鲎血蓝蛋白的分离纯化及其酚氧化酶活性的初步研究

采用饱和硫酸铵盐析法、透析除盐和丙烯葡聚糖凝胶柱层析分离纯化鲎血蓝蛋白,通过紫外可见吸收光谱和SDS-PAGE图谱对其进行定性分析,再通过单因素实验和响应面实验研究了温度、pH值、邻苯二酚与鲎血蓝蛋白浓度比、时间等因素对鲎血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响。结果表明,纯化后的鲎血蓝蛋白在280 nm、340 nm处有特征吸收峰,有2个蛋白亚基,分子量约为66 kDa,为典型的节肢动物血蓝蛋白;在温度为36.7℃、pH值为6.8、邻苯二酚与鲎血蓝蛋白浓度比为1.7∶1、时间为2.1 min的最佳条件下,鲎血蓝蛋白酚氧化酶活性最高,为83.3 U·min^(-1)·mL^(-1)。