基于响应面法优化沙棘普洱茶粉水提工艺及体外抗氧化能力评价研究

以沙棘普洱茶粉水提液中可溶性固形物为响应值,基于单因素及Box-Benhnken响应面法优化实验研究不同料液比、时间、温度、pH的影响.对不同原料配比下的沙棘普洱茶粉进行有效成分检测及体外抗氧化实验,分析、评价其体外抗氧化能力.得到沙棘普洱茶粉(沙棘叶∶普洱茶末=4∶1)的最优水提工艺条件为料液比(原料∶水)为1∶8(g/mL)、提取温度为79℃、提取时间为3 h、pH为8.3.沙棘普洱茶粉的活性成分含量较单一茶粉有所提高,对DPPH(2,2,-diphenyl-1-picrylhydrazyl)、ABTS(2,2′-azinobis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)、CuPRAC(Cupric ReducingAntioxidant Power)及FRAP(Ferric Reducing Antioxidant Power)均具有较强的清除能力,制备的沙棘普洱茶粉均具有较好的体外抗氧化作用,为沙棘、普洱茶资源利用及功能性茶粉的开发提供一定参考.

枸杞清汁酶解澄清工艺优化及体外抗氧化作用

采用果胶酶酶解法提高枸杞清汁透光率,并进一步对其体外抗氧化能力进行研究,以440 nm及660 nm透光率为响应值,研究不同果胶酶添加量、酶解时间、酶解温度、底物pH值对枸杞清汁酶解后澄清效果的影响。通过体外抗氧化试验DPPH自由基清除率、ABTS^(+)自由基清除率、铜离子还原能力(cupric reducing antioxidant power,CUPRAC)及铁离子还原抗氧化能力(ferric reducing antioxidant power,FRAP)对比VC、枸杞原汁及枸杞清汁的抗氧化能力。结果表明,枸杞清汁最优酶解工艺条件为果胶酶添加量0.02%、酶解温度30℃、酶解时间4 h、底物pH4。枸杞清汁对DPPH自由基、ABTS+自由基均具有较强的清除能力,同时具有较强的还原能力,其中对铜离子还原能力最强。采用果胶酶酶解可以提高枸杞汁的澄清度,制备的枸杞清汁具有较好的体外抗氧化作用。

中药秦艽基原植物的DNA分子鉴定

[目的]分析秦艽基原植物间不同DNA序列的差异,为秦艽药材DNA条形码的筛选和基原鉴定提供分子证据。[方法]采用PCR扩增纯化后直接测序的方法,测定大叶秦艽（G.macrophylla Pall.）、麻花艽（G.straminea Maxim.）、粗茎秦艽（G.crassicaulis Duthie exBurk.）、小秦艽（G.dahurica Fisch）、黄管秦艽（G.officinalis H.Smith）5种植物的核糖体DNA ITS、叶绿体DNApsbA-trnH核苷酸序列,并作序列同源性分析。[结果]cpDNApsbA-trnH序列长度变异范围为316~318 bp,有7种不同的单倍型,单倍型间有7个变异位点,序列的GC含量为21.2%;最大简约树的聚类结果与单倍型反映的结果一致。nrDNAITS序列长度变异范围为624~625 bp,有5种不同的单倍型,单倍型间有12个变异位点,序列的GC含量为59.3%;最大简约树的聚类结果表明,小秦艽与麻花艽聚为一支,大叶秦艽与黄管秦艽聚为一支,粗茎秦艽位于聚类图的最基部。[结论]nrDNAITS序列较适合作秦艽基原植物的DNA分子鉴定。

一种高效提取虎耳草科植物基因组DNA的方法

[目的]探索从虎耳草科植物中提取DNA的有效方法。[方法]采用改进的CTAB法,从11种虎耳草科植物中提取DNA。以提取的DNA为模板,利用通用引物"psbAF"和"trnHR"对虎耳草科植物叶绿体DNApsbA-trnH片段进行PCR扩增。[结果]通过该方法提取的DNA纯度较高,质量较好。用所得DNA进行psbA-trnH扩增的产量高,可用于后续的测序等分析。对山地虎耳草的PCR产物纯化后进行测序,得到262 bp的序列。将其与GenBank中的虎耳草属其他植物的psbA-trnH序列进行比对分析,证实该序列为目标psbA-trnH片段的区域。[结论]该方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,提取的基因组DNA可用于叶绿体psbA-trnH测序分析和其他遗传学分析。

