基于UPLC-Q-TOF-MS法的郁金水提物的化学成分研究

目的建立UPLC-Q-TOF-MS法分析郁金水提物的化学成分。方法采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,正离子模式时流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水(B),负离子模式时流动相为乙腈(A)-5 mmol·L^(-1)乙酸铵水(B),梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^(-1)。离子源为ESI离子源,正负离子模式下采集数据,利用一级质谱化合物的相对分子质量、分子式、二级质谱碎片离子信息等,并结合相关数据库、文献、以及对照品的信息等对其化学成分进行鉴定。结果从郁金水提物中共鉴定出52种化学成分,包括34种倍半萜类、4种二萜类、2种三萜类、4种姜黄素类、2种有机酸类和6种其他类化合物。结论 UPLC-Q-TOF-MS法可以准确快速地分析郁金中的化学成分,为郁金的药效物质基础、质量控制以及临床应用奠定基础。

抑郁症失眠大鼠模型的构建与评价

目的采用慢性不可预见性中度应激联合快速和慢性改良多平台水环境睡眠剥夺的方法复制抑郁症失眠大鼠模型,对两种造模方法比较,选择最佳造模方式。方法84只大鼠按体重随机分为空白组、环境对照组、慢性应激组、72 h睡眠剥夺组、慢性应激+72 h睡眠剥夺组、21 d睡眠剥夺组、慢性应激+21 d睡眠剥夺组,共7组,每组12只。应激造模14 d和复合造模结束后进行行为学测试大鼠抑郁失眠样行为,ELISA法检测大鼠血清中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)的含量以及下丘脑中谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)含量,HPLC-ECD测定大鼠下丘脑中NE、5-HT、DA含量。HE染色观察各组大鼠下丘脑的病理变化。结果与空白组相比,CUMS+72 h SD组和CUMS+21 d SD组大鼠均表现出体重增长率和摄食量显著下降,旷场实验中自主活动次数明显减少,粪便粒数增多,不动时间显著增长,糖水消耗率显著减少,睡眠潜伏期延长,睡眠时长明显缩短,其中后者表现更为显著;CUMS+21 d SD组大鼠血清中CRH、ACTH、CORT含量也明显升高,下丘脑中Glu含量显著增加、GABA含量显著减少,单胺递质含量降低,下丘脑神经元细胞排列紊乱、间隙变大、空泡样性状显著。结论采用慢性不可预见性中度应激联合每天18 h,连续21 d的改良多平台水环境睡眠剥夺的方法可稳定复制抑郁症失眠大鼠模型。

左归降糖解郁方对DD大鼠海马NVU神经元mEPSC的影响

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression, DD)大鼠海马神经血管单元(neurovascular unit, NVU)体外共培养体系的神经元微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic currents, mEPSC)频率及幅度的影响,探讨其对海马NVU培养体系的保护机制。方法有效构建海马NVU体外培养体系,采用免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定;采用高糖(150 mmol/L)联合皮质酮(200μmol/L)干预构建海马NVU细胞模型;采用全细胞膜片钳记录NVU体外共培养体系神经元mEPSC,比较各组NVU培养体系神经元mEPSC频率和电流幅度。结果经免疫细胞化学鉴定,NVU培养体系中细胞结构完整。与正常组和空白血清组相比,模型组大鼠海马NVU培养体系神经元mEPSC的频率和幅度均显著上升(P<0.01);与模型组相比,左归降糖解郁方血清组和阳性药血清组大鼠海马NVU体外培养体系神经元mEPSC的频率和幅度均显著下降(P<0.01);与阳性药血清组相比,左归降糖解郁方血清组大鼠NVU细胞培养体系神经元mEPSC频率和幅度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论左归降糖解郁方可降低DD大鼠海马NVU体外培养体系神经元mEPSC的频率和幅度,对海马NVU培养体系的具有调控作用。

