食管鳞癌细胞中LSD1通过与Notch靶基因启动子结合调控Notch通路相关蛋白表达

目的:探讨食管鳞癌细胞中LSD1对Notch信号通路的调控作用及调控机制。方法:Western blot法检测5种食管鳞癌细胞KYSE450、KYSE790、Eca109、EC9706和TE-1中LSD1及Notch通路相关蛋白的表达情况。用LSD1抑制剂TCP处理KYSE450、KYSE790和Eca109细胞或用LSD1 siRNA处理Eca109细胞,Western blot检测处理前后细胞中LSD1、组蛋白H3K4me2和Notch信号通路相关蛋白的表达情况。结果:5种食管鳞癌细胞中均存在LSD1及Notch信号通路相关蛋白的表达,且表达水平不同;TCP处理后,与未处理组相比,KYSE450、KYSE790和Eca109细胞中LSD1的表达水平均降低,组蛋白H3K4me2表达升高,Notch信号通路相关蛋白的表达均降低(P<0.05);LSD1 siRNA同样使Eca109细胞中LSD1与Notch信号通路相关蛋白表达受到抑制(P<0.05)。结论:食管鳞癌细胞中LSD1对Notch信号通路有调节作用,且LSD1可能是通过与Notch靶基因Hes1的启动子区域结合实现的。

食管鳞癌Eca109细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路对LSD1的调控作用

目的:探讨食管鳞癌Eca109细胞中PI3K/AKT/m TOR信号通路对LSD1的调控作用。方法:用不同浓度的PI3K/Akt/m TOR信号通路抑制剂LY294002(0.5、1.0、5.0、10.0、20.0和50.0μmol/L)、RAD001(0.05、0.50、5.00、10.00、20.00和50.00μmol/L)分别处理Eca109细胞24、48 h,采用CCK-8实验检测细胞增殖;然后分别用0、10、20μmol/L LY294002或RAD001处理Eca109细胞24 h或20μmol/L LY294002或RAD001处理不同时间(0~72 h),采用Western blot检测PI3K/Akt/m TOR信号通路因子、LSD1及组蛋白H3K4me2表达的变化。结果:LY294002、RAD001处理后,食管鳞癌细胞增殖受抑,且随浓度的增加,抑制作用有增强的趋势(P<0.05);LY294002抑制Eca109细胞中p-p70S6K的表达,上调Raptor、Rictor、p-Akt(Ser473)以及组蛋白H3K4me2的表达;而RAD001抑制了Raptor、Rictor、p-p70S6K表达,增加p-Akt(Ser473)的表达,并且下调LSD1表达,上调组蛋白H3K4me2的表达(P<0.05)。结论:PI3K/AKT/m TOR信号通路对LSD1存在调控作用。

miR-199a-3p对Eca109和KYSE450细胞周期和迁移的影响

目的:观察miR-199a-3p对食管鳞癌细胞周期及迁移能力的影响,并探讨其分子机制。方法:常规培养Eca109和KYSE450细胞,分别转染miR-199a-3p mimics及miR-199a-3p mimics negative control(阴性对照)。采用qRT-PCR法检测3组细胞中miR-199a-3p的表达水平,并用流式细胞术及划痕实验分别检测细胞周期及细胞迁移能力,用Western blot检测细胞中m TORC2信号通路相关蛋白[m TOR、Rictor、PI3K、p-Akt(T308)、p-Akt(S473)]的表达。结果:与阴性对照相比,转染miR-199a-3p mimics后,Eca109和KYSE450细胞中miR-199a-3p表达量增加;G1期细胞增多,细胞相对迁移率降低,m TOR和Rictor蛋白的表达水平降低,而PI3K、p-Akt(T308)和p-Akt(S473)蛋白的表达水平升高(P均<0.05)。结论:miR-199a-3p可能通过调控m TORC2信号通路来影响食管鳞癌细胞周期进程及细胞迁移。

miR-199a-3p在食管鳞癌细胞中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-199a-3p在食管鳞癌细胞中的表达情况及其对细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用Realtime PCR法检测miR-199a-3p在5株食管鳞癌细胞TE1、Eca109、EC9706、KYSE450、KYSE790中的表达。用siRNAMateTM转染试剂将人工合成的miR-199a-3p模拟物mimics转染Eca109、EC9706细胞后,采用Real-time PCR法检测miR-199a-3p的表达,采用克隆形成实验、CCK-8法及双染法检测细胞克隆形成能力、增殖能力和凋亡率,Western blot检测m TOR、p-p70S6K和Bcl-2蛋白的表达。以未转染细胞为空白对照,以转染mimics阴性对照的细胞为阴性对照。结果:miR-199a-3p在5株食管鳞癌细胞中均有表达,表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和阴性对照组细胞相比,转染mimics的Eca109和EC9706细胞中miR-199a-3p相对表达量显著升高(P<0.001),细胞克隆形成能力降低(P<0.001),细胞增殖能力降低(P<0.001),细胞凋亡率增加(P<0.001),m TOR、p-p70S6K及Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:miR-199a-3p可能是通过调节m TORC1/p70S6K信号通路来抑制食管鳞癌细胞的增殖并促进细胞的凋亡。

浅析初中语文作文教学技巧

本文重点分析初中语文作文教学技巧,结合当前初中语文作文教学现状,从引入生活元素、引导学生正确写作、实现集体互评这几点进行系统研究,旨在提高初中语文作文教学效率。