青海栽培黄管秦艽的叶绿体DNA psbA-trnH核苷酸变异和遗传分析

[目的]研究青海栽培黄管秦艽（Gentiana officinalis H.Smith）的遗传多样性,对黄管秦艽遗传分化进行分析,为其品种选育提供建议。[方法]应用叶绿体DNApsbA-trnH序列对青海地区栽培黄管秦艽6个居群进行遗传多样性分析。[结果]共发现10种不同的单倍型,通过单倍型序列间比对,发现了7个变异位点,黄管秦艽具有较高的遗传多样性（h=0.771）,单倍型多态性水平（h）为0.563~0.857,核苷酸多态性水平（π）为0.002 43~0.006 31。居群遗传分化系数Gst为0.196 0,基因流Nm值为2.05,80.40%遗传变异主要存在于居群内。[结论]青海栽培黄管秦艽的种质遗传多样性较高,有利于培育高品质的药材。

虎耳草属山羊臭组的界定和系统发育:核糖体DNA ITS序列证据

虎耳草属Saxifraga山羊臭组sect.Ciliatae是该属中最大的一个组,共有175种,主要分布在喜马拉雅地区,我国分布有166种,占总种数的95%;其中,112种为中国特有。约80%的种类分布在我国青藏高原和西南地区,是中国喜马拉雅植物成分的代表类群。山羊臭组内物种分化十分显著,分类处理也很困难,该组是否为单系类群,组下的系统发育关系也不清楚,均需进一步验证。本文测定了虎耳草属山羊臭组及其他组33种植物样品的核糖体DNA内转录间隔区ITS序列,并从GenBank调取虎耳草组sect.Saxifraga等组和近缘属唢呐草属Mitella共22种植物的该序列。ITS分析结果表明:(1)所研究的山羊臭组类群聚为单独一支,而且与垫状组sect.Porphyrion、虎耳草组、球茎组sect.Mesogyne和仅在欧洲分布的sect.Cymbalaria和sect.Cotylea等8个组聚成的另一分支构成姊妹群;(2)根据形态特征建立的山羊臭组的3个亚组即唐古拉亚组subsect.Hirculoideae、莲座状亚组subsect.Rosulares和具芽亚组subsect.Gemmiparae各自聚为一支,但是莲座状亚组这一支的支持率较低。同时,山羊臭组的鞭匐枝亚组subsect.Flagellares和subsect.Hemisphaericae的代表类群单独聚为一支,位于具芽亚组类群分支内部而不能成立;(3)唐古拉亚组和莲座状亚组又聚为一亚分支与具芽亚组构成姊妹群,而且具芽亚组最早从山羊臭组这一支中分化出来。我们的研究还发现山羊臭组内种间形态分化较大,而ITS碱基变异较小,这可能是山羊臭组类群在青藏高原及毗邻地区的高山环境下物种快速分化的结果。

青海野生与栽培麻花艽psbA-trnH序列的比较

[目的]分析野生与栽培麻花艽(Gentiana straminea Maxim.)psbA-trnH序列的差异,为麻花艽的基源鉴定和品质评价提供分子依据。[方法]采用PCR扩增纯化后直接测序的方法,测定野生与栽培麻花艽cpDNA psbA-trnH核苷酸序列并作序列同源性分析。[结果]野生与栽培麻花艽的cpDNA psbA-trnH片段长度分别为316和317 bp,两者之间有4个碱基的变异。[结论]利用psbA-trnH区序列的差异可以鉴别野生与栽培麻花艽。

中药秦艽基原植物的DNA分子鉴定(英文)

