蚊虫肠道共生菌功能的研究进展

蚊虫肠道共生菌是指在蚊虫肠道内与其长期共同生活、维持肠道微生态稳定的菌群,其参与调控蚊虫生理功能的多个方面。本文简要综述了肠道共生菌的影响因素和其在蚊虫营养、免疫、繁殖以及抗药性等方面的功能,为进一步的研究提供参考。

Wolbachia在重要蚊媒病防治研究中的进展

Wolbachia是动物界最常见的细菌感染,对无脊椎动物繁殖、性别决定、物种形成和行为有着巨大的影响。近年来,利用Wolbachia改变蚊虫种群、用抗Wolbachia疗法治疗丝虫感染取得开创性成果。本文概述了Wolbachia在基础和应用生命科学领域内最新进展。

中国对虾中抗菌短肽的分离纯化与功能分析

以水产病害的病原菌为目标菌,从中国对虾(Penaeus chinesis)体液中分离筛选抗菌肽,通过Sephadex G-50、RP-HPLC等分离纯化技术,得到一种抑制水产病原菌的抗菌肽PC-V-2。经初步鉴定,该抗菌肽具有广谱抗性,不仅抗鲁克氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri),而且对金黄色葡萄球菌(Staphyloccus aureus)、枯草杆菌(Bacillus subttilis)等革兰氏阳性菌,大肠杆菌(Escherichia coli)等革兰氏阴性菌和白色念珠菌(Candida albicans)等真菌也有较强的抗性。另外,该抗菌肽还有一定的抑制凝血的活性,但没有检测到溶血和丝氨酸蛋白酶抑制活性。经MALDI-TOF质谱分析,其分子量为1 848 D。

中华按蚊偏嗜血行为的实验观察

目的观察人饵或牛饵诱捕的野外中华按蚊经实验室传代后嗜血行为的变化。方法在山东省单县水稻种植区分别利用人饵和牛饵诱捕大量未吸血的中华按蚊雌蚊,带回实验室分别标记为人饵组和牛饵组,用小白鼠血常规饲养传代;在一大型温室内应用标记-释放-重捕法对两组蚊虫的亲代、子1代、子25代的嗜血性分别进行实验观察。结果 3次检测的重捕率分别为39.02%(1 332/3 414)、37.97%(2 583/6 803)和30.55%(1 523/4 986)。中华按蚊野外种群人饵组和牛饵组亲代仍在人饵帐和牛饵帐被捕获的比例分别为54.07%(339/627)和58.01%(409/705)(χ2=19.42,P﹤0.01);子1代成蚊两组比例分别为51.03%(669/1 311)和55.11%(701/1 272)(χ2=9.75,P﹤0.01);子25代成蚊两组比例分别为51.98%(342/658)和52.37%(453/865)(χ2=2.82,P﹥0.05)。结论中华按蚊偏嗜人血或牛血的行为经实验室传25代后可能发生改变。

无指盘臭蛙皮肤分泌液中促胰岛素释放肽的分离纯化与活性初步研究

通过葡聚糖Sephadex G-50凝胶过滤和反相高压液相层析等手段,对无指盘臭蛙皮肤分泌液进行分离纯化,得到了高纯度的多肽分离峰。分别采用体外培养的大鼠胰岛和INS-1胰岛β细胞系检测分离峰的促胰岛素释放活性。结果表明,所得多肽既可促进原代培养的大鼠胰岛分泌胰岛素,又可以促进INS-1细胞胰岛素释放;运用飞行质谱仪测定该促胰岛素释放肽的相对分子质量,其大小为1 868。此外,利用鸡胚尿囊绒毛膜(CAM)体内模型检测,发现该多肽还具有显著的抑制血管生成活性。

