干化学法尿隐血检测的可靠性分析

目的探讨干化学法尿隐血检测的可靠性。方法收集843例泌尿外科住院患者及403名体检人员的尿液标本。分析干化学法尿隐血检测与显微镜检测尿沉渣红细胞(镜检)结果的相符性。结果 843份泌尿外科尿标本中,482份干化学法尿隐血检测阳性,431份(51.1%)镜检阳性;干化学法尿隐血检测阴性与镜检阴性的相符率为98.9%。在843例泌尿外科住院患者和403名体检人员的尿液标本中,干化学法尿隐血检测结果为±、+时,两种方法检测结果相符率远低于干化学法尿隐血检测结果为阴性、++、+++时两种方法检测结果相符率(P<0.05)。两种方法检测279例泌尿系统结石患者阳性相符率最低。结论干化学法尿隐血检测可靠性欠佳,当检测结果异常时,应结合镜检报告结果进行综合判断。

5-氮-2'-脱氧胞苷逆转膀胱癌细胞hepaCAM基因的表达及对其生长的抑制

目的研究5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)逆转hepaCAM表达及抑制膀胱癌细胞的生长。方法 MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR检测hepaCAM mRNA的表达。结果在T24细胞中,3.0和10.0μmol/L5-aza-CdR药物浓度的抑制率明显高于0.3和1.0μmol/L 5-aza-CdR(P<0.05),在BIU-87细胞中,5.0μmol/L5-aza-CdR药物浓度的抑制率明显高于0.1和0.5μmol/L(P<0.05),并且药物处理细胞72 h的抑制率明显高于24和48 h(P<0.05);5-aza-CdR处理细胞后,T24和BIU-87细胞凋亡数明显增加(P<0.05);并可逆转hepaCAMmRNA表达。结论 5-aza-CdR可使hepaCAM基因重新表达,并通过诱导凋亡而抑制膀胱癌细胞的生长。

PLCε特异性shRNA对人膀胱癌生物学行为的影响

目的探讨人源磷脂酶Cε(PLCε)特异性短发夹RNA(shRNA)对人膀胱癌增殖、凋亡、侵袭、转移能力的影响。方法用携带PLCεshRNA基因的真核表达质粒pGenesil-PLCε转染BIU-87细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测各组细胞PLCεmRNA和蛋白的变化。分别用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞术和免疫组化检测BIU-87细胞及裸鼠移植瘤增殖情况和细胞周期的变化;采用RT-PCR检测各组细胞Bcl-2、Bax mRNA的变化;采用Transwell小室体外侵袭法及明胶酶谱分析细胞的侵袭能力。结果转染pGenesil-PLCε质粒的细胞可明显抑制PLCε基因和蛋白表达水平(P<0.05);MTT、流式细胞术与免疫组化检测结果表明转染pGenesil-PLCε质粒的细胞生长明显受抑制(P<0.05),且细胞周期阻滞于G0/G1期;转染pGenesil-PLCε质粒的细胞Bcl-2/Bax mRNA明显降低(P<0.05);明胶酶谱及侵袭实验显示转染pGenesil-PLCε质粒的细胞侵袭、转移能力明显下降(P<0.05)。结论特异性shRNA干扰PLCε基因可抑制膀胱癌的生长,其作用机制可能与抑制肿瘤增殖、诱导细胞凋亡及抑制侵袭转移有关,PLCε为膀胱癌基因治疗的潜在靶点。

HBV-DNA实时荧光定量PCR检测试剂盒性能验证

目的基于ISO15189:2012要求,对一种国产HBV-DNA实时荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒的性能参数进行验证,以评价其是否可应用于临床检测。方法依据《医学实验室质量和能力认可准则》相关文件对试剂盒的正确度、精密度、检测下限、线性范围、特异度和抗干扰能力进行性能验证。结果试剂盒正确度符合要求(<靶值对数值±0.4)。低值和高值的批内精密度CV为4%、0.65%,标准差(s)为0.19、0.04;低值和高值的中间精密度CV为4.75%、1.33%,s为0.17、0.09。HBV-DNA定量的检测下限定为100IU/mL。线性范围为1.00×102~5.00×108 IU/mL。特异度符合要求。血红蛋白浓度不大于28g/dL、总胆红素浓度不大于30mg/dL、三酰甘油浓度不大于3 200mg/dL,对检测结果没有影响(<靶值对数值±0.4)。结论试剂盒的性能参数符合厂家声明,可以应用于临床检测工作。

不良孕产患者宫颈分泌物解脲脲原体和沙眼衣原体核酸检测及临床意义

目的分析不良孕产患者宫颈分泌物中解脲脲原体(UU)和沙眼衣原体(CT)感染情况及临床意义,比较荧光探针聚合酶链反应(FQ-PCR)和实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)检测UU、CT核酸的性能差异。方法应用FQ-PCR和SAT分别检测98例不良孕产患者(观察组)及38例健康妇女(对照组)宫颈分泌物中UU-DNA、CT-DNA和UU-RNA、CT-RNA,并进行统计学分析处理。结果观察组UU-DNA、CT-DNA检出率和总检出率均高于对照组(P<0.05)。在<35岁年龄段,观察组UU-DNA、CT-DNA检出率和总检出率均高于对照组(P<0.05);在≥35岁年龄段,观察组UU-DNA检出率和总检出率均高于对照组(P<0.05)。自发性流产、异位妊娠和不孕症患者的UU-DNA、CT-DNA检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组中UU-RNA与UU-DNA、CT-RNA与CT-DNA检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);但在对照组中,UU-RNA检出率明显高于UU-DNA(P<0.05),CT-DNA与CT-RNA的检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论不良孕产患者宫颈分泌物中UU检出率较高。FQ-PCR和SAT检测均能为临床诊断UU和CT感染提供依据,而在无症状感染人群中,SAT检测UU更具优势。