[目的]分析秦艽基原植物间不同DNA序列的差异,为秦艽药材DNA条形码的筛选和基原鉴定提供分子证据。[方法]采用PCR扩增纯化后直接测序的方法,测定大叶秦艽G.macrophylla pall.、麻花秦艽G.straminea Maxim.、粗茎秦艽G.crassicaulis Duth-ieex Burk.、小秦艽G.dahurica Fisch、黄管秦艽G.officinalis H.Smith5种植物的核糖体DNAITS、叶绿体DNA psbA-trnH核苷酸序列,并作序列同源性分析。[结果]cpDNA psbA-trnH序列长度变异范围为316-318bp,有7种不同的单倍型,单倍型间有7个变异位点,序列的GC含量为21.2%。最大简约树的聚类结果与单倍型反映的结果一致。nrDNA ITS序列长度变异范围为624～625bp。有5种不同的单倍型、单倍型间有12个变异位点,序列的GC含量为59.3%。最大简约树的聚类结果表明,小秦艽与麻花艽聚为一支,大叶秦艽与黄管秦艽聚为一支,粗茎秦艽位于聚类图的最基部。[结论]nrDNAITS序列较适合作秦艽基原植物的DNA分子鉴定。

麻花艽8种微量元素测定方法的建立

目的探讨青海麻花艽根、茎、叶三个不同部位8种微量元素含量测定方法。方法采用微波消解-火焰原子吸收光谱法（FAAS）法建立青海麻花艽根、茎、叶中钙、铜、铁、锰、锌、镁、铅、镉8种微量元素的测定方法。结果该方法的相对标准偏差介于1．5％～2．21％，平均回收率在97％-99．3％之间，分析结果令人满意。结论建立的方法、快速、准确灵敏度高。

同时测定浓缩桂附地黄丸中丹皮酚和马钱苷含量方法的建立

目的建立一种准确、高效的方法同时测定浓缩桂附地黄丸中丹皮酚、马钱苷含量,有效控制浓缩桂附地黄丸生产质量。方法借助反相高效液相色谱法建立相应方法。结果丹皮酚的线性范围5.245～62.58μg/mL(r=0.9994),平均回收率为98.7%,RSD为2.45(n=7);马钱苷的线性范围1.90～22.8μg/mL(r=0.999 7),平均回收率为99.8%,RSD为0.47(n=7)。结论所建方法简便、可靠,可有效控制制剂质量。*

青海栽培黄管秦艽的叶绿体DNA psbA-trnH核苷酸变异和遗传分析(英文)

[目的]研究青海栽培黄管秦艽Gentiana officinalis H.Smith的遗传多样性,对黄管秦艽遗传分化进行分析,为其品种选育提供建议。[方法]应用叶绿体DNApsbA-trnH序列对青海地区栽培黄管秦艽6个居群进行遗传多样性分析。[结果]共发现10种不同的单倍型,通过单倍型序列间比对,发现了7个变异位点,黄管秦艽具有较高的遗传多样性(h=0.771),单倍型多态性水平(h)为0.563-0.857,核苷酸多态性水平(π)为0.00243-0.00631。居群遗传分化系数Gst为0.1960,基因流Nm值为2.05,80.40%遗传变异主要存在于居群内。[结论]青海栽培黄管秦艽的种质遗传多样性较高,有利于培育高品质的药材。

RP-HPLC测定当归养血丸中芍药苷含量

目的:建立当归养血丸中芍药苷的HPLC含量测定方法。方法:采用反相-高效液相色谱法,Hypersil ODS色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(32:68),检测波长为230nm,流速1mL.min-1,柱温30℃,进样量10μL。结果:芍药苷的平均回收率为98.7%,RSD 1.7%(n=7);线性方程:Y=138.63X-69.82,r=0.999 7,线性范围0.15～0.75μg/mL。结论:该方法准确、快捷、灵敏、重现性好,可作为当归养血丸质量评价的依据。

