乙肝病毒在转染细胞（z7－4）中复制的探讨

用ＨＢＶ ＤＮＡ二聚体转染高度分化的人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２），筛选出具有分泌病毒抗原、核酸以及释放４２ｎｍ Ｄａｎｅ颗粒能力的ｚ７－４细胞株。本实验结果支持３．５ＫｂｍＲＮＡ是前病毒基因，以它作模板可逆转录成１．６Ｋｂ（－）ｓｓＤＮＡ，再合成（＋）ｓｓＤＮＡ，最后装配成４．０Ｋｂ和３．２ＫｂｄｓＤＮＡ。在ＤＮＡ印迹法中位于４．０Ｋｂ（Ｄ１）和３．２Ｋｂ（Ｄ２）处是病毒的松驰环状双股ＤＮＡ（ＲＣＤＮＡ），而１．６Ｋｂ和１．２Ｋｂ处的２条ＤＮＡ带（Ｓ１和Ｓ２）均为单股ＤＮＡ，这些不同位置的ＤＮＡ带与病毒复制过程中ＤＮＡ的构型和片断大小不同有关。本实验未能发现２．０ＫｂｃｃｃＤＮＡ，但提示了负股ＤＮＡ５’端连接有蛋白质引物。

细胞凋亡荧光染色法检测肿瘤化疗药物敏感性并与MTT法的比较

本文根据化疗药物诱导肿瘤细胞产生凋亡的机制,采用细胞凋亡荧光染色法(AFS)分别检测了卵巢癌细胞株(3AO)、部分肺癌患者分离的癌细胞药物敏感性,并和传统的ATT法进行比较.用不同浓度的顺铂诱导3AO凋亡、两种方法学之间没有显著性差别(P>0.05);但用于肺癌患者分离的肿瘤细胞进行药物的筛选时,有显著性差别(P<O.05);AFS避免了MTT多种影响因素,比MTT快速、准确、敏感、重复性好,同时能观察凋亡、坏死及活细胞,有可能成为一种新的用于肿瘤化疗药物的筛选方法.

一种高活力分离肿瘤浸润淋巴细胞方法的建立

肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的增殖力、活力、杀伤力是ＴＩＬ临床治疗的基本问题。由于Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ方法存在着许多不足之处。本实验室对其一些重要步骤进行了改进：①用单一冷胶原酶消化肿瘤组织块；②省去影响ＴＩＬ活力的离心操作；③ＴＩＬ培养４８ｈ内除去掺杂在ＴＩＬ中的肿瘤细胞等。由于除去了影响ＴＩＬ活力的抑制因素，ＴＩＬ的增殖率、生存率、活力、杀伤力明显增加。有８０％肿瘤组织的ＴＩＬ经扩增可超过１×１０￣９细胞数，生长周期曲线反映了冷酶法的增殖率超过Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ方法。本方法的建立，为ＴＩＬ克隆、建株打下了基础，显示了ＴＩＬ临床治疗潜能的提高。

活性炭固定床电解槽处理苯酚废水

对采用新型节能活性炭固定床电解槽处理苯酚废水的研究结果表明 ,NaCl投加量为 9～ 2 0 g/L时对酚的去除影响最大 ,最佳投加量为 2 0 g/L ;槽电压升高会使酚去除率增加 ,但单位功率去除率明显减小 ;出水酚浓度与电解时间呈负指数关系 ,随电解时间增加而降低 ;酚降解速率与酚浓度呈一级反应关系 ;在酚去除率相同的条件下 ,活性炭固定床电解槽可比普通电解槽节省电耗 30 %～ 4 0 %。

酶消化对肿瘤浸润淋巴细胞活力影响的研究

本文系统地研究了酶消化（胶原酶Ⅳ、胶原酶Ⅱ、透明质酸酶和胰蛋白酶）对肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）活力、增殖力等影响，并用单个酶消化法与Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ法比较。结果提示：胶原酶Ⅳ或胶原酶Ⅱ消化肿瘤组织块时对ＴＩＬ细胞活力、增殖力损伤小；透明质酸与胰蛋白酶消化对ＴＩＬ细胞活力、增殖力损伤大。在３７℃，１ｈ消化组与４℃，２４ｈ消化组对同一来源肿瘤组织酶消化配对比较中，结果提示同一酶４℃。

填充床电极直接氧化含氰废水

采用填充床电化学反应器对低浓度含氰废水进行直接氧化试验。结果表明:填充床电极电流效率高,电流密度大,电解时间短;单位体积电解池的处理能力和电耗优于平板电极;对于含氰浓度低于250mg/L 的废水,采用填充床电极直接处理至排放标准。

