Cyclin D1 siRNA转染人肝癌细胞的增殖、凋亡变化及其机制

目的观察Cyclin D1 siRNA转染的人肝癌细胞增殖、凋亡变化,并探讨其机制。方法培养人肝癌细胞株Hep3B,将细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。阴性对照组和实验组分别通过脂质体转染NC siRNA和Cyclin D1 siRNA,转染48 h后收获细胞。采用MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞仪观察凋亡细胞并计算细胞凋亡率;免疫组化法检测各组细胞中的Caspase-3蛋白;采用RT-PCR法检测各组细胞中的乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)、着色性干皮病基因蛋白D(XPD)、Bcl-2、Bax mRNA;Western blotting法检测各组细胞中的HBx、XPD、Bcl-2、Bax蛋白。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组细胞增殖能力减弱、凋亡率升高、Caspase-3相对表达量增高(P均<0.01)。与空白对照组和阴性对照组相比,实验组HBx、Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调,XPD、Bax mRNA及蛋白表达上调(P均<0.01)。结论 Cyclin D1 siRNA转染的人肝癌细胞增殖受到抑制、凋亡增多,其机制可能与HBx、Bcl-2表达下调及XPD、Bax表达上调有关。

灯盏细辛治疗肝硬化的疗效观察

目的:探讨灯盏细辛治疗肝硬化的临床疗效。方法:136例肝硬化患者随机分为两组:治疗组70例和对照组66例。治疗组采用灯盏细辛治疗;对照组采用一般支持治疗。结果:治疗组治疗后肝功能明显改善(P<0.05),对照组治疗前后血清白蛋白及胆红素无明显改变(P>0.05);治疗组治疗后肝纤五项明显下降(P<0.05),对照组治疗前后改变不明显(P<0.05),肝纤五项两组治疗后相比,有显著性差异(P<0.05)。结论:灯盏细辛可明显改善肝脏功能,降低肝脏纤维化,对肝硬化的治疗具有良好的前景。

α-干扰素联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的临床研究

目的 探讨α 干扰素和拉米夫定联合治疗慢性乙型肝炎的临床疗效及其影响因素。方法 将 5 8例慢性乙型肝炎患者随机分成治疗组和对照组的。治疗组同时使用α 干扰素及拉米夫定 6月 ,随后单用拉米夫定 6月 ;对照组单用拉米夫定 12月。结果 (1)治疗组HBV DNA阴转率 71.4 % (2 0 / 2 8)与对照组 6 3.3% (19/ 30 )相比 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;(2 )治疗组HBeAg/抗 HBe血清转换率 4 6 .2 % (13/ 2 8)明显高于对照组 2 0 % (6 / 30 ) (P <0 .0 5 ) ;(3)治疗组血清ALT及HBV DNA基线水平与病毒的完全应答率密切相关 (P <0 .0 5 ) ;(4 )在ALT >2×ULN及血清HBV DNA >1.0× 10 7拷贝 /ml的患者中 ,治疗组病毒的完全应答率明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 (1)α 干扰素联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎 ,HBV DNA阴转率与单用拉米夫定治疗无显著性差异 ,而HBeAg/抗 HBe血清转换率比单用拉米夫定治疗明显提高 ;(2 )对于ALT中度以上升高、HBV DNA高水平复制患者 ,α

双自杀基因CD+TK对胰腺癌BxPC-3细胞的影响

目的探讨逆转录病毒介导的双自杀基因对胰腺癌BxPC-3细胞的杀伤作用及胰腺癌的基因治疗方法。方法通过脂质体将含有双自杀基因的逆转录病毒载体MMLV-CD+TK导入包装细胞PA317,经G418筛选后大量培养产病毒的阳性克隆PA317/CD+TK细胞株,收集病毒上清液,浓缩后转染胰腺癌BxPC-3细胞系,再次经G418筛选,获得稳定表达双自杀基因的BxPC-3/CD+TK细胞株。用RT-PCR检测双自杀基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-flourocytosine,5-FC)和(或)无环鸟苷(Ganciciovir,GCV)后,MTT法测定转基因组及未转基因组胰腺癌BxPC-3系细胞的存活率。结果双自杀基因在胰腺癌BxPC-3系细胞中可稳定表达,联合使用5-FC和GCV对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应效果明显。结论逆转录病毒介导自杀基因可有效杀死胰腺癌Bx-PC-3系细胞,双自杀基因具有更强的抗肿瘤作用。