高山植物条纹狭蕊龙胆的分子亲缘地理学研究

草本植物由于较短的生活周期以及对环境变化的敏感性,可能会更好地揭示第四纪冰期以来植物居群变化的历史过程。分子亲缘地理学研究是揭示动植物居群历史的有力工具,但到目前为止对青藏高原草本植物的分子亲缘地理学研究几乎是空白。因此,本文选择在青藏高原及邻近地区生长的一年生高山草本植物条纹狭蕊龙胆为研究对象,进行了13个居群155个个体的叶绿体基因组(cpDNA)非编码片段trnH(GUG)-psbA基因间区序列变异检测,共发现7种单倍型,其中单倍型Hap A是分布最广的,而单倍型Hap E、Hap F和Hap G是拥有的居群所特有的。青藏高原东北部、东部及邻近地区的每个居群拥有的单倍型非常单一,而高原东南部横断山区的单倍型分布很集中,遗传多样性也相对较高。分子变异分析(AMOVA)结果表明整个分布区条纹狭蕊龙胆的遗传变异主要存在于居群间(73.05%),且居群间的遗传分化很高(GST=0.805,FST=0.731,NST=0.859),有着显著的亲缘地理学结构(NST>GST,P<0.05)和较低的居群间的平均基因流(Nm=0.184)。结合巢式支系法分析(NCA),根据本文的研究结果推测青藏高原东南部横断山区是该植物第四纪冰期时可能的避难所,而且在间冰期或冰期后,伴随着异域片段化和过去片段化从避难所发生范围扩张而形成当前单倍型及居群的分布格局。

窄叶鲜卑花(Sibiraea angustata)nrDNA ITS和cpDNA trnL-F序列分子进化特点的分析

应用PCR产物直接测序法分析了窄叶鲜卑花居群间nrDNA(核糖体DNA)ITS序列和cpDNA(叶绿体DNA)trnL-F的碱基差异,并与cpDNAtrnS-G序列和rpl20-rps12序列进行比较,从而初步研究两套植物基因组的变异速率。采用改良的CTAB法从硅胶干燥的窄叶鲜卑花叶片中提取总DNA,并对nrDNA ITS和cpDNAtrnL-F区域进行扩增、纯化、测序。nrDNA ITS序列共有601 bp,有变异位点3处,变异位点百分率为0.05%,(G+C)含量为41.4%。cpDNAtrnL-F序列共有927 bp,有变异位点1处,变异位点百分率0.01%,(G+C)含量为32.6%,两种序列的核苷酸多样性非常低。比较发现,窄叶鲜卑花nrDNA ITS区域较cpDNAtrnS-G序列和rpl20-rps12序列保守,变异速率较慢,比cpDNAtrnL-F序列变异速率稍快。通过对ITS序列单倍型(haplotype)进行分析发现,窄叶鲜卑花现有分布范围经历了居群近期范围扩张,与叶绿体基因组(trnS-G和rpl20-rps12序列)得出的结论一致。因此,窄叶鲜卑花nrDNA ITS序列适合该种的谱系地理学研究。

横断山区高山绣线菊的谱系地理学研究

横断山区作为青藏高原东南部主要的一个冰期避难所,第四纪冰期气候的变化对该地区的植物地理分布和居群遗传结构都产生了重要的影响。为了揭示该地区物种分布的分子系统地理学结构,选取在该地区广泛分布的一种高山灌木-高山绣线菊的叶绿体trnL-trnF序列进行研究。采集了15个居群182个个体进行测序,共发现7个单倍型。总的遗传多样性较高(HT=0.809),但居群内遗传多样性较低(HS=0.236)。分子变异分析(AMOVA)结果表明分布区内高山绣线菊的遗传变异主要存在于居群间(84.48%),且居群间的遗传分化很高(GST=0.708,FST=0.84476,NST=0.863),有着显著的谱系地理学结构(NST>GST,P<0.01)和较低的居群间平均基因流(Nm=0.09)。单倍型的系统进化树和进化分支网络分析得到了相似的拓扑结构,7种单倍型都按照地理分布聚为三支:横断山区西部、横断山区东部以及两者的交接地带。本研究推测该物种在横断山区存在多个冰期避难所,而没有表现出大规模的种群集体扩张和迁移的现象。青藏高原隆升、第四纪气候的反复波动以及横断山区特殊的地理环境使得原来连续的居群片段化,并发生范围扩张,从而塑造了高山绣线菊的现代生物地理分布格局。

