统也会造成严重的损害，因此对于已发生肿瘤转移的患者很难达到较好的远期疗效。 Rosenberg 等[1-2]已经于20世纪80年代建立了以生物治疗技术为基础的现代肿瘤理论。随着肿瘤分子机制的进一步发展，基于生物技术的治疗模式已成为当今肿瘤治疗的第4种治疗模式。作为当今发展最快的领域之一，肿瘤生物治疗主要包括基于分子靶向药物、基因、细胞因子和免疫学方法等的治疗[3-9]。由于肿瘤生物治疗具备特异性较高而毒副作用较低的优点，目前已广泛应用于临床工作中。但是治疗基因如何高效特异的向肿瘤组织传递以及如何向临床进行转化就成为目前肿瘤基因治疗迫切需要解决的重大问题，也是当前肿瘤治疗研究的热点。

血清胱抑素C及C1q水平与冠状动脉支架内再狭窄的相关性

目的初步探讨血清胱抑素C (CysC)及血清补体(C1q)水平与冠状动脉支架内再狭窄(ISR)的相关性。方方法选择141例接受经皮冠状动脉介入术(PCI)并于术后1年复查冠状动脉造影患者,检测血清CysC、C1q水平,分析其与ISR的相关性。结果再狭窄组CysC水平明显高于未狭窄组,C1q水平显著低于未狭窄组,差异有统计学意义(P <0.05)。Logistic回归分析显示血清CysC、C1q水平与ISR相关(P <0.05)。结论血清C1q水平可能是ISR的保护因素,血清CysC水平可能是ISR的危险因素。

宫腔脱落细胞中p53、ki-67、bcl-2、bax基因的表达及意义

目的采用实时荧光定量PCR法检测p53、ki-67、bcl-2、bax基因在子宫内膜癌及正常人宫腔脱落细胞中的表达变化水平,探讨宫腔脱落细胞中p53、ki-67、bcl-2、bax基因的表达变化在子宫内膜癌早期诊断中的意义。方法收集健康志愿者及子宫内膜癌患者宫腔脱落细胞样本共90例;提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测目的基因的表达变化水平;所有实验数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。结果荧光定量PCR结果显示,p53基因在正常人宫腔脱落细胞中未检测到表达,随着恶性程度升高,表达量显著升高(P<0.01),ki-67的表达在正常人中表达量最低,随着恶性程度升高,表达量逐渐升高(P<0.05),bcl-2基因的表达逐渐降低(P<0.05),bax/bcl-2值随着恶性程度增高而降低。结论 p53、ki-67、bcl-2、bax基因的表达量在子宫内膜癌发生发展过程中呈一定的变化趋势,提示p53、ki-67、bcl-2、bax基因可作为子宫内膜癌早期诊断的分子标志物。

倍半萜化合物Chabranol诱导低分化胃癌细胞凋亡的分子机制

目的探讨倍半萜化合物Chabranol诱导低分化胃癌细胞BGC-823发生凋亡可能的分子机制。方法采用透射电镜观察凋亡细胞超微结构的变化;实时荧光定量PCR法检测Chabranol处理前后各组细胞中凋亡相关基因p53、Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3的转录表达水平。结果在高倍透射电镜下,Chabranol处理组BGC-823细胞出现早期凋亡现象,细胞核中异染色质明显增多,髓样体增多,而对照组BGC-823细胞结构完整。实时荧光定量PCR结果显示:与对照组比较,Chabranol处理后的BGC-823细胞p53、Bcl-2和Survivin降低,Bax和Caspase-3增加,均P<0.05,差异有统计学意义;GES-1、MKN28、SGC-7901细胞各基因的相对表达量与对照组比较,P>0.05,差异无统计学意义。结论倍半萜化合物Chabranol具有潜在的抗胃癌活性,有可能成为治疗低分化胃癌的新药物,其致低分化胃癌细胞凋亡的分子机制与p53、Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3基因的异常转录表达相关。

NFKB1基因启动子区-94ins/del ATTG多态性与冠心病关联性的荟萃分析

目的探讨NFKB1基因启动子区-94ins/del ATTG多态性与冠心病（CHD）的关联性。方法计算机检索Pub Med、CNKI、万方等数据库,获取有关NFKB1基因启动子区-94 ins/del ATTG多态性与CHD关联性的病例-对照研究,用Stata 11.0软件在等位基因、纯合子、显性和隐性基因模型下进行荟萃（meta）分析。根据异质性检验结果选择固定或随机效应模型进行数据合并,并采用Begg＇s漏斗图和Egger＇s检验评价发表偏倚。结果共纳入8篇文献,研究对象共14 649例;Meta分析结果显示,携带D等位基因的人群,CHD易感性增加（OR=1.28,95%CI=1.22～1.35,POR〈0.01）;基因型为DD的人群发病风险高于II基因型（OR=1.32,95%CI=1.19～1.47,POR〈0.01）;显性模型中DD＋ID基因型的人群发病风险高于II基因型的人群（OR=1.15,95%CI=1.07～1.24,POR〈0.01）;隐性模型中DD基因型的人群发病风险高于ID＋II基因型（OR=1.26,95%CI=1.15～1.38,POR=0.002）。亚组分析结果显示,NFKB1基因启动子区-94ins/del ATTG多态性与CHD易感性在亚洲及欧洲人群中有关联,而在北美洲人群中并未表现出这种相关性。结论 NFKB1基因启动子区-94ins/del ATTG多态性与CHD的易感性显著相关,但主要表现在亚洲和欧洲人群。