C-sis基因对过氧化氢诱导大鼠肝细胞凋亡的抑制作用

目的探讨大鼠C-sis基因对过氧化氢(H_2O_2)诱导肝细胞凋亡的影响。方法使用脂质体转染法把重组质粒pc DNA3.1/C-sis和空载质粒pc DNA3.1转染进入正常大鼠肝细胞株BRL细胞,转染后的6~8 h用浓度为200μmol/L的H_2O_2处理细胞,作用48 h后收获细胞。细胞分为正常对照组、空载质粒组、C-sis质粒组、H_2O_2组、空载质粒+H_2O_2组、C-sis质粒+H_2O_2组。利用荧光定量PCR检测C-sis的m RNA表达;利用Western blot检测C-sis的蛋白表达和Caspase3活性;利用CCK8检测细胞活力;利用TUNEL检测细胞凋亡;利用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果与正常对照组和空载质粒组相比,C-sis质粒组的C-sis m RNA和蛋白表达水平显著升高(P均<0.01)。与正常对照组相比,H_2O_2组的细胞活力明显下降(P<0.01),激活型Caspase3蛋白明显升高(P<0.01);与空载质粒+H_2O_2组相比,C-sis质粒+H_2O_2组的细胞活力升高(P<0.01),激活型Caspase3蛋白降低(P<0.05)。TUNEL结果显示,与正常对照组相比,H_2O_2组的细胞凋亡明显升高(P<0.01);与空载质粒+H_2O_2组相比,C-sis质粒+H_2O_2组的细胞凋亡明显降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,与正常对照组相比,H_2O_2组的细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与空载质粒+H_2O_2组相比,C-sis质粒+H_2O_2组的细胞凋亡明显降低(P<0.01)。各组之间的细胞周期没有明显区别(P>0.05)。结论 C-sis基因能抑制H_2O_2诱导的肝细胞凋亡,并促进其生长。

雷贝拉唑三联疗法根除93例Hp的临床疗效观察

目的:观察雷贝拉唑联合克拉霉素和阿莫西林根除幽门螺杆菌(Hp)的临床疗效.方法:将186例Hp阳性的消化性溃疡及慢性胃炎患者随机分为雷贝拉唑治疗组和奥美拉唑对照组,两组联合的抗菌药均为克拉霉素和阿莫西林,疗程1周.各组在治疗前1周内和治疗后4～8周分别检测Hp感染情况,并观察溃疡的愈合情况.结果:雷贝拉唑治疗组Hp根除率(96.8%)明显高于奥美拉唑对照组(89.2%)(P<0.05),两组溃疡愈合率比较无显著性差异(P>0.05).结论:雷贝拉唑联合克拉霉素和阿莫西林是根除Hp比较有效的治疗方案,值得临床进一步推广应用.

p73β基因对肝癌细胞的影响

目的扩增及鉴定包含人类p73基因TAp73β转录本蛋白编码区的cDNA片段,将此片段克隆入真核表达载体,转染肝癌细胞,观察其对肝癌细胞生物活性的影响。方法从手术活体组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增TAp73β基因全长编码序列CDS(full-length coding sequence),目的片段回收纯化后用限制性内切酶酶切及测序两种方法鉴定目的片段正确与否并检测其纯度、浓度;并转染肝癌Hep3B细胞,用MTT法进行细胞凋亡检测。结果该扩增片段经限制性核酸内切酶酶切图谱分析,与预期结果吻合,转染的肝癌Hep3B细胞出现凋亡。结论包含人类p73基因TAp73β转录本蛋白编码区的cDNA片段被成功扩增且末端带有限制性核酸内切酶XbaⅠ、KpnⅠ识别序列,它对肝癌细胞有抑制作用,从而为临床上肝癌的治疗提供了新思路。

肝硬化合并感染的C-反应蛋白水平及其临床意义

目的 探讨肝硬化合并感染后血清C 反应蛋白 (CRP)水平变化 ,评价CRP作为肝硬化并发感染的诊断价值。方法 采用速率散射比浊法 ,检测 5 8例肝硬化合并感染患者感染前后及感染控制后血清CRP浓度。结果 肝硬化并发感染前后及感染控制前后血清CRP浓度有显著性差异 (P <0 .0 1) ,并发感染后血清CRP浓度明显高于感染前 ,而感染控制后血清CRP浓度则明显降低。结论 血清CRP水平变化与有无感染密切相关 ,动态观察血清CRP水平 ,有助于肝硬化合并感染的早期诊断及抗感染疗效的判断。

甲亢导致肝损害临床相关因素研究

目的 探讨甲亢导致肝损害的临床相关因素。方法 回顾性分析 12 0例甲亢性肝损害及同期 15 6例单纯性甲亢的临床资料。结果 (1)甲亢导致肝损害的发生率 4 3.5 % ;(2 )甲亢年龄越大 ,肝损害的发生率越高 (P <0 .0 5 ) ;(3)肝损害的发生率与甲亢患者性别无关 (P >0 .0 5 ) ;(4 )甲亢性肝损害与甲亢病程密切相关 (P <0 .0 1) ;(5 )甲亢性肝损害患者血清FT3、FT4明显高于单纯性甲亢 (P <0 .0 1) ,而血清TSH则明显比单纯性甲亢低 (P <0 .0 1)。结论 甲亢容易导致肝损害 ,甲亢性肝损害与甲亢患者的年龄、病程及病情密切相关 。