藏药莪达夏醇提物对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

本实验探讨藏药莪达夏对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的抗氧化保护作用。采用结扎大鼠冠脉左前降支方法造成心肌缺血再灌注模型,测定再灌注40 min后血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷肤甘肤过氧化物酶(GSH-Px)活性以及MDA含量。实验结果显示莪达夏可以显著降低心肌缺血再灌注后血清CK、LDH和MDA含量,升高血清SOD和GSH-Px活力(P<0.01,P<0.05)。表明藏药莪达夏对缺血-再灌注心肌损伤有抗氧化保护作用。

中国虎耳草属(虎耳草科)二新种——班玛虎耳草和丁青虎耳草(英文)

记载了中国虎耳草属Saxifraga二新种,即班玛虎耳草S.banmaensisJ.T.Pan和丁青虎耳草S.dingqingensisJ.T.Pan。其中,班玛虎耳草仅见于青海班玛,与小伞虎耳草S.umbellulataHook.f.&Thoms.近缘,但其萼片先端具软骨质短尖头,花瓣线形,非提琴状长圆形至提琴形,基部无爪,可资区别。丁青虎耳草见于西藏丁青,与近加拉虎耳草S.llonakhensisW.W.Smith相似,但其萼片3脉,于先端汇合成1疣点,花瓣具8痂体和4?5脉,基部截形或近耳形,可以区别。此两种均系中国特有种,隶属于莲座状亚组subsect.RosularesGornall。

青海五裂茶藨子叶绿体DNA psbA-trnH序列的遗传变异研究

采集青海不同地理居群五裂茶藨子植物样品,采用改良CTAB法提取五裂茶藨子总DNA。运用分子生物学技术分析青海不同地理居群五裂茶藨子的遗传多样性。结果表明：青海不同地理居群五裂茶藨子psbA-trnH序列可分为11种单倍型,存在38个变异位点,具有较高的遗传多样性（h=0.684 1）,单倍型多态性水平（h）为0.464 3-0.892 9,核苷酸多态性水平（p）为0.005 90-0.023 33。居群遗传分化系数Gst为0.042,基因流值Nm为0.014 98。

藏药莪达夏对大鼠心肌缺血-再灌注损伤Bc1-2和Bax表达的影响

目的探讨藏药莪达夏对大鼠心肌缺血-再灌注损伤保护作用可能的分子机制。方法以结扎大鼠冠脉左前降支方法造成心肌缺血再灌注模型,再灌注40 min后采用酶联免疫方法检测大鼠心肌凋亡蛋白Bc1-2和Bax含量,并行组织形态学观察。结果心肌组织中Bc1-2的含量缺血再-灌注模型组明显低于正常对照组,莪达夏高、中、低剂量组均高于模型组;心肌组织中Bax的含量缺血再-灌注模型组明显高于正常对照组,莪达夏高、中、低剂量组均低于模型组。结论对大鼠心肌缺血-再灌注损伤保护作用可能的分子机制是莪达夏能够通过促进Bc1-2蛋白的表达、抑制Bax蛋白的表达从而抑制细胞凋亡的发生,发挥抗缺血缺氧性损伤的保护作用。

西川红景天nrDNA ITS序列初步研究

[目的]对西川红景天nrDNA ITS序列进行分析,并与cpDNA(叶绿体DNA)trnS-trnG序列和rpl20-rps12序列进行比较,从而初步比较2套植物基因组的进化速率。[方法]采用改良CTAB法从硅胶干燥的西川红景天叶片中提取总DNA,并对nrDNA ITS区进行扩增、纯化、测序,然后与cpDNAtrnS-trnG和rpl20-rps12序列进行比较。[结果]序列比对后得到长度为701 bp的ITS序列,其中变异位点13处,占总序列的1.85%。在13处变异位点中,8处为碱基置换,5处为插入/缺失。(A+T)含量为46.9%,(G+C)含量为53.1%。核苷酸多样性为0.004 27。[结论]西川红景天nrDNA ITS区域较cpDNAtrnS-trnG序列和rpl20-rps12序列保守,进化速率较慢。