丙型肝炎病毒-核糖核酸定量检测系统的性能验证及评价

目的对基于Smart 32核酸提取仪和Roche Cobas z480实时荧光PCR仪的丙型肝炎病毒(HCV)-核糖核酸(RNA)定量检测系统进行性能验证。方法依据中国合格评定国家认可委员会(CNAS)-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》的方案,采用标准物质及临床样本,对检测系统的正确度、精密度、线性范围、抗干扰能力、检出限、最低定量限进行验证,同时计算各性能参数与制造商声明比较。结果精密度验证结果显示,高、低浓度水平样本的重复性精密度变异系数(CV)值分别为1.54%、3.61%,中间精密度CV值分别为2.16%、4.42%,均小于厂家声明的5%。正确度:低、中值两个浓度水平标准物质的均值与靶值的误差分别为0.06和0.08,均<±0.4。线性范围:经拟合分析,证实在50~1.2×107 IU/mL呈良好线性(R2=0.9955>0.97)。抗干扰能力验证:结果显示,含30 mg/dL胆红素、3.2 g/dL甘油三酯、30 g/dL血红蛋白、6 g/dL白蛋白的干扰物质对样本检测结果无影响,且对甘油三酯和血红蛋白的抗干扰能力略高于厂家声明。检出限20 IU/mL,最低定量限50 IU/mL也与制造商声明一致。结论HCV-RNA定量检测系统正确度、精密度、线性范围、抗干扰能力、检出限、最低定量限各项性能指标与制造商声明一致,满足国际标准化组织(ISO)15189要求,可用于临床检测。

糖尿病心肌病早期诊断标志物研究进展

糖尿病心肌病是糖尿病患者的重要并发症,以心脏僵硬、心肌纤维化等为主要特征,最终进展为心力衰竭而死亡。糖尿病心肌病患者在疾病后期并发症不可逆转前往往没有症状,因此探索可以识别早期糖尿病心肌病的生物标志物,对于降低糖尿病心肌病患者的死亡率具有重要意义。本文旨在通过文献计量学方法对近30年来糖尿病心肌病诊断的研究进行综述,预测该领域在全球的发展趋势,为开发临床糖尿病心肌病早期诊断标志物提供重要思路。

PLCε基因shRNA重组腺病毒表达质粒的构建及鉴定

目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)标签的表达PLCε基因shRNA的重组腺病毒质粒Ad-U6-PLCε,为应用基因沉默技术研究膀胱癌的基因治疗奠定基础。方法将干扰质粒pGenesil-PLCε及阴性对照质粒pGenesil-NP的表达启动子U6及shRNA序列克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的穿梭质粒pAdTrack,经酶切及测序鉴定正确后,将重组穿梭质粒经PmeI线性化,转化感受态AdEasier。重组pAdEasy-U6-PLCε质粒经PacI线性化后,转染HEK-293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-PLCε,经大量扩增后测定病毒滴度,RT-PCR及Western blot检测T24细胞内PLCε的表达情况。结果酶切及测序鉴定证实pAdTrack-U6-PLCε及重组pAdEasy-U6-PLCε质粒构建正确,并成功转染至HEK-293细胞,重组腺病毒Ad-U6-PLCε滴度达1.5×1012,经重组腺病毒感染的T24细胞内PLCεmRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论已成功构建针对PLCε基因的shRNA重组腺病毒载体Ad-U6-PLCε,为应用基因沉默技术研究PLCε对膀胱癌发生发展的作用奠定了基础。

PLCε调节肾细胞癌血管生成的作用机制

目的探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在PLCε-NF-κB信号通路中影响肿瘤血管生成的作用机制。方法将PLCε-shRNA表达质粒pGenesil-PLCε转染人肾透明细胞癌786-0细胞株,沉默磷脂酶Cε(Phos-pholipase C epsilon,PLCε)基因的表达,采用RT-PCR及Western blot检测转染细胞中PLCε、NF-κB和VEGF基因mRNA及蛋白水平表达的变化;应用NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082处理细胞后,采用MTT法检测BAY11-7082对786-0细胞增殖的抑制作用,RT-PCR和Westernblot检测VEGF基因mRNA和蛋白水平表达的变化。结果重组质粒pGenesil-PLCε可明显抑制PLCε基因mRNA和蛋白水平的表达,抑制率分别为71.43%和50.01%,并明显下调NF-κB和VEGF基因mRNA和蛋白水平的表达;BAY11-7082可明显抑制786-0细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性;应用BAY11-7082后,VEGF基因mRNA和蛋白的表达均被明显抑制。结论 PLCε可能通过抑制NF-κB基因的表达,从而抑制NF-κB依赖性基因VEGF的表达,进而影响肾细胞癌血管生成。