长病程高血压患者早期肾损害多指标检测的意义

目的探讨联合应用尿微量白蛋白(mALB)、血清胱抑素C(CysC)、尿视黄醇结合蛋白(RBP)及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)对长病程原发性高血压患者早期肾损害的检出效果。方法分别对131例长病程原发性高血压患者及年龄相当的150例健康人群(对照组)测定血清CysC、尿mALB、尿RBP含量及尿NAG活性,计算单独及联合应用后的检出阳性率。结果原发性高血压患者血清CysC、尿mALB、尿RBP含量及尿NAG均比对照组有显著升高(P<0.01),对肾损害的检出率分别为26.0%、26.0%、20.6%及29.8%,多指标联用后的检出率分别为(mALB+NAG)35.1%、(CysC+NAG)37.4%、(mALB+NAG+RBP)41.2%、(NAG+RBP+CysC)40.5%,多指标联用较单指标检出阳性率有显著提高(P<0.05)。相关分析显示,尿mALB与血压呈显著正相关(r=0.431,P<0.05),血清CysC、尿mALB、RBP及NAG均与病程时间长短呈显著正相关(r分别为0.673、0.451、0.575、0.403,P均<0.05)。结论长病程原发性高血压患者应定期监测其肾功能损害程度,适当选择多指标联合检测可有效提高检出率。

肥胖合并2型糖尿病血清游离脂肪酸、超敏C反应蛋白的变化及临床意义

目的研究超体质量/肥胖合并2型糖尿病患者血清游离脂肪酸(FFA)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)的变化并探讨FFA、hs-CRP与体质量,糖、脂代谢及胰岛素敏感性等的相关性。方法 180例受检者根据体质量指数(BMI)及糖调节状况分成4组,分别是糖调节与体质量均正常组(Ⅰ组,男/女:20/22)、正常体质量的2型糖尿病组(Ⅱ组,男/女:14/18)、超体质量/肥胖但糖调节正常组(Ⅲ组,男/女:28/24)、超体质量/肥胖的2型糖尿病组(Ⅳ组,男/女:26/28),分别检测各组空腹血糖、血脂、尿酸、FFA、hs-CRP和胰岛素水平,采用HOMA-IR评价各组胰岛素敏感性。结果Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组FFA水平均显著高于Ⅰ组(P<0.05),但Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组间FFA水平无显著性差异;hs-CRP水平比较显示,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均显著高于Ⅰ组(P<0.05),Ⅳ组水平均显著高于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),但Ⅱ、Ⅲ组间无显著性差异。多元逐步回归分析显示,HOMA-IR(r=0.438,P<0.01)及BMI(r=0.249,P<0.01)是hs-CRP的独立相关因素,HOMA-IR(r=0.354,P<0.01)、BMI(r=0.312,P<0.01)、TG(r=0.214,P<0.05)是FFA的独立相关因素。结论血清hs-CRP及FFA水平监测对于评估超体质量/肥胖及胰岛素抵抗具有明确的诊断价值。

siRNA沉默G6PD对人结肠癌细胞HIF-1α表达的影响

目的:研究siRNA干扰葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因表达的LoVo细胞在低氧环境中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)水平的变化及其对低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法:构建靶向G6PD基因的siRNA干扰质粒载体,并转染人结肠癌细胞株(LoVo),用限制性内切酶法结合DNA测序鉴定特异重组子,RT-PCR检测G6PD mRNA表达,结合G6PD活性测定判断其干扰效率;以未转染LoVo细胞为对照,进一步观察G6PD沉默的瘤细胞在低氧环境下NADPH水平的变化,RT-PCR检测HIF-1αmRNA表达水平,West-ern blotting检测HIF-1α蛋白水平。结果:成功构建靶向G6PD的siRNA重组质粒载体并稳定转染LoVo细胞。与未转染组细胞相比,RNA干扰G6PD使mRNA表达下降43%,酶活性下降63.5%,细胞内NADPH水平显著下降(41%vs 100%,P<0.05),但HIF-1αmRNA表达水平无明显变化,而HIF-1α蛋白显著降低。结论:低氧环境下,G6PD基因可能通过下调NADPH水平从而降低HIF-1α的稳定性,导致其水平下降,进而影响肿瘤细胞的低氧反应。