基于分子证据探讨松材线虫在中国的传播途径

采用11个随机引物对来自中国最早发病的5个省和日本疫区的松材线虫共10个居群进行遗传多样性分析和系统发育分析，拟从分子水平探讨松材线虫病在中国蔓延的可能途径。结果表明：中国松材线虫居群间 存在明显的遗传差异，遗传距离为0．066—0．262；除了安徽明光的居群自成一支外，其他居群均与南京居群聚成一支，其中安徽皖南和浙江岱山居群与南京中山陵居群遗传距离最近，为0．066；安徽明光居群与南京居群的遗传距离最大，为0．262。表明发生在安徽皖南和浙江岱山等地的松材线虫病可能是由最早发病的南京地区扩散的；而发生在毗邻南京的安徽明光的松材线虫病不是由南京地区扩散的。该结果揭示，松木制品的调运等人为远距离传播是松材线虫在我国蔓延的主要途径之一。

中国对虾PC-Ⅲ系列抗菌肽的分离纯化及活性

以我国主要经济海产品中国对虾(Penuschinensis)为研究对象,通过SephadexG50、RPHPLC等技术分离纯化到PCⅢ系列中国对虾天然抗菌肽。经初步鉴定,该系列抗菌肽对革兰氏阴性和革兰氏阳性菌都表现出程度不一的抑菌活性,且不同程度地影响小白鼠离体回肠肌收缩,但无丝氨酸蛋白酶抑制剂活性。用MALDITOF质谱对样品进行分析,检测到分子量分别为1071Da和1311Da的两种抗菌肽。这些抗菌肽对对虾抵御微生物的侵袭具有重要的作用。

松材线虫RAPD-PCR反应体系的优化与分子鉴定标记的筛选

应用随机引物S344、S356和S360比较分析了PCR热循环复性温度、Mg^2＋浓度和模板浓度对松材线虫基因组DNA的RAPD扩增结果的影响，旨在建立松材线虫的最佳反应体系，并以此进行松材线虫的分子鉴定标记筛选。结果表明：37℃的复性温度、3．0mmol·L^-1Mg^2＋、10μL反应体系中松材线虫基因组DNA模板1～25ng是研究松材线虫RAPD特征的最佳反应体系。利用此反应体系，通过对100个随机引物的分析，获得了3条松材线虫区别于拟松材线虫的分子鉴定标记。

山东省潍坊市淡色库蚊越冬情况调查

目的调查研究淡色库蚊在山东省潍坊市的越冬情况。方法分别在2014年10月至2016年3月通过人工调查法对潍坊地区越冬蚊进行调查,并监测了整个越冬期内淡色库蚊的种群动态。结果淡色库蚊在潍坊地区以雌成蚊越冬,越冬场所种类多,其中密度较高的越冬场所主要有地窖(135.5±8.75)、防空洞(113±9.56)、暖气管道(33.2±3.84)等,不同越冬场所内淡色库蚊越冬蚊密度存在显著差异(F=85.72,df=139,P<0.01)。越冬期内,各调查点淡色库蚊阳性率大致呈先增加后降低的趋势,捕获的蚊虫数量在越冬中期最多,其次为越冬前期,越冬后期捕获数量最少。结论本研究阐明了山东省潍坊市淡色库蚊的越冬场所和越冬种群的动态,为淡色库蚊的预测、预报和综合防治提供了理论依据。

白星花金龟(Protaetia brevitarsis)幼虫抗菌物质的分离纯化

以药用昆虫白星花金龟(Protaetia brevitarsis)幼虫为研究对象,通过Sephadex G-50、RP-HPLC等技术分离纯化天然抗菌活性物质.经初步鉴定,该系列抗菌活性物质对枯草芽孢杆菌(Bacillus subttilis)表现出较强的抑菌活性.用MALDI-TOFMS对样品进行分析,检测到相对分子质量分别为2254.0459、2622.4438的两种抗菌活性物质.推测这些抗菌活性物质在白星花金龟幼虫抵御微生物的侵袭中起到重要作用.

