粗毛栓菌cDNA文库的构建和漆酶基因的表达分析

粗毛栓菌(Trametesgallica)能够分泌多种胞外氧化酶并且快速降解木质纤维素.为了快速高效分离鉴定粗毛栓菌木质纤维素降解酶相关基因,用Trizol试剂提取不同培养条件下粗毛栓菌总RNA,用CreatorTM SMARTTM cDNA Library Construction Kit和Advantage 2PCR Kit成功构建了该菌全长cDNA文库.原始文库滴度为1.5×105cfu,重组率达99%,插入片段在0.7～2.0kb之间,平均大小约1kb.随机取16个重组子进行测序,全长cDNA序列完整性率为85.7%;并筛选到1个漆酶基因,编码区长1551bp,预测的蛋白质由517个氨基酸残基组成,分子量为55.41kD,等电点为4.76.用半定量RT-PCR法分析了该漆酶基因在不同培养条件下的表达水平.结果显示,高浓度的碳源,氮源,Cu2+均能诱导此基因的表达,该结果为漆酶基因的表达调控机制的深入研究奠定了基础.

黄孢原毛平革菌乙醇脱氢酶基因的克隆和表达

乙醇是黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)在限氧培养条件下重要的代谢物之一,为了更好的理解P.chrysosporium在低氧条件下的代谢机制,文章从P.chrysosporium中克隆到一个长1071 bp的乙醇脱氢酶基因PCAdh1 cDNA,该基因编码一个由356个氨基酸组成的蛋白质,它与其他生物的乙醇脱氢酶的氨基酸序列的相似性很低,但酶催化活性位点序列却高度保守。将PCAdh1在大肠杆菌中表达,并获得有酶活性的重组蛋白。纯化的蛋白质用于制备抗体。半定量RT-PCR和Western blot分析结果显示,在限氧条件的培养过程中,PCAdh1基因在mRNA水平和蛋白水平上都保持相对稳定,表明该基因的表达是组成型的;但从菌丝体提取的粗蛋白中的乙醇脱氢酶活性却随着培养时间的增加及氧气含量的持续降低而逐渐升高,这暗示P.chrysospo-rium中存在其他低氧诱导型乙醇脱氢酶基因的表达。

南美白对虾、中华鳖生态混养模式试验示范与推广

嘉善县惠民街道是嘉善县最早的养殖南美白对虾基地之一,2002年开始试养2.4亩南美白对虾,经过渔技人员和水产养殖户共同努力,南美白对虾养殖得到快速发展,至2014年养殖面积已达到1500多亩,成为当地渔业支柱产业。为探索一种降低南美白对虾养殖病害发生风险、提高经济效益的养殖模式,2010年起开始摸索南美白对虾、中华鳖生态混养模式,取得了阶段性试验示范成果。现将试验示范与推广情况总结如下。

罗氏沼虾稻田高产养殖技术

我镇地塘养殖罗氏沼虾已多年,近年来,随着稻田养殖的开发,我们在总结以往养殖罗氏沼虾经验的基础上,对如何提高稻田养殖罗氏沼虾产量作了一些技术性改进。下面把我们稻田养殖罗氏沼虾技术,介绍给广大养殖户。

整体护理在呼吸衰竭患者中的应用

目的探讨整体护理在呼吸衰竭患者中的应用效果。方法 65例呼吸衰竭患者予以对症治疗并采用整体护理,记录治疗情况和并发症发生情况,比较治疗干预前和干预后1周血气分析指标及急性生理与慢性健康(APACHE II)评分。结果本组治疗成功率86.2%(56/65),并发症发生率4.6%(3/65)。治疗干预1周后,本组患者氧分压(PaO_2)和p H值高于干预前,二氧化碳分压(PaCO_2)和APACHE II评分均低于干预前,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论在呼吸衰竭临床护理中采用整体护理,可有效减少并发症的发生,提高患者生存质量,有利于患者早日康复。

钢丝绳大棚南美白对虾与罗氏沼虾轮养高效养殖模式

大棚设施养殖是目前浙江省水产技术推广部门重点推广的主推技术之一,其中钢丝绳大棚养殖模式具有投资省、见效快、养殖效益高等特点,我们结合嘉善渔业实际,重点探索了钢丝绳大棚南美白对虾与罗氏沼虾轮养高效养殖模式试验,取得了增产增效的实际养殖效果。现将试验有关情况介绍如下：一、模式试验特点该模式利用池塘空闲期搭设钢丝绳大棚,建设时间一般安排在11月下旬到次年2月底,大棚中第一茬养殖南美白对虾,第二茬养殖罗氏沼虾,充分利用大棚中气温高、

嘉善地区池塘生态种养模式的试验与探索

嘉善县净水渔业种苗基地在2010－2012年间开展了沙塘鳢苗种规模化繁育生产试验，成功突破了沙塘鳢人工繁育技术，2013－2014年该基地又率先在嘉善地区开展探索池塘沙塘鳢、水稻共生的“鱼稻共生”生态种养殖模式，并取得了较好的经济效益。池塘“鱼稻共生”模式通过生态种养结合，发展环境友好型渔业，社会效益、经济效益和生态效益都十分显著，现介绍如下。

实时荧光定量PCR检测CYP2C9* 3及VKORC1_C1173T基因多态性方法的建立

建立实时荧光定量PCR法检测人药物代谢基因CYP2C9*3及VKORC1_C1173T多态性,并确定最适反应条件。该方法采用Taq Man-MGB(Minor groove binder,小沟结合物)探针技术,针对每个待检测位点设计特定的引物和探针,并优化引物、探针浓度;建立和优化反应体系,设计合理的PCR Enhancer组分;并对Taq ManMGB探针特异性、敏感性和重复性进行评价,同时对部分实时荧光定量PCR产物样品进行测序验证。结果表明,Taq Man-MGB探针法对2个等位基因检测结果准确,检测方法特异性高;所构建方法线性关系良好(R2≥0.991),扩增效率为95.2%~109.9%,标准曲线斜率为-3^-3.5;检测灵敏度可达10拷贝/反应;随机样品Taq ManMGB探针检测结果与测序结果一致。所建立用于基因多态性检测的Taq Man-MGB探针法具有简便、快速、准确、高效等特点,检测原理可用于各种SNP分型检测,具有广泛的应用前景。