上海地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷基因突变与临床表现分析

目的 了解上海地区葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)缺陷的基因突变 ,探讨基因突变与临床表现型的可能关系。方法 应用PCR/限制性内切酶酶解分析法对 42例上海地区G6PD缺乏者进行基因型分析。结果 上海地区G6PD缺陷的基因突变主要是 :cDNA 1376G→T(33.3% ) ,cDNA 1388G→A(31.0 % ) ,cDNA 95A→G(2 1.4% ) ,cDNA 10 2 4C→T(2 .4% ) ,cDNA 493A→G(2 .4% )。结论 上海地区G6PD缺陷的基因突变以我国常见的 3种基因型为主 (85 .7% ) ,临床表现为蚕豆病。

siRNA沉默转酮醇酶样基因1下调人宫颈癌细胞HIF-1α表达及糖酵解关键酶活性

目的:通过siRNA技术沉默宫颈癌细胞转酮醇酶样基因-1(TKTL1)后观察其在缺氧条件下低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达水平及糖酵解途径中2个关键酶己糖激酶Ⅱ(HK-Ⅱ)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化情况,旨在探讨肿瘤细胞TKTL1表达与糖酵解途径的关系。方法:用构建的靶向TKTL1基因siRNA干扰质粒载体转染HeLa细胞株,RT-PCR检测TKTL1 mRNA表达并结合转酮醇酶(TKT)活性测定判断其干扰效率;以未转染HeLa细胞为对照,进一步观察TKTL1沉默的癌细胞在缺氧条件下HIF-1α和HK-Ⅱ表达水平,以及HK-Ⅱ和LDH活性的变化。结果:siRNA沉默HeLa细胞TKTL1基因后TKTL1 mRNA表达下降,TKT活性显著降低(P<0.01),HIF-1α和HK-Ⅱ表达水平及HK-Ⅱ和LDH活性较对照组细胞均显著降低(P<0.01)。结论:沉默肿瘤细胞TKTL1基因能下调HIF-1α表达并降低糖酵解代谢关键酶活性,从而影响肿瘤细胞的恶性表型。

血栓前体蛋白测定在急性脑梗死早期诊断中的意义

目的 探讨血栓前体蛋白 (Tp P)测定在急性脑梗死早期诊断的临床价值。方法 对不同发病时间的急性脑梗死患者共 67例分别于入院后立即及行常规治疗后测定血浆血栓前体蛋白 (Tp P)、D-二聚体 (D- Dimer)含量 ,并与正常组比较。结果 急性脑梗死患者血浆 Tp P、D-二聚体水平显著高于正常对照组 (P<0 .0 1 ) ,Tp P水平在发病后 6 h内至治疗前显著升高 ,D-二聚体在发病后 1 2 h有显著升高。结论 Tp P不仅是急性脑梗死极早期诊断的可靠指标 ,它还可用于监测疾病的发展过程 ,评价治疗效果。

超体质量/肥胖及糖尿病患者血清载脂蛋白B与载脂蛋白A1比值的变化及临床意义

目的研究超体质量、肥胖及2型糖尿病患者血清载脂蛋白B(Apo B)与载脂蛋白A1(Apo A1)比值的变化并探讨其在超体质量、肥胖及2型糖尿病患者风险评估中的作用。方法 242例受检者(其中66例高血压,55例代谢综合征)根据体质量指数(BMI)及糖调节状况分成4组,分别是糖调节与体质量均正常组(Ⅰ组,27/24)、正常体质量的2型糖尿病组(Ⅱ组,32/23)、超体质量/肥胖但糖调节正常组(Ⅲ组,41/31)、超体质量/肥胖的2型糖尿病组(Ⅳ组,35/29),分别检测各组空腹血糖(FPG)、血脂、高敏C反应蛋白(hsCRP)和胰岛素水平,采用胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价各组胰岛素敏感性。结果Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组ApoB/Apo A1比值显著高于Ⅰ组(P<0.05),Ⅳ组水平显著高于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),但Ⅱ、Ⅲ组间ApoB/Apo A1比值差异无统计学意义。多元逐步回归分析发现年龄(r=0.197,P<0.05)、BMI(r=0.172,P<0.05)、三酰甘油(TG)(r=0.617,P<0.01)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(r=-0.609,P<0.01)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(r=0.597,P<0.01)、HOMA-IR(r=0.485,P<0.01)是Apo B/Apo A1的独立相关因素。高ApoB/Apo A1组(上四分位组)与低ApoB/Apo A1组比较,年龄、BMI、FPG、TG、总胆固醇(TC)、LDL-C、hsCRP、HOMA-IR、高血压及代谢综合征例患病率均显著升高,而HDL-C水平则显著下降。多因素Logistic回归分析显示,Apo B/Apo A1是高血压和代谢综合征的独立危险因子(P<0.01)。结论 Apo B/Apo A1比值适用于糖尿病、超体质量或肥胖人群的风险评估。