TNF抗妇科肿瘤细胞的实验研究

肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ，ＴＮＦ）是具有抗肿瘤特性的多功能物质，但不同种肿瘤细胞对ＴＮＦ的敏感性存在着明显差异。在体外试验中，发现卵巢癌细胞（ＡＯ）子宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ）和绒癌细胞（ＪＡＲ）对ＴＮＦ都不甚敏感。若ＴＮＦ联合应用γ－干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－Ｔ，ＩＦＮ－γ）或放线菌素Ｄ，则对这３种细胞株的杀伤作用明显增强。提示它们与ＴＮＦ有协同杀伤妇科肿瘤细胞的作用，这对妇科肿瘤的治疗提供了新的线索。

MTT比色法检测脐血LAK和TIL细胞活性

介绍以ＭＴＴ比色法检测脐血淋巴因子激活的杀伤细胞（脐血ＬＡＫ）和肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）活性方法的建立。初步研究不同效靶细胞比例、杀伤时间、ＭＴＴ反应时间和靶细胞传代时间对脐血ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞活性检测结果的影响以及ＴＩＬ细胞对自体肿瘤细胞和Ｋ５６２细胞的杀伤活性。实验结果表明本法具有操作简单、灵敏度高、重复性好等优点。

关于硫化物抑制厌氧消化的新探讨

采用间歇试验的方法研究了硫化物对厌氧消化的影响。试验结果表明，投加量小于４０ｍｇ／Ｌ时，硫化物促进产气，投加量大于８０ｍｇ／Ｌ时，硫化物抑制产气，并且随硫化物投加量增加抑制增强。硫化物在发酵过程中能以Ｈ２Ｓ的形式随生物气排出，抑制随发酵时间延长逐渐减轻。当硫化物浓度由８０ｍｇ／Ｌ增至９００ｍｇ／Ｌ时，在生长率下降期的平均产气量由９２％减至１０％。

受体介导TNFα基因转移的实验研究

目的检测受体介导基因转移人肿瘤坏死因子α基因的靶向性和表达效率。方法人转铁蛋白同多聚赖氨酸共价交联，盐键合成交联蛋白和外源基因质粒的超分子复合物，对表达转铁蛋白受体的肿瘤细胞株进行β－半乳糖苷酶和人肿瘤环死因子α基因转移。结果检测到外源基因表达；转染人肿瘤坏死因子α基因后细胞上清液检测到一过性人肿瘤坏死因子α活性升高。结论受体介导基因转移具有良好的靶向性，但表达效率低。

乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生TNF活性的研究

本文对70例不同类型乙型肝炎患者,包括重症肝炎26例、急性肝炎19例、慢性活动性肝炎13例、以及慢性迁延性肝炎12例的外周血单个核细胞的TNF活性及其在肝细胞坏死中的可能作用进行了研究。研究中采用微量全血体外刺激,即以LPS刺激单个核细胞产生TNF_α、以PHA刺激淋巴细胞产生TNF_β,然后用国际通用的L_(929)细胞标准法检测TNF的活性。研究发现重症肝炎患者的TNF活性(TNF_α为15.76 U/ml;TNF_β20.13 U/ml)明显高于正常人(TNF_α为3.10U/ml;TNF_β为0.21 U/ml)与急性肝炎患者(TNF_α为3.44U/ml;TNF_β为0.24 U/ml)。又慢活肝患者的TNF活性(TNF_α为11.42U/ml;TNF_β为7.54 U/ml)明显高于慢辽肝(TNF_α活性为5.92U/ml;TNF_β为0.41 U/ml)。结果表明TNF活性的增高与肝损害的程度与肝炎的活动性呈正相关。

散发性乳腺癌患者BRCA1基因突变分析

目的 :探讨BRCA1基因突变在散发性乳腺癌发生和发展中的作用及在乳腺癌临床诊断和治疗中的应用前景。方法 :应用PCR SSCP和直接测序法检测 3 0例散发性乳腺癌和 15例正常乳腺组织中BR CA1基因外显子 2、11和 2 0的突变情况。结果 :15例正常乳腺组织在 3个外显子上都未显示电泳异常 ,3 0例乳腺癌中有 6例在外显子 2上显示电泳条带异常 ,其中 4例经测序证实有突变 ,1例在外显子 2上 ,3例在内含子拼接区。BRCA1基因突变率在初诊年龄、临床分期和肿瘤体积上差异无统计学意义 ,但与肿瘤转移密切相关。结论 :BRCA1基因突变与散发性乳腺癌的发生和发展密切相关 ,该基因突变筛查可作为一种预后指标。

Ⅲ度烫伤大鼠创面渗液中细胞因子的变化

本文探讨了大鼠Ⅲ度烫伤后局部渗液中细胞因子的动态变化。63只SD大鼠分两组。S组：单在皮下包理海绵；SB组；理海绵后再造成Ⅲ度烫伤，于伤后6h、1d、2d、3d、5d、7d与10d各时相检测海绵渗液中IL－1、IL－6和TNF。结果三种细胞因子在SB组均有相似的升降波动，即均有两个波峰。IL－1早期峰于2d出现，继骤降后5d达第二峰，然后趋于下降，TNF与IL－6分别于6h、1d出现第一峰，继回落后两细胞因子持续上升，直至10d未见下降，且第二峰高于第一峰。IL－1与TNF在1d、5d呈正相关；IL－1与IL－6在2d呈负相关；而IL－6与TNF在1d、10d时呈正相关，3d时又为负相关。