复方柴金解郁片对慢性应激抑郁大鼠HPA轴及炎症因子的影响

目的:研究复方柴金解郁片对慢性应激抑郁模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)及炎症因子的影响。方法:连续慢性应激建立抑郁大鼠模型,用开野和水迷宫实验检测大鼠行为学变化,ELISA法检测大鼠血浆中促肾上腺皮质激素释放激素(corticosteroid-releasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、皮质酮(corticosterone,CORT)及血清中白介素8(interleukin-8,IL-8)、白介素18(interleukin 18,IL-18)、白介素10(interleukin 10,IL-10)的含量。结果:在抑郁大鼠模型中,复方柴金解郁片高剂量组(2. 7 g·kg-1)明显降低CRH,ACTH,CORT,IL-8,IL-18含量,显著升高IL-10含量。结论:复方柴金解郁片具有显著的抗抑郁效果,其抗抑郁机制可能与改善HPA轴及炎症因子水平有关。

基于线粒体自噬介导的凋亡探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁证海马突触微环境损伤的保护作用

目的:基于线粒体自噬介导的凋亡探讨左归降糖解郁方(ZGF)对糖尿病并发抑郁症(DD)海马突触微环境损伤的保护作用。方法:建立DD大鼠动物模型及模拟DD环境的体外细胞模型,实验设正常组、模型组、GluR2阻断剂(CNQX)组和ZGF组。采用免疫荧光法检测GluR2、Parkin、Cyt-C、SYN及PSD-95蛋白表达;mRFP-GFP-LC3自噬双标法检测海马神经元自噬流;JC-1法检测线粒体膜电位;MitoSOX法检测线粒体活性氧(ROS);Tunel染色法检测海马神经元凋亡;ELISA法检测Glu、5-HT、DA、ATP水平;旷场试验和强迫游泳试验评估大鼠抑郁样行为;透射电子显微镜观察大鼠海马神经元自噬小体;Western blotting检测大鼠海马组织中GluR2、Parkin、Cyt-C蛋白表达。结果:ZGF能有效抑制体外海马神经元线粒体自噬流、线粒体ROS释放及海马神经元凋亡(P<0.01),缓解线粒体膜电位下降、单胺神经递质失衡、突触前膜SYN及突触后膜PSD-95蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),同时改善DD大鼠抑郁样行为、线粒体自噬过度激活、单胺神经递质分泌不足,并显著调控GluR2-Parkin-Cyt-C信号通路相关蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:ZGF对线粒体自噬介导的海马神经元凋亡致DD海马突触微环境损伤具有明显的保护作用,这可能是其防治DD的重要机制。

地■西平马来酸盐对体外糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元变性损伤及凋亡的保护作用

目的研究地■西平马来酸盐(MK-801)对体外糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元变性损伤和凋亡的影响。方法海马神经元原代细胞取自受孕18 d SD大鼠胎鼠用皮质酮联合葡萄糖干预构建DD海马神经元细胞模型。将培养的海马神经元随机分为正常组、模型组、对照组和实验组。对照组给予体积分数10%的阳性药药物血清,实验组给予终浓度为10μmol·L-1的MK-801溶液,正常组与模型组均给予等量细胞培养液。造模干预18 h后,用四氮唑蓝(MTT)法检测海马神经元细胞活力,用尼氏染色检测海马神经元变性损伤情况,用Hoechst荧光染色检测海马神经元的凋亡情况,用高内涵细胞成像分析技术检测N-甲基-D-天冬氨酸受体(NR) 2种亚型NR2A和NR2B的蛋白表达。结果正常组、模型组及实验组海马神经元细胞活力分别为(100. 04±3. 26)%,(52. 55±2. 94)%和(65. 02±2. 96)%,NR2A平均荧光强度分别为(2038. 49±187. 03),(2378. 36±125. 99)和(1784. 81±102. 87),NR2B平均荧光强度分别为(1642. 52±122. 92),(1845. 79±108. 17)和(1453. 61±150. 80)。与正常组比较,模型组海马神经元细胞活力明显降低(P <0. 01),尼氏小体数量显著减少,神经元凋亡显著,NR2A和NR2B的蛋白表达量均明显升高(P <0. 01或P <0. 05);给予MK-801干预后可以逆转上述变化。结论 MK-801对体外DD大鼠海马神经元变性损伤及凋亡具有保护作用,其作用机制与下调NR2A和NR2B的蛋白表达量有关。