氧化应激条件下G6PD对Raji细胞内GSH水平的影响

目的:观察体外培养的Burkit淋巴瘤(Raji)细胞在氧化应激条件下细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)对还原型谷胱甘肽(GSH)水平的影响。方法:体外培养Raji细胞,分别在G6PD活性被抑制及不抑制的情况下,检测细胞在酚嗪甲酸硫酯(PMS)作用后60min及360min时G6PD、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性及GSH水平。结果:在PMS作用下,Raji细胞内GSH水平在60min时显著下降(P<0.01)而360min时可上升至对照组水平,G6PD及GPx活性持续显著升高(P<0.01)而GR活性在360min时有显著升高(P<0.01);使用脱氢表雄酮(DHEA)抑制G6PD活性后,Raji细胞再在PMS作用下,细胞内各指标与PMS处理组比较,GSH水平显著降低(P<0.01),GPx活性在60min时显著增高(P<0.05)而GR活性在360min时显著降低(P<0.01)。结论:细胞在氧化应激条件下G6PD可能是Raji细胞内影响GSH水平的一个关键因子,对维持胞内GSH水平起重要的调节作用。

吩嗪甲酸硫酯对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的人红细胞某些生化指标的影响

为探讨葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)缺乏的人红细胞在自由基作用下的变化情况 ,通过测定自由基作用前后G6PD缺乏人红细胞变形能力、高铁血红蛋白生成、过氧化氢酶活力、还原型谷胱甘肽 (GSH)、还原型三磷酸吡啶核苷 (NADPH)的浓度 ,并与正常红细胞比较。结果显示G6PD缺乏红细胞在氧自由基作用下变形能力、过氧化氢酶活力、GSH及NADPH水平与正常红细胞相比显著下降 (P <0 0 1) ,而高铁血红蛋白生成显著增加 (P <0 0 1) ,从而得出G6PD缺乏红细胞氧化易感性增强导致细胞损伤。

去氢表雄酮及G6PD基因反义寡核苷酸对Raji细胞的某些影响

目的:观察去氢表雄酮(DHEA)及G6PD基因的全硫代修饰反义寡核苷酸对体外培养Raji细胞的抑制作用。方法:分别用不同浓度DHEA及G6PD反义寡核苷酸作用于体外培养Raji细胞,观察细胞存活、生长情况,同时采用逆转录-聚合酶链反应检测Raji细胞G6PD基因mRNA表达水平,测定G6PD活性。结果:DHEA及G6PD反义寡核苷酸不影响Raji细胞存活,50μmol/L、500μmol/L浓度的DHEA作用72 h小时及10.0μmol/L反义寡核苷酸作用48 h后均明显抑制Raji细胞生长(P<0.01);当DHEA≥5.0μmol/L时,作用Raji细胞72 h,则G6PD活性明显低于未用DHEA作用的对照组(P<0.01),但不影响G6PD基因mRNA表达;10.0μmol/L反义寡核苷酸作用Raji细胞48 h后,G6PD基因mRNA表达水平低于未用反义寡核苷酸作用的对照组,G6PD活性亦明显低于对照组(P<0.01)。结论:一定浓度的DHEA及G6PD反义寡核苷酸均能抑制Raji细胞G6PD活性并不同程度影响细胞生长,但其抑制机制不同。