Sry基因监测腺病毒介导肝细胞生长因子修饰的骨髓间充质干细胞移植在大鼠烫伤创面愈合中的作用

目的制备地高辛标记的Sry探针，监测局部异体移植携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒（Ad—HGF）修饰的骨髓间充质干细胞（BMSCs）在烫伤创面愈合中的作用。方法用雄性大鼠肝组织通过聚合酶链反应法克隆Sry基因，并将其构建至TEasyVector上，用地高辛标记法制备Sry基因原位杂交探针。密度梯度离心法体外分离培养雄性Wistar大鼠BMSCs，并转染Ad-HGF。复制16只背部深Ⅱ度烫伤雌性大鼠模型，于造模成功后，将Ad-HGF修饰的BMSCs一次性多点注射于创面真皮下。21d后，处死大鼠，取愈合创面新生组织和正常组织制作石蜡切片，原位杂交法检测组织切片中Sty基因的表达。结果①从8只雄性大鼠中成功克隆出Sry基因；②制备出地高辛标记的Sry探针；③16只雌性大鼠深Ⅱ度烧伤模型复制成功，用Ad-HGF修饰的BMSCs治疗后，原位杂交法证实全部雌鼠创面新生组织中有Sry表达，而正常组织中未检测到。结论外源移植的BMSCs参与了大鼠烫伤创面的修复，Sry基因可作为细胞追踪标记，为细胞治疗追踪技术及利用BMSCs治疗创伤的研究提供依据。

口服重组减毒沙门菌TPIN抗小鼠黑色素瘤研究

目的观察重组沙门菌TPIN对小鼠黑色素瘤治疗的作用。方法应用小鼠黑色素瘤B16细胞给16只C57纯系小鼠建立荷黑色素瘤动物模型;将模型组随机分为对照组(PBS组)及治疗组(TPIN),每组各8只。治疗组应用重组减毒沙门菌TPIN菌灌胃,对照组PBS缓冲溶液灌胃,每周1次共4次,在此期间记录瘤体体积。最后1次灌胃1周后,荷瘤小鼠心脏采血后处死,检测CD3+/CD4+、CD3+/CD8+的T淋巴细胞表型的变化,瘤组织γ-干扰素(IFN-γ)含量及各组织脏器CMV的表达水平。结果成功构建了荷瘤小鼠模型,与治疗组比较,对照组肿瘤体积差异有显著性(P<0.01);治疗组血CD3、CD3+/CD8+、肿瘤组织中IFN-γ表达量显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),治疗组小鼠的肠、肾、肝、脾、胃、肿瘤组织中均可扩增出与CMV瘤体大小相符的片段而对照组未扩增出相应片段。结论口服DNA疫苗TPIN免疫荷黑色素瘤小鼠可激起小鼠体内有效的免疫反应并能有效抑制瘤体的生长。

兰州地区2972例孕妇TORCH血清学检测结果的临床分析

检测兰州地区孕妇TORCH感染情况,调查区域内的阳性感染率,从而为区域内孕妇保健提供临床参考。选取2016-2017年期间于兰州大学第二医院行孕检,并通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TORCH-IgM抗体的女性受检者2972例,分析其阳性结果,对比不同季节孕妇TORCH感染阳性率有无明显差异。TORCH-IgM抗体阳性受检者共40例,阳性率为1.35%,其中以单纯疱疹病毒和弓形虫感染阳性率最高,为0.40%。调查发现夏季为单纯疱疹病毒感染的相对高发期,而春季为巨细胞病毒和弓形虫感染的高发期。孕妇应在孕早期行血清TORCH筛查,采取针对性措施积极预防TORCH感染,从而尽早发现宫内感染,提高生育质量。

实时荧光定量PCR检测宫腔脱落细胞中P27^(kip1)及cylin E基因的表达及意义

目的探讨宫腔脱落细胞中P27kip1、cyclin E基因的表达在子宫内膜癌早期诊断中的意义。方法收集健康志愿者及子宫内膜癌患者宫腔脱落细胞样本共80例;提取总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测目的基因的表达,比较健康志愿者及子宫内膜癌患者宫腔脱落细胞中P27kip1、cyclin E基因表达量的差异。结果荧光定量PCR结果显示,P27kip1基因在健康志愿者宫腔脱落细胞中的表达显著高于子宫内膜癌患者,差异有统计学意义(P<0.05),并随恶性程度升高,P27kip1的表达水平降低,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);cyclin E基因的表达随恶性程度的增高而增高,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论联合检测P27kip1和cyclin E基因可作为子宫内膜癌早期诊断的依据。

含pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌的制备及其稳定性研究

目的制备含pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌TPIN并检测其稳定性。方法将pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒转进减毒沙门菌Ty21a感受态,制备成重组的减毒沙门菌菌株TPIN;将TPIN在含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)的LB培养板传代培养至第10代、20代、30代和40代时用灭菌的牙签分别挑取含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB培养基上的单克隆菌落,质粒提取、PCR扩增酶切鉴定;TPIN转染HepG2细胞后采用RT-PCR检测IL-2和NK4基因表达,ELISA法检测细胞培养上清IL-2和NK4蛋白。结果构建菌株经提取质粒、酶切、PCR扩增获得目的基因IL-2、NK4特异条带;在氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB培养板传代培养40代的TPIN菌株均可扩增并双酶切出目的基因IL-2及NK4;TPIN体外转染HepG2细胞后,IL-2及NK4表达水平均显著升高。结论重组携带IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株TPIN可稳定遗传,不受无选择性压力的影响而丢失质粒,且在体外IL-2、NK4基因及蛋白可以稳定高效表达。

TPIN对HepG2肝癌细胞生物学特性的影响

目的研究重组减毒沙门菌菌株TPIN对HepG2细胞生物学性能的影响。方法 TPIN转染HepG2细胞36 h时收集细胞表达上清,MTT法检测表达产物对HepG2细胞生长的作用;Transwell迁移实验观察TPIN表达产物对HepG2细胞迁移的影响;将不同剂量表达产物分别加入甲基纤维素小碟,并将小碟小心放入鸡胚绒毛尿囊膜,37.8℃继续孵化3 d,观察IL-2/NK4表达产物体外对鸡胚绒膜尿囊膜血管的效应。结果 TPIN表达上清显著抑制HepG2细胞增殖的活性,且有一定剂量依赖效应;表达产物可明显抑制肿瘤细胞迁移,且明显抑制鸡胚绒膜尿囊膜血管形成。结论 TPIN在体外能高效转染肿瘤细胞,表达目的蛋白IL-2及NK4,且表达产物能够抑制HepG2细胞的增殖和迁移,对鸡胚绒膜尿囊膜血管的形成有抑制效应。

携带白细胞介素2和NK4双基因真核共表达质粒的构建及活性观察

目的 构建同时携带白细胞介素2（IL-2）和NK4基因的真核表达载体（pIRES-IL-2-IRES-NK4）,观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景.方法 根据Pubmed上公布的IL-2及NK4 mRNA序列,设计扩增IL-2及NK4 cDNA的特异性引物,以PBV220-IL-2质粒和PCAGGS/hNK4质粒为模板,分别扩增IL-2及NK4基因,并将IL-2及NK4基因分别克隆在真核表达载体pIRES-SEQ的XhoI、MLuI位点和SalI、NotⅠ位点.获得同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4.该重组质粒转染肝癌细胞HepG2后,检测目的基因的转染表达及表达产物对HepG2细胞增殖的影响.结果 通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带IL-2和NK4双基因的真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4构建成功.用pIRES-IL-2-IRES-NK4转染HepG2细胞后24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,48 h时荧光更强;逆转录聚合酶链反应结果表明转染pIRES-IL-2-IRES-NK4质粒细胞的IL-2及NK4基因表达明显增强.酶联免疫吸附测定检测结果表明,转染组细胞较对照组细胞培养上清中IL-2及NK4蛋白表达水平明显增强.转染组48 h后的IL-2、NK4蛋白表达水平为2.139、1.956 mg/L,明显高于未转染组的0.492、0.620 mg/L.四甲基偶氮唑盐法结果表明转染真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4的细胞表达上清,有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,且有剂量效应关系.结论 本研究成功构建了同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4,该质粒可有效转染肝癌细胞,且转染细胞表达上清有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,提示该重组质粒有潜在防治肿瘤的应用前景.

人HIF-1α基因重组减毒沙门氏菌载体的构建及稳定性检测

利用RT-PCR方法从低氧预处理的A549细胞中获得HIF-1α基因片段,将其定向插入pIRES-SEQ质粒NheⅠ、MLuⅠ2个酶切位点之间,得到真核表达载体pIRES-HIF-1α;采用电转化方法将其电转化入减毒沙门氏菌Ty21α中,获得重组减毒沙门氏菌菌株TPH;转染A549细胞,RT-PCR法检测HIF-1α基因表达,ELISA方法检测HIF-1α蛋白表达;TPH菌株在氨苄青霉素(+)和氨苄青霉素(-)LB培养板上分别传代40代,每10代提取质粒进行PCR及酶切鉴定.结果表明:试验成功构建了携带HIF-1α基因的重组减毒沙门氏菌TPH,其可在体外细胞中稳定表达HIF-1α基因及蛋白,TPH可稳定遗传.