山东济宁骚扰库蚊对常用杀虫剂的抗性研究

目的对山东济宁发现的骚扰库蚊进行鉴定,研究其对5种常用杀虫剂的抗性水平。方法在某小区半地下车库积水中采集库蚊幼虫,对收集到的库蚊进行初步形态学和分子生物学鉴定,确定库蚊的种类。采用幼虫浸渍法研究其对DDVP、残杀威、氯氰菊酯、溴氰菊酯、苏云金杆菌以色列变种(Bti)5种杀虫剂的抗性。结果采集到的库蚊幼虫是骚扰库蚊,为山东省首次报道,其对DDVP、残杀威、氯氰菊酯、溴氰菊酯、Bti的抗性倍数分别为117.34、53.47、113.50、140.00、2.71。结论骚扰库蚊作为山东省新出现的蚊种,有必要对其生物学行为和流行病学意义进行深入研究。

淡色库蚊氨肽酶N基因的克隆及生物信息学分析

目的克隆淡色库蚊Bt毒素受体氨肽酶N(Aminopeptidase N,APN)基因,并对基因及编码蛋白进行生物信息学分析。方法提取淡色库蚊RNA,通过RT-PCR扩增氨肽酶N基因的全长cDNA序列,纯化PCR产物连接至pMD19-T载体,阳性重组质粒经PCR鉴定后进行基因测序。生物信息学分析APN基因的序列同源性及编码蛋白的结构特征。结果该基因cDNA序列全长为1 383bp(含终止密码子),编码460个氨基酸,与致倦库蚊XM_001862270.1序列的同源性为100%。预测蛋白质分子量为52.9kDa,等电点为4.98。前21个氨基酸为N-末端的信号肽,存在2个N-糖基化位点(93 NLT95和169 NVS171)。具有肽酶家族M1的序列特征、锌结合位点HEXXH和谷氨酸锌化氨肽酶的保守结构GAMEN。结论成功克隆了淡色库蚊氨肽酶N基因并对APN蛋白进行生物信息学分析,为进一步探讨淡色库蚊APN的功能及Bt毒素作用机制奠定了基础。

淡色库蚊对苏云金杆菌及化学杀虫剂的抗性研究

目的探讨苏云金杆菌以色列亚种(Bti)与常用化学杀虫剂联合使用对东平湖地区淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法采用幼虫浸渍法测试现场淡色库蚊幼虫对Bti及5种化学杀虫剂的抗性,采用简单复配法检测Bti分别与5种化学杀虫剂混用的增效效果,增效明显的2组再次进行复配验证。结果现场淡色库蚊幼虫对Bti、溴氰菊酯、氯氰菊酯、敌敌畏、残杀威、三氯杀虫酯的抗性倍数分别为1. 04、106. 00、83. 00、5. 03、3. 51、1. 01。Bti分别与5种化学杀虫剂简单复配时均有增效效果,Bti+残杀威增效效果最佳(19. 63),其次为Bti+氯氰菊酯(11. 59)。进一步复配结果显示,残杀威与Bti以不同比例复配时都具有增效作用,其中以1∶3比例复配时共毒系数最高(189);当氯氰菊酯与Bti以1∶1及1∶3比例复配时,表现出增效作用(共毒系数:114、135)。结论将Bti与化学杀虫剂联合应用(尤其是残杀威)对山东省东平湖地区淡色库蚊有较好的灭杀效果,可延缓抗药性的发展,是蚊虫抗性治理中较为重要的防治策略。

山东省济宁市白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性与kdr等位基因突变观察

目的了解山东省济宁市白纹伊蚊现场群体对溴氰菊酯的抗药性,并检测击倒抗性(kdr)等位基因突变情况,为kdr突变作为杀虫剂抗性检测的生物标记提供理论依据。方法WHO成蚊接触筒法测定白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)基因部分片段,测序后检测kdr等位基因突变情况。结果WHO成蚊接触筒检测济宁白纹伊蚊雌蚊死亡率为44.58%,在VGSC基因1534氨基酸位点检测到3种等位基因类型:野生型TTC(F1534)(71.43%)和突变型TCC(F1534S)(13.69%)、TTG(F1534L)(14.88%);检测到5种等位基因型:野生型纯合子TTC/TTC,突变型纯合子TCC/TCC、TTG/TTG,以及野生/突变型杂合子TTC/TTG、TTC/TCC。结论济宁市白纹伊蚊对溴氰菊酯已产生抗药性,并监测到其1534氨基酸位点上存在2种kdr等位基因点突变,可能与杀虫剂的长期选择压力有关。