脱氢表雄酮对体外培养Burkit淋巴瘤细胞抗氧化能力影响的研究

目的:观察脱氢表雄酮(DHEA)对体外培养的Burk it淋巴瘤(Raji)细胞抗氧化能力的影响。方法:用一定浓度的DHEA作用于体外培养的Raji细胞,同时观察Raji在加用吩嗪硫酸甲酯(PMS)作用前后细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)、谷光甘肽过氧化物酶(GPX)、谷光甘肽还原酶(GR)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)浓度的变化,并与未加DHEA作用的Raji细胞作对照。结果:DHEA浓度≥5.0μmol/L时能明显抑制Raji细胞G-6-PD活性,而对GPX、GR及GSH无明显影响;在氧化压力下(PMS作用)经DHEA处理后Raji细胞G-6-PD、GPX、GR活性无明显升高,细胞内GSH浓度显著降低(P<0.01),并明显低于未经DHEA处理的Raji细胞(P<0.05)。结论:一定浓度的DHEA能抑制Raji细胞G-6-PD活性,并降低其氧化应激能力。

靶向转酮醇酶样基因1 siRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建针对转酮醇酶样基因1(TKTL1)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并检测其沉默效应。方法采用人U6 SnRNA启动子,分别把被9 bp序列间隔的19 bp长短的TKTL1靶序列的反向重复序列,置于pEGFP-C1-U6质粒载体中,构建成TKTL1短发夹环RNA,产生重组质粒pEGFP-C1-U6/TKTL1,分别用PstⅠ和SalⅠ酶切鉴定及测序分析,并将重组质粒转染人结肠癌细胞株LoVo,通过RT-PCR检测TKTL1基因表达水平的变化。结果酶切鉴定与DNA测序分析证明,TKTL1基因的siRNA表达载体构建正确,RT-PCR结果表明转染重组质粒的LoVo细胞TKTL1基因的表达水平明显降低。结论成功构建了针对TKTL1基因的siRNA表达载体,转染LoVo细胞后可显著抑制TKTL1基因表达。

实验条件对荧光共振能量转移的探针熔解曲线影响

目的 探讨基于荧光共振能量转移的杂交探针熔解曲线的实验影响因素 ,优化此法检测基因的实验条件。方法 利用荧光共振能量转移的原理 ,设计检测人葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)基因的荧光杂交探针 ,在熔解曲线模式下 ,设定不同模板量、Mg2 + 浓度 ,观察熔解曲线峰面积及其Tm值。结果 在设定的反应体系中 ,随着模板量从 1 0ng渐次上升至 1 0 0ng ,熔解曲线峰面积亦逐渐增大 ;随着Mg2 + 终浓度的增加 ,峰面积也增加 ,而且熔解曲线的Tm值也呈升高趋势。结论 探针熔解曲线法准确、迅速、操作简单 ,在应用中应考虑到模板量及Mg2 +

共转染小干扰RNA质粒联合抑制HeLa细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和转酮醇酶样基因-1表达

目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)及转酮醇酶样基因-1(transketolase like-1,TKTL-1)是肿瘤细胞磷酸戊糖代谢途径(pentose phosphate pathway,PPP)的2个重要关键调节酶。拟通过共转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体同时沉默人宫颈癌Hela G6PD及TKTL-1后,观察其对G6PD和TKTL1的联合抑制作用,旨在探讨共转染siRNA表达载体联合抑制PPP的效果及可行性。方法分别构建靶向G6PD和TKTL1基因siRNA干扰质粒载体,通过酶切和测序鉴定siRNA干扰质粒载体构建成功后,单独或共转染HeLa细胞株,RT-PCR检测G6PD、TKTL1 mRNA表达并结合G6PD、转酮醇酶(transketolase,TKT)活性测定判断并比较共转染联合抑制Hela细胞G6PD、TKTL1表达的效果。结果共转染靶向G6PD和TKTL1基因的siRNA干扰载体能显著下调G6PD和TKTL1基因表达水平[(0.96±0.05)vs(0.47±0.04),(0.98±0.05)vs(0.41±0.04),P<0.01]。同时,2个酶的活性也显著下降(99.2%vs34.5%和99.8%vs 40.1%,P<0.01)。共转染抑制G6PD基因mRNA表达较单独转染靶向G6PD基因的siRNA干扰载体的效果有显著下降[(0.47±0.04)vs(0.31±0.04),P<0.01)]。结论共转染siRNA干扰载体对人宫颈癌HeLa细胞PPP代谢通路进行联合抑制是一种有效的实验方案。

