三叉神经痛的分类及临床诊疗

三叉神经痛是一种发生于头面部三叉神经分布区域内,症状表现为骤发、骤停、闪电样、刀割样、烧灼样、顽固性、难以忍受的剧烈疼痛的疾病。其发病机制尚不明确,可能与神经病变、免疫炎症机制及离子通道相关。目前,治疗三叉神经痛仍以药物治疗为主,药物治疗无效时可考虑电生理治疗或手术治疗,包括射频热凝术、微血管减压术以及球囊压迫术等。文章综述了三叉神经痛的分类及临床诊疗的研究进展,以期为其临床尽早确诊及治疗提供新的理论基础。

YAP蛋白在神经肌肉接头中作用机制的研究

目的探讨YAP蛋白对神经肌肉接头的影响及其机制。方法以质粒为模板构建YAP敲低的shRNA,用Western Blot方法检测shYAP的敲低效率,并在此基础上将shYAP包进AAV8并感染C2C12肌管,通过免疫荧光染色检测乙酰胆碱受体的长度和荧光强度。将agrin加入至分化成熟的C2C12肌管中,通过免疫荧光染色检测加入agrin后细胞核中YAP的表达情况和乙酰胆碱受体聚集情况。采用Western Blot方法检验样本在agrin处理后YAP磷酸化的合成水平和YAP结合β-环联蛋白的生成体量。结果YAP shRNA构建成功;肌管形成后敲低YAP能抑制乙酰胆碱受体聚集;agrin能促进C2C12肌管中的YAP进入细胞核;agrin能减弱YAP蛋白S127位的磷酸化。结论YAP作为agrin下游信号分子调节神经肌肉接头形成。

H4及A172神经胶质瘤细胞系高亲和腺相关病毒载体的研究

目的对腺相关病毒衣壳进行合理设计改造,从而提高腺相关病毒转导脑肿瘤细胞的效率。方法通过在AAV5的衣壳蛋白Cap的氨基酸N573后插入一段寡肽GIVADNLNL以替换Q574到T578之间的蛋白序列QSSTT,同时引入两个点突变S2A和T711S得到AAVX01。研究该改造对腺相关病毒产量是否会造成影响;用包装有荧光蛋白报告基因的AAV病毒感染H4及A172细胞系,观察和比较AAVX01与野生AAV5及AAV8的转导效率。结果通过改造得到新型血清型AAVX01,且AAVX01产量和实心率不低于野生型AAV5,8,AAVX01相比于野生型AAV5,8对于神经胶质瘤细胞有更好的转导效率。结论本研究构建了有效的对神经胶质瘤细胞有高亲和性和转导性的AAV载体,对未来胶质瘤的基因治疗研究提供了一个可行的载体平台。

癫痫与糖尿病的相关性研究

随着糖尿病和癫痫的发病率逐年升高,二者的共病现象亦随之增加,且已有研究证实糖尿病与癫痫存在一定的相关性,但对于二者共病的认识仍不充分。文章就糖尿病共病癫痫的流行病学、发病机制以及治疗管理等方面的最新研究进展进行综述,以期为糖尿病共病癫痫的临床诊断及治疗提供理论依据和研究思路。

工业化合物新型污染物排放特征及其对环境的影响与治理

近些年,伴随人民经济水平持续提升以及城乡化进程不断推进,人们生活中涌现了许多新污染物,这既影响生态环境质量,还极大威胁人们的身体健康。基于此,本文首先介绍了新污染物排污特点和造成的生态问题,对此依据国家法律法规提出一些有效的新污染物防治措施。

气候变化对新型污染物扩散传输的影响及环境政策建议

本文主要探索气候变化通过温度、降水和极端天气事件影响新型污染物的扩散传输,其后果包括生态系统破坏、人类健康风险和经济影响。应对这些挑战需要采取多方面的方法,包括减少工业排放措施、将气候变化纳入污染控制、促进可持续实践及国际合作。通过实施这些环境应对措施,可以减轻气候变化对污染物传播的影响,保护生态系统,保护人类健康。

大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测

目的:建立成年大鼠海马脑区注射脑源性神经营养因子(BDNF)慢病毒表达载体的方法,并检测BDNF慢病毒载体体内表达目的基因的能力。方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS)、GFP慢病毒注射组(GFP)和BDNF慢病毒注射组(BDNF),每组15只。所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马组织。NS、GFP和BDNF组分别给予盐水(2μL)、GFP慢病毒(2μL)和BDNF慢病毒(2μL),SH组只实行手术操作。注射手术7d、14d和30d后,分别处死大鼠并进行在冰上取各组大鼠海马组织,分别提取海马总RNA和总蛋白质通过RT-PCR和Western blot检测各组大鼠海马组织BDNF mRNA和蛋白表达水平的变化。同时通过原位杂交方法检测BDNF的表达水平和脑区分布。结果:BDNF慢病毒注射成年大鼠7d、14d和30d后,均可以成功检测到BDNF在mRNA和蛋白水平在海马脑区都有明显的表达,同假手术组相比具有显著性差异;原位杂交检测显示BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区7d、14d和30d的BDNF表达水平和脑区分布均保持稳定。结论:成功地建立了BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区的方法,并可在注射后不同时间段检测到BDNF高水平的表达和均匀的海马脑区分布,为进一步将其应用于神经系统损伤性疾病的治疗奠定了基础。

表达大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)腺相关病毒的构建及体外表达分析

目的构建携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因的重组腺相关病毒(AAV)载体,并检测体外表达目的基因的能力。方法应用基因克隆技术将大鼠BDNF的cDNA基因序列克隆入腺病毒质粒pAAV-MCS,PCR酶切测序鉴定序列。与AAV病毒包装质粒pAAV-RC、pHelper用磷酸钙法共转染HEK293细胞,包装得到含转基因过表达BDNF的病毒载体(rAAV-BDNF)。重组病毒感染体外培养的Hela细胞后,用RT-PCR和Western Blot方法检测细胞BDNF基因及蛋白表达情况,用ELISA法测定培养液中表达产物浓度。结果证实BDNFcDNA片段插入到病毒基因组内,并整合到宿主基因组后稳定表达,病毒滴度可以达到1.29×108PFU/mL。重组病毒感染Hela细胞后能高水平表达BDNF,ELISA结果表明,Hela细胞从病毒感染后第2天到第10天表达BDNF水平呈上升趋势,第10天达到2253pg/mL。结论成功地构建了表达BDNF基因的腺相关病毒载体,并可在体外高水平表达其所携带的目的基因,为将其进一步应用于神经系统损伤性疾病治疗的研究奠定了方法学基础。

大鼠脑缺血后IFN-γ mRNA的表达

目的:检测SD大鼠脑缺血后缺血脑组织和外周免疫淋巴细胞干扰素-γ(IFN-γ)mRNA的表达,探讨IFN-γ在脑缺血中的作用。方法:用线拴封闭大脑中动脉的方法制作脑缺血动物模型,采用原位杂交的方法检测缺血脑组织及外周淋巴组织中IFN-γmRNA动态的变化情况。采用免疫组织化学方法检测缺血脑组织中浸润的T淋巴细胞数量。结合免疫组化和寡核苷酸探针杂交方法,检测T细胞表达IFNγ-。结果:①缺血脑半球IFN-γmRNA含量