TGF-β3诱导骨髓间充质干细胞膜片成软骨分化

目的:探索转化生长因子β3(TGF-β3)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞膜片成软骨分化的潜能。方法:体外分离培养兔骨髓间充质BMSCs细胞,用含抗坏血酸培养基构建干细胞膜片,添加TGF-β3对干细胞膜片成软骨诱导分化。光镜、HE染色和Masson染色观察细胞形态、大体结构及组织学改变,阿利新蓝染色、Ⅱ型胶原(ColⅡ)免疫组化染色和RT-qPCR检测成软骨标志物ColⅡ和蛋白聚糖(PG)的mRNA表达及蛋白合成情况。结果:TGF-β3诱导成软骨分化14 d,镜下间充质干细胞生长良好,可用镊子钳夹起膜片状结构,可卷缩成团再展开成膜。HE染色显示细胞质及细胞外基质成分均被染成粉红色,其胞核为蓝色,细胞间呈分层状排列结构。Masson染色可见胞核染成蓝黑色,其细胞质染成粉红色,周围包绕着大量染成蓝色的胶原成分。阿利新蓝染色与ColⅡ免疫组化染色均为阳性,对照组阴性。实验组高表达软骨细胞特异性ColⅡ和PG的mRNA(P<0.05)。结论:抗坏血酸诱导构建的干细胞膜片经TGF-β3诱导,能成功向软骨分化及构建软骨细胞膜片。

抗坏血酸作用下兔骨髓间充质干细胞外基质分泌与结构改变

背景:细胞外基质对干细胞的影响是目前组织工程学的研究热点,而关于自身细胞外基质的合成、分泌及对细胞的影响却少有研究报道。目的:体外培养兔骨髓间充质干细胞,观察抗坏血酸对其细胞外基质与整体结构改变的影响。方法:通过差速贴壁法分离获取兔骨髓间充质干细胞,流式细胞技术检测CD44、CD45、CD31的表达。将兔骨髓间充质干细胞用含抗坏血酸(20 mg/L)的培养基进行干预,观察细胞形态、大体结构、超微结构及组织学改变,RT-PCR检测细胞外基质相关基因的表达。结果与结论:(1)经流式细胞学分析,第2代骨髓间充质干细胞中95%以上的细胞表达CD44,而CD45与CD31的表达极低;(2)抗坏血酸干预后,骨髓间充质干细胞增殖良好,细胞间界限难以分辨,干预10-14 d后,形成了"膜片状"结构;(3)苏木精-伊红染色后可见细胞分层排列,Masson染色后可见大量细胞外基质成分,透射电镜下可见胞内含大量内质网与"囊泡样"结构;(4)与未经抗坏血酸干预的对照组相比较,经抗坏血酸干预的实验组纤维连接蛋白的mRNA表达显著升高(P<0.05),而Ⅰ型胶原的mRNA表达虽稍提高,但两组间差异无显著性意义;(5)结果表明,抗坏血酸促进了兔骨髓间充质干细胞的增殖转化、细胞外基质的合成分泌、膜片状结构的形成,在组织工程应用中具有巨大潜能。

2型糖尿病患者糖化血红蛋白水平与心肌损伤指标的关系

目的 ：探讨2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者糖化血红蛋白（Hb A1c）水平与心肌损伤指标肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、磷酸肌酸激酶同工酶∕肌酸激酶（CK-MB/CK）、高敏肌钙蛋白T（hs-c Tn T）的关系。方法 ：根据Hb A1c水平,将251例T2DM患者分为5个组,1组（Hb A1c≤6.4%）60例;