siRNA沉默转酮醇酶样蛋白1基因对人肝癌HepG2细胞生长微环境的影响

目的:通过siRNA技术沉默肝癌细胞系HepG2转酮醇酶样蛋白1(TKTL1)基因后观察其对生长微环境中乳酸生成水平、还原型谷胱甘肽(GSH)水平及NADPH/NADP+比值的影响,旨在探讨肿瘤细胞TKTL1表达与其转移特性的内在联系。方法:用构建的靶向TKTL1基因siRNA干扰质粒载体转染HepG2细胞株,RT-PCR检测TKTL1 mRNA表达并结合转酮醇酶(TKT)活性测定判断其干扰效率;以未转染HepG2细胞为对照,进一步观察TKTL1沉默的癌细胞内乳酸生成水平、GSH含量、NADPH/NADP+比值及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)活性的变化。结果:siRNA沉默HepG2细胞TKTL1基因后TKTL1 mRNA表达下降、TKT活性显著降低(P<0.01),乳酸生成、GSH水平及NADPH/NADP+比值较对照组细胞均显著降低(P<0.01),但G-6-PD活性无明显变化(P>0.05)。结论:肿瘤可能通过TKTL1高表达调整葡萄糖代谢从而改变乳酸及氧化自由基生成,使细胞生长微环境利于肿瘤转移。

上海地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变分析

目的 :了解上海地区葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)缺乏的基因突变型及其主要临床表现。 方法 :观察 45例上海地区G6PD缺乏患者的主要临床表现 ,测定红细胞G6PD活性并用PCR 限制性内切酶酶解分析法进行G6PD基因突变分析。 结果 :共发现了五种基因突变型 ,分别是cDNA1376G→T(31.2 % )、cDNA1388G→A(2 8.9% )、cD NA95A→G (2 0 .0 % )、cDNA10 2 4C→T(4 .4% )和cDNA493A→G(6 .6 % )。 结论 :上海地区常见的三种G6PD基因型 (cDNA1376G→T ,cDNA1388G→A和cDNA95A→G)占 80 .1% ,酶活性均低于正常人的 10 % ,临床表现以蚕豆病。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏对中性粒细胞的影响

目的:探讨我国常见葡萄糖 6 磷酸脱氢酶(G 6 PD)缺乏对外周血中性粒细胞内酶活性及产生活性氧能力 的影响。 方法:检测正常人及G 6 PD缺乏患者外周血中性粒细胞G 6 PD活性、mRNA表达水平及其在静止与 应激状态下产生活性氧的能力(NBT试验)。 结果:G 6 PD缺乏患者外周血中性粒细胞内G 6 PD酶活性较正常 人显著下降,mRNA表达水平上升,产生活性氧的能力(NBT还原试验)在静止状态下较正常白细胞高,但无统计学 意义,在脂多糖(LPS)剌激下低于正常白细胞。 结论:我国常见的G 6 PD缺乏能使中性粒细胞G 6 PD活性、应 激状态下产生活性氧的能力下降。

一步抽提酶法快速测定红细胞内还原型三磷酸吡啶核苷

目的：还原型三磷酸吡啶核苷（NADPH）是体内重要的还原当量,测定NADPH可以评估机体的氧化-还原状态,文中旨在建立一种快速测定外周血红细胞内NADPH的方法。方法：制备红细胞溶血液,谷胱甘肽还原酶（GR）能选择性将NADPH转化成其氧化形式（NADP^＋）,而NADPH在340 nm有特异吸收峰,利用GR处理前后吸光度的变化从NADPH标准曲线上即可对还原型NADPH进行定量,在此基础上对建立的方法进行初步评价。结果：该法检测NADPH的灵敏度为0.003mmol/L,批内变异（CV）为6.93%,回收率为97.0%-104.3%,用该法制备的溶血液中NADPH可稳定180m in;随机选择25例体检健康人员用本法与传统方法测定外周血红细胞NADPH水平,结果相关性好（r=0.937 7,P〈0.01）,2种方法测定结果无显著性差异（t=0.390 3,P〉0.05）,平均偏差为0.932%,平均NADPH水平为（0.153 6±0.030 6）μmol/gHb。结论：该法简单、方便、快速,可批量用于活细胞内NADPH水平测定。

POCT的信息管理

POCT是在医疗条件下，由非实验室的卫生保健人员，在实验室的质控指导下，于病人身边进行的检验。它广泛适用于医院（如外科，儿科）、监护病房、急救单位、保险公司、社区医疗、家庭保健网络等领域。当今，POCT在全球方兴未艾，据调查，现今已有10％的诊断实验是在POCT仪器上完成的，究其原因，