益气活血药对心梗大鼠心肌细胞肥大和HDAC4-MEF2C的影响

目的观察益气活血药对心梗大鼠心肌细胞肥大和组蛋白去乙酰化酶4(histone deacetylases4,HDAC4)-肌细胞增强因子(myocyte enhancer facter 2C,MEF2C)的影响,探讨益气活血药影响心肌细胞肥大的机制。方法结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死大鼠模型,并随机分为模型组、培哚普利组、益气活血组,另设假手术组只穿线不结扎,每组大鼠15只。术后两天灌胃给药,以7、28天为观测点。小动物超声检测各组大鼠心脏结构和功能的变化,HE染色观察心肌病理形态改变,用Western blot法检测大鼠心肌梗死边缘区HDAC4及其磷酸化蛋白p-HDAC4的表达,用RT-PCR法检测MEF2C mRNA的表达。结果模型组大鼠与假手术组相比,心脏左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室短轴率(left ventricular fractional shortening,LVFS)显著降低(P<0.01),左室收缩末期内径(left ventricular internal dimension systole,LVIDs)、左室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVIDd)显著升高(P<0.01);与模型组相比,各给药组LVEF、LVFS均显著升高(P<0.05,P<0.01);术后28天,益气活血组LVIDs、LVIDd显著低于模型组(P<0.01)。与假手术组比较,模型组和用药组的心肌细胞的横截面面积明显增大(P<0.01);与模型组比较,用药组的心肌细胞的横截面积降低(P<0.01,P<0.05)。模型组大鼠HDAC4表达显著高于假手术组(P<0.01),用药组与模型组相比有所降低但差异无统计学意义。模型组大鼠p-HDAC4蛋白表达显著高于假手术组(P<0.01),7天时,用药组大鼠表达量显著低于模型组(P<0.01);28天时,益气活血组与模型组相比有所降低(P<0.05)。模型组大鼠MEF2C mRNA均高于假手术组(P<0.01),用药组与模型组相比MEF2C mRNA表达降低(P<0.01,P<0.05)。结论益气活血药可能通过抑制HDAC4磷酸化影响HDAC4-MEF2C通路异常病理信号传导减轻心梗大鼠心肌细胞肥大水平。

益气活血方作用NGF对大鼠心肌梗死后神经重构的影响

目的观察益气活血方对心肌梗死大鼠神经重构和相关因子神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体酪氨酸蛋白激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)、p75神经营养因子受体(p75 neurotrophic receptor,p75NTR),以及巨噬细胞表达情况的影响,探讨益气活血方作用神经重构的作用机制。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支建里急性心肌梗死动物模型,将造模成功的大鼠进行依术后24小时心电图坏死性Q波数量随机分组,共分为4组,对照组(即假手术组)、模型组、益气活血方组、阳性药物美托洛尔组,每组20只,并以术后7天、28天作为观察时间点。按时间点处死取材,取大鼠梗死及周围组织,用HE染色法观察心肌梗死周围组织的病理情况;用免疫组化法观察交感神经阳性纤维表达,以及巨噬细胞浸润情况;用免疫蛋白印迹法检测大鼠NGF、TrkA、p75NTR的蛋白表达。结果 两个时间点模型组梗死周围游离壁酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性纤维的密度显著高于假手术组(P<0.01);与模型组相比,各给药组TH显著降低(P<0.01)。两个时间点模型组相较假手术组CD68巨噬细胞阳性计数增加(P<0.01),两用药组较模型组均有减少(P<0.01)。两个时间点模型组梗死周围NGF及其受体TrkA、p75NTR表达相较于假手术组均有明显升高(P<0.01),术后7天,美托洛尔组的NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达较模型组均有所降低(P<0.01),益气活血组的NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达较模型组也均有所下降(P<0.05);术后28天,美托洛尔组的NGF、p75NTR蛋白表达较模型组均明显降低(P<0.01),TrkA蛋白表达较模型组有所降低(P>0.05);益气活血组的NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达较模型组也均有所下降(P<0.05)。结论益气活血方可以有效减少巨噬细胞浸润,降低NGF及其受体TrkA、p75NTR的分泌和表达,从而改善心肌梗死后神经重构的情况。

益气活血药水提物与水提醇沉物对H9c2心肌细胞缺氧损伤的药效比较研究

目的:研究益气活血药水提物与水提醇沉物对大鼠心肌细胞缺氧损伤的药效影响,并筛选出最佳的提取工艺。方法:建立体外心肌细胞缺氧模型,选取水提法及水提醇沉法制备的益气活血药进行干预,观察缺氧损伤后心肌细胞活力、细胞生存率、细胞形态学及上清中乳酸脱氢酶LDH释放量的变化情况,比较2种提取物的药效学差异。结果:益气活血药水提物与水提醇沉物均可一定程度上增加缺氧心肌细胞的活力,水提法益气活血药减轻LDH外漏优于水提醇沉法(P<0.01)。结论:益气活血药对H9c2心肌细胞缺氧损伤具有保护作用,且同剂量下以水提物为佳。