拉米夫定联合苦参素治疗慢性乙型肝炎疗效观察

目的观察拉米夫定联合苦参素治疗慢性乙型肝炎的疗效。方法观察组和对照组均服用拉米夫定100mg,每日1次,疗程1年。观察组除拉米夫定外加苦参素注射液600mg,每日1次,疗程12周。结果观察组治疗12周时ALT的复常率为94%,对照组为65%,两组比较有显著差异(P<0.05);52周疗程结束时,两组ALT最终复常率无差异(100%、93%,P>0.05)。疗程结束时,观察组HBSAg阴转率为47%,HBSAg血清转换率为38%,对照组为别为21%、75%(P>0.05)。结论拉米夫定联合苦参素治疗慢性乙型肝炎具有互补与协同作用,较单一使用拉米夫定能更有效抑制乙型肝炎病毒的复制,提高HBSAg血清转换率,加快病人转氨酶的恢复。

2型糖尿病合并脂肪肝相关因素分析

目的:探讨2型糖尿病(2DM)合并脂肪肝的临床相关因素。方法:回顽性分析56例2DM合并脂肪肝患者及同期61例2DM无脂肪肝患者的临床资料。结果:(1)脂肪肝组甘油三酯(TG)明显高于无脂肪肝组(P<0.01),而高密度脂蛋白(HDL)则明显降低(P<0.05);(2)脂肪肝组胰岛素作用指数(IAI)明显低于无脂肪肝组(P<0.01),而体重指数(BMI)则明显升高(P<0.01)。结论:脂质代谢紊乱、胰岛素抵抗及肥胖与脂肪肝的形成密切相关,高甘油三酯血症、高胰岛素血症及肥胖是脂肪肝形成的高危因素。

利福昔明治疗急性细菌性肠道感染的疗效观察

目的：评价利福昔明治疗急性细菌性肠道感染的疗效和安全性。方法：采用随机双盲双模拟平行对照试验．急性细菌性肠道感染患者60例，随机分为两组，各30例。治疗组每次给予利福昔明0．2g，po，q6h，同时给予环丙沙星模拟片0．25g，bid，疗程3～5d．对照组每次给予环丙沙星0．25g．po，bid。同时给予利福昔明模拟片0．2g，q6h，疗程3～5d。结果：治疗组的治愈率和显效率分别是83．33％和13．33％，总有效率为96．67％；对照组分别是80％和20％，总有效率为i00％；利福昔明和环丙沙星的细菌清除率都是100％；不良反应发生率分别是6．67％和0％。与对照组相比．治疗组的各项结果均无显著性差异（P〉0．05）。结论：利福昔明治疗急性细菌性肠道感染具有较好的疗效，不良反应发生率低，值得临床推广应用。

靶向Cyclin D1基因RNA干扰对肝癌细胞增殖和Mdm2等基因表达影响的研究

目的探讨Cyclin D1表达下调对Mdm2等基因表达及人肝癌细胞增殖的影响。方法用脂质体将Cyclin D1-siRNA转染人肝癌细胞株Hep3B细胞。实验分为空白对照组、阴性对照siRNA组、Cyclin D1-siRNA组。采用RT-PCR和Western blot检测Cyclin D1、Mdm2、Mdm4、P53和P21表达,流式细胞仪检测细胞周期,MTT检测细胞活力,TUNEL检测细胞凋亡。结果与空白对照组和阴性对照siRNA组相比,Cyclin D1-siRNA组P53和P21表达上调(P<0.05),Cyclin D1、Mdm2和Mdm4表达下调(P<0.01);3组细胞周期G1、S及G2期均无明显差异(P>0.05);Cyclin D1-siRNA组较其他两组细胞活力明显减弱(P<0.01),细胞凋亡明显增强(P<0.01)。结论 Cyclin D1表达下调能抑制Mdm2和Mdm4的表达,并能上调P53和P21的表达;Cyclin D1表达下调能抑制肝癌细胞的增殖并促进其凋亡。

利胆清胰汤联合ERCP治疗肝胆湿热证胆源性胰腺炎的临床疗效研究

目的:探讨利胆清胰汤联合ERCP治疗肝胆湿热证胆源性胰腺炎的临床疗效。方法:按照治疗方案不同将111例肝胆湿热证胆源性胰腺炎患者分为治疗组56例和对照组55例,治疗组患者给予利胆清胰汤联合ERCP治疗,对照组患者仅给予ERCP治疗,比较两组患者治疗前后中医证候积分、APACHEⅡ评分、尿淀粉酶与血清淀粉酶水平变化情况以及临床疗效。结果:治疗组患者总有效率(92.86%)显著高于对照组(81.82%)(P<0.05)。治疗组患者治疗后中医证候积分(3.75±2.11分)、APACHEⅡ评分(17.62±1.30分)、尿淀粉酶(232.22±40.58 U/L)及血清淀粉酶(54.35±12.68 U/L)水平均显著低于对照组(7.60±3.91分、21.65±1.85分、368.74±55.77 U/L、88.62±35.16 U/L)(P<0.05)。结论:在ERCP基础上给予利胆清胰汤治疗能够有效改善肝胆湿热证胆源性胰腺炎患者的临床症状和胰腺功能,提高治疗效果。