细胞凋亡荧光染色法在检测TIL细胞毒效应中的应用

细胞毒细胞杀伤肿瘤细胞主要通过细胞凋亡机制。用传统的MTT法探讨了肿瘤浸润淋巴细胞TIL细胞杀伤活性最佳条件，同时采用凋亡荧光染色法（AFS）检测TIL的生物学效应。结果发现AFS法比MTT法更能准确地反映TIL对靶细胞的杀伤，杀伤率与效靶比呈良好的线性关系（r=0．89）；且该法简便、快速、敏感、重复性好，能同时观察活细胞、凋亡及坏死三种细胞的形态特征。

TNF基因转导肿瘤浸润淋巴细胞的方法学研究

在总结Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ建立的ＴＮＦ－ＮｅｏＲ缺陷型逆转录病毒转染肿瘤浸润细胞（ＴＩＬ）的基础上，选用美国国家卫生院重组ＤＮＡ咨询委员会（ＲＡＣ）批准的逆转录病毒（Ｍｏ－ＭｕＬＶ）的衍生物作载体，对肿瘤坏死因子转导ＴＩＬ进行研究。实验结果提示：ＴＩＬ处于静息期与对数生长后期，当ＴＮＦ－ＮｅｏＲ缺陷型逆转录病毒转导ＴＩＬ细胞时，ＴＩＬ细胞增殖受到影响；最佳转导时间为ＴＩＬ分离培养后９～２５ｄ。各病毒感染复数值病毒转导对ＴＩＬ增殖倍数与生存天数影响不大，但病毒感染复数值越大，转导后ＴＩＬ起始呈抑制现象越大；然而Ｇ_（４１８）筛选后证实，病毒感染复数值越大，转导成功率越大。Ｌ_（９２９）细胞检测转导后ＴＩＬ呈高表达，ＰＣＲ检测ＴＮＦ目的基因已插入宿主ＤＮＡ中。

肿瘤浸润淋巴细胞培养中掺杂肿瘤细胞的清除

根据肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）培养过程中掺杂肿瘤细胞具有粘附、贴壁的特性，将掺杂的肿瘤细胞通过移孔法清除，使ＴＩＬ对数生长期至少可提前４ｄ。由于大量掺杂肿瘤细胞在移孔中被清除，解除了肿瘤细胞对ＴＩＬ的抑制，使增殖倍数有所增加，最高可以达到１０倍。比项研究为临床肿瘤病人用ＴＩＬ治疗打下良好基础，为ＴＩＬ在手术后及早应用及其安全性提供了实验依据。

填充床电极间接氧化含氰废水

研究采用填充床电化学反应器,对低浓度含氰废水投加氯化钠进行间接氧化。试验表明:投加氯化钠可明显改善填充床反应器的工作特性,强化 CN^-的氧化过程,缩短废水在电解池里的停留时间。

用凝聚法处理城市污水厂二沉池出水

本文报道采用硫酸铝和聚合铝对城市污水厂二沉地出水进行凝聚处理。探讨了用凝聚法处理二沉池出水的特点和基本机理，提出了用二段法进行处理的方法，且比较了二段法与普通凝聚法的优劣。

肿瘤坏死因子基因转导肿瘤浸润淋巴细胞的初步研究及应用

我们选用美国国立卫生院重组DNA咨询委员会批准的LN系列小鼠缺陷型逆转录病毒LXSN作为载体,对肿瘤坏死因子基因转导TIL进行了研究和初步的临床应用,实验结果显示,最佳转导时间为TIL分离培养后9-25d,即对数生长期间,同时,MOI值影响着转导效率,MOI值越大,转导效率越高.PCR及L929细胞的检测均表明了TNF基因的成功插入.一例胃癌肝转移患者初步临床应用的结果表明,TIL的高度特异性及治疗途径的选择和治疗方案的适宜对于提高疗效,减少TNF毒副反应起了一定作用.

三种厌氧促进剂对亚铵废液厌氧发酵的影响

根据亚铵法草浆蒸煮废液的间歇式厌氧发酵试验结果，分析了活性炭、硫酸亚铁和膨润土对亚胺废液厌氧发酵的影响。结果表明，当投量为２．５ｇ／Ｌ时，３种厌氧促进剂都能显著地促进亚铵废液的厌氧发酵；与对照试组相比，可将厌氧系统的３０ｄ累积产气量分别提高１６．１％、１３．９％和２６．１％。本研究还初步探讨了这３种厌氧促进剂的作用机理。