益气活血药对心肌梗死后大鼠小肠黏膜屏障及肠道菌群的影响

目的观察益气活血药对心梗后大鼠肠道黏膜屏障、肠道菌群及封闭蛋白的影响。方法采用结扎左冠状动脉前降支制备 SD 大鼠的心肌梗死模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、益气活血药组、酒石酸美托洛尔组,连同假手术组,每组 10 只。实验分为 7 天和 28 天两个时间节点。术后第 2 天开始灌胃给药,益气活血方组 8. 2 g/( kg·d)、酒石酸美托洛尔组 5 mg/( kg·d),模型组和假手术组给予等量蒸馏水灌胃。分别于灌胃 7 天和 28 天后采集大鼠小肠(回肠)组织及食糜。HE 染色观察小肠(回肠)黏膜结构,测量绒毛高度、隐窝深度,并计算绒毛高度/隐窝深度( Villus height / Crypt depth ,V/C)比值;实时荧光定量 PCR方法观察小肠有益菌(双歧杆菌、乳杆菌)和有害菌(大肠杆菌、和肠球菌)的变化;免疫组化方法检测封闭蛋白表达的变化。结果在 7 天和 28 天两个时间节点中,与假手术相比,模型组绒毛高度下降( P < 0. 01),隐窝深度变浅( P <0. 01),V/C 比值减小( P < 0. 01),Occludin 蛋白表达明显减少( P < 0. 01),有益菌数量均明显减少( P <0. 01),有害菌数量明显增加( P < 0. 01);与模型组相比,各给药组绒毛高度明显升高( P <0. 01),隐窝变浅( P <0. 05),V/C 比值明显增大( P <0. 01),益气活血药组有益菌数量显著增加( P <0. 01),有害菌数量显著减少( P <0. 01),两用药组趋势相同,两者数量无统计差异,益气活血药组 Occludin 蛋白的表达增加( P <0. 01)。结论本实验发现心梗大鼠小肠形态及功能受到影响,益气活血药干预可改善心梗后大鼠肠道形态结构,提高小肠的消化与吸收能力,调节小肠菌群。

益气活血方对心肌梗死大鼠心肌纤维化影响的研究

目的检测大鼠心肌梗死后心肌纤维化相关指标的变化,从而探讨益气活血方对其的改善和治疗作用。方法 (1)结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死动物模型,依据梗死后24小时心电图坏死性Q波的数量随机分为三组:模型组、益气活血组、培哚普利组,另设假手术组(只开胸穿线但不结扎),并以7天和28天为两个观察时间点。(2)术后24小时各组大鼠予灌胃治疗。取材前一天行大鼠心脏彩色多普勒超声检测心脏功能学变化:左室射血分数(left ventricular ejection fractions,LVEF)、左室短轴率(left ventricular fraction shortening,LVFS)、左室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVIDd)、左室收缩末期内径((left ventricular internal dimension systole,LVIDs)。(3)于造模后第7天、第28天行心脏取材。HE染色法观察药物对心肌组织病理形态变化的影响,Western Blot检测Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)、转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1),结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白的表达水平。结果 (1)7天时:与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS均降低(P<0.05),LVIDs、LVIDd均升高(P<0.05),collagenⅠ、collagenⅢ、TGF-β1、CTGF均升高(P<0.05);与模型组比较,培哚普利组和益气活血组LVEF、LVFS均升高,LVIDs降低(P<0.05),collagenⅢ、TGF-β1、CTGF表达下降(P<0.05)。(2)28天时:各组LVEF、LVFS与7天时相似,给药组TGF-β1、CTGF蛋白表达较模型组有所减少(P<0.05),模型组大鼠与益气活血组的collagenⅠ、collagenⅢ表达差异不显著(P>0.05)。结论益气活血方能够明显提高心肌梗死大鼠心功能,减轻心肌纤维化程度,对心脏具有保护作用,其保护机制可能与下调TGF-β1和CTGF的表达,进而减少胶原蛋白的分泌有关。

