小鼠miR-125a超表达载体的构建

为了探明miR-125a在精子发生中的功能,以小鼠基因组DNA为模板扩增miR-125a的前体片段(pre-miR-125a),经过双酶切后连接入质粒pcDNA3.1(+),构建miR-125a超表达载体(pcDNA3.1(+)-miR-125a);将pcDNA3.1(+)-miR-125a转染至GC-1spg细胞系,通过qRT-PCR和Western Blot验证其超表达效果。结果表明:PCR扩增得到约290bp的miR-125a前体片段,成功构建了pcDNA3.1(+)-miR-125a过表达载体,在GC-1spg生殖细胞系中约有3.5倍的超表达效果,为深入研究miRNAs在精子发生过程的功能及其机制奠定基础。