苏云金杆菌对微山湖湿地中华按蚊幼虫的室内生测效果

目的探讨苏云金杆菌以色列亚种(Bti)对中华按蚊不同龄期幼虫的杀灭效果。方法采用幼虫浸渍法,26℃环境下,用浓度为2、4、6、8、10、12、14 mg/L的Bti药液,分别对Ⅰ~Ⅳ龄期的中华按蚊幼虫进行实验测定。结果 Bti对微山湖湿地中华按蚊Ⅰ龄期幼虫杀灭作用最佳。其对中华按蚊Ⅰ~Ⅳ龄幼虫的LC_(50)值分别为6.11、8.03、9.66和10.50 mg/L。微山湖湿地Ⅰ~Ⅳ龄幼虫相对实验室敏感幼虫抗性倍数分别为1.15、1.08、1.11和1.12倍。结论 Bti对微山湖湿地中华按蚊幼虫均有不同程度的杀灭作用,同样浓度下幼虫龄期越小,杀灭效果越显著。而且Bti对微山湖湿地幼虫的杀灭效果与实验室敏感品系相差不大,提示当中华按蚊对化学杀虫剂产生抗性时,应用Bti等生物杀虫剂是较好的选择。

孕妇阴道假丝酵母菌感染危险因素研究

目的探讨孕妇阴道假丝酵母菌感染的相关危险因素,指导临床防治孕妇阴道假丝酵母菌感染。方法选取2015年9月至2017年9月于新泰市人民医院就诊的孕妇1628例,收集每个病例临床资料。采用单因素及多因素Logistic回归模型,分析阴道假丝酵母菌感染的相关危险因素。结果 1628例孕妇阴道假丝酵母菌感染率为37.53%。多因素Logistic回归分析显示,孕前体重指数(OR=1.235,95%CI:1.057～1.443)、流产史(OR=1.848,95%CI:1.159～2.946)、孕前外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)史(OR=3.725,95%CI:1.680～8.256)、孕期情绪焦虑(OR=2.085,95%CI:1.181～3.686)及妊娠合并糖尿病(OR=2.586,95%CI:1.334～5.011)均是孕妇阴道假丝酵母菌感染的独立危险因素(P<0.05)。结论孕前体重指数、流产史、孕前VVC史、孕期情绪焦虑及妊娠合并糖尿病这5项是孕妇阴道假丝酵母菌感染的独立危险因素,可为临床防治孕妇阴道假丝酵母菌感染提供指导。

基于核糖体DNA第二内转录间隔区基因的9种蚊虫分子鉴定

目的分析常见9种蚊虫核糖体DNA第二内转录间隔区(rDNA-ITS2)基因序列特征,为蚊虫种类分子鉴定方法探讨提供依据。方法在山东省济宁市采集淡色库蚊、三带喙库蚊、二带喙库蚊、白纹伊蚊、刺扰伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、常型曼蚊和黄色柯蚊成蚊,形态学种类鉴定后,提取上述9种蚊虫DNA,PCR扩增rDNA-ITS2基因并测序;在GenBank中进行同源性比对,采用Bioedit 7.0软件及DNAMAN软件对测序结果进行比对分析,通过DNASTAR、ClustalX 1.81和Mega6软件分析列特征并构建系统进化树探讨系统发生关系。结果9种蚊虫的rDNA-ITS2长度在343 bp与577 bp之间,共有59个保守位点、449个变异位点、235个简约信息位点和191个单态位点,9种蚊虫种间序列同源性为28.21%~53.76%;所有蚊虫的rDNA-ITS2基因分子鉴定与形态学鉴定吻合率100%,库蚊属的淡色库蚊、三带喙库蚊和二带喙库蚊聚成一类,伊纹属的白纹伊蚊和刺扰伊蚊聚成一类,不同种蚊虫为独立分支。结论核糖体DNA第二内转录间隔(rDNA-ITS2)基因可用于蚊虫属和种的鉴定。