紫杉醇/白蛋白紫杉醇为基础的化疗联合PD-1/PD-L1抑制剂治疗三阴性乳腺癌的疗效和安全性:荟萃分析

目的探讨以紫杉醇/白蛋白紫杉醇为主体的化疗方案联合程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抑制剂在治疗三阴性乳腺癌(TNBC)的疗效及安全性。方法检索国内外数据库,检索时限均从数据库建库起至2021年12月9日。根据纳人及排除标准选择接受治疗的TNBC患者,试验组方案为PD-1/PD-L1抑制剂联合以紫杉醇/白蛋白紫杉醇为基础的化疗,对照组方案为安慰剂联合以紫杉醇/白蛋白紫杉醇为基础的化疗。采用RevMan5.4.1软件分析相关数据。通过异质性检验后,采用固定效应模型或随机效应模型进行Meta分析,通过漏斗图评价发表偏倚性。结果PD-1/PD-L1抑制剂联合以紫杉醇/白蛋白紫杉醇为基础的化疗试验组,其总生存率(OS)显著长于安慰剂联合化疗的对照组(P<0.05);在无进展生存期(PFS)及客观缓解率(ORR)方面,试验组也均优于对照组(P<0.05);试验组中出现治疗相关不良反应(TRAE)患者人数高于对照组(P<0.05)PD-L1受体阳性的TNBC患者中,在OS及PFS方面,试验组均优于对照组。结论接受PD-1/PD-L1抑制剂治疗联合紫杉醇/白蛋白紫杉醇为基础的TNBC化疗患者OS、PFS、ORR方面均有显著改善。

益气活血方对心肌梗死大鼠心肌毛细血管形态及VEGFR-2和HIF-1α的影响

目的:对益气活血方进行药理机制研究,探讨其对心肌缺血大鼠HIF-1α、VEGFR-2相关基因和蛋白的表达及对心肌组织毛细血管结构的病理改变的影响。方法:通过构建急性心肌梗死大鼠模型,加以益气活血方和培哚普利进行7、28d时间节点干预,超声心动仪检测大鼠左心功能指标,电镜观察梗死边缘区心肌组织超微结构,RT-PCR和Western blot检测梗死边缘区心肌组织血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、缺氧诱导因子(HIF-1α)的基因和蛋白表达的变化情况。结果:随着时间的发展,与模型组比较,28d益气活血组左心功能明显增强(P<0.01),毛细血管直径增大,VEGFR-2及其上游缺氧应答的核心调控因子HIF-1α的m RNA和蛋白表达均降低(P<0.01)。结论:本研究动态揭示了心肌缺血修复中血管新生及相关因素的调控过程,同时为促血管新生"搭桥"、实现心肌的血运重建以改善心肌缺血的治疗提供依据。

益气活血颗粒对心肌梗死大鼠尿液代谢组学的影响

目的观察益气活血颗粒对心肌梗死后大鼠尿液中代谢物质的影响。方法采用结扎左冠状动脉前降支制备SD大鼠的心肌梗死(MI)模型,将造模成功的大鼠随机分为7 d组和28 d组。每组再次随机分为模型组、培哚普利组、芪参益气滴丸组和益气活血颗粒组,另设只穿刺不结扎的假手术组。术后第2天开始培哚普利组(0.4 mg/kg)、芪参益气滴丸组(30 mg/kg)、益气活血颗粒组(21 g/kg)每天给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量蒸馏水灌胃。分别于灌胃7 d和28 d后收集大鼠尿液。尿液样本中含有的代谢物质种类相同,但含量不同,通过核磁共振氢谱检测分别筛选出7 d组和28 d组中差异代谢物质,并在假手术组和模型组比较得到的共同差异代谢物基础上,比较益气活血颗粒组与模型组的差异。结果灌胃7 d后初步筛选出有差异的代谢物质16种(P<0.05)。模型组与假手术组相比,尿液中找到差异代谢物9种(P<0.05),其中模型组赖氨酸、β-羟丁酸、脯氨酸、谷氨酸、草酰乙酸酯含量较假手术组降低,而天冬酰胺、果糖、异亮氨酸、丝氨酸含量较假手术组升高。益气活血颗粒组与模型组比较,找到差异代谢物6种(P<0.05),益气活血颗粒组赖氨酸、β-羟丁酸、谷氨酸、草酰乙酸酯的含量较模型组升高,果糖、异亮氨酸含量较模型组降低。灌胃28 d后初步筛选出差异代谢物质25种(P<0.05)。模型组与假手术组相比,尿液中找到差异代谢物14种(P<0.05),其中模型组β-羟丁酸、谷氨酸、甲胺、半胱氨酸、甜菜碱、胆碱、乳酸、脯氨酸、苏氨酸、苹果酸、烟酸含量较假手术组降低,而鸟氨酸、γ-氨基丁酸、α-葡萄糖含量较假手术组升高。益气活血颗粒组与模型组比较找到差异代谢物12种(P<0.05),益气活血颗粒组谷氨酸、半胱氨酸、甜菜碱、胆碱、乳酸、脯氨酸、苏氨酸、苹果酸、烟酸含量较模型组升高,鸟氨酸、甲胺、α-葡萄糖的含量较模型组降低。结论 MI后大鼠出现多种代谢障碍,而益气活血颗粒可有效调节紊乱的代谢产物,促使其向正常范围转归。