中华按蚊吸血趋性和吸血前后活动情况的观察

目的观察中华按蚊吸血趋性和吸血前后活动情况，为改进灭蚊措施，提高防制效果提供依据。方法利用室外人、牛饵帐诱捕法进行中华按蚊吸血趋性观察，采用实验小屋法观察蚊虫吸血前后活动情况。结果室内人饵帐捕获中华按蚊约是室外捕蚊数的2．99倍，差异有统计学意义（x^2=5．12，P〈0．01）；室内外牛饵帐诱捕蚊数相近，差异无统计学意义（x^2=0．69，P〉0．05）。牛房傍晚3h的捕蚊数为白天栖息该室内蚊虫数的12．59倍，在室内吸血前后停息1～10min者约占50％，停息30min以内者占80％以上，差异均有统计学意义（P〈0．05）；停息60min以上者仅占10．％，差异无统计学意义（P〉0.05）。结论中华按蚊具有偏外栖性，这是滞留喷洒杀灭效果不理想的重要原因。基于其吸血前后室内短暂停留的行为习性，应选用无驱避性且具有熏杀作用的速效高效杀虫剂杀灭室内中华按蚊。

基于mtDNA-COⅠ基因的山东省蚊种群遗传多样性分析

目的探讨山东省不同地理株及实验室不同抗性品系淡色库蚊及5种常见蚊种的线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(mt DNA-COⅠ)基因序列特征,分析其遗传多样性。方法采用山东省济南、济宁、青岛等地现场采集及实验室选育的淡色库蚊成蚊,以济宁市现场采集的5种蚊(淡色库蚊、三带喙库蚊、中华按蚊、白纹伊蚊、骚扰阿蚊)作为样本,PCR扩增mt DNA-COⅠ基因并测序,分析序列特征并构建系统进化树。结果 PCR特异扩增8个不同地理株及4个实验室抗性品系的淡色库蚊mt DNA-COⅠ区域,获得长度均为528 bp的扩增片段,A+T含量为67.4%,存在两个变异位点。不同地理株淡色库蚊mt DNA-COⅠ基因同源性为99.95%,不同抗性品系淡色库蚊基因序列相同,所有蚊虫COⅠ基因具有高度保守性。5种常见蚊虫的mt DNA-COⅠ基因片段长度均为528 bp,有408个保守位点,120个变异位点,42个简约信息位点,78个单态位点,A+T含量为65.7%~68.0%,同源性分析发现蚊种间基因同源性为86.17%~92.05%,所有蚊虫的COⅠ基因分子鉴定与其形态学相吻合。系统进化关系显示,同种和同属之间呈明显的聚集,但阿蚊属成单独的分支,与其他蚊种亲缘关系较远。结论线粒体COⅠ作为不同地理株及实验室不同品系淡色库蚊的遗传进化分子标记不够理想,但该基因具有种间和属间特异性,可用于蚊虫属和种的区分。

山东省南水北调沿线蚊类密度及流行性乙型脑炎病毒自然感染状况研究

目的在山东省南水北调沿线选择微山韩庄、任城太白湖和泰安东平湖3个地区,调查蚊类密度消长及流行性乙型脑炎(乙脑)病毒自然感染状况,为当地蚊虫控制与乙脑防治工作提供科学依据。方法 2015年6-9月,采用人帐法在上述3个地区采集蚊虫标本,分类计数;将蚊虫标本研磨后提取核酸,采用实时荧光定量PCR法检测乙脑病毒核酸。结果 2015年6-9月在3个监测点共捕获蚊虫6属17种16 711只,以三带喙库蚊(39.55%)和淡色库蚊(38.69%)为优势蚊种;蚊虫密度随季节消长均以8月最高。采用实时荧光定量PCR法,在三带喙库蚊、淡色库蚊、黄色轲蚊中检测到乙脑病毒核酸,批阳性率分别为22.96%、7.58%和16.67%。结论山东省南水北调沿线蚊虫密度依然较高,且多个蚊种中检测到乙脑病毒核酸,提示该地区存在乙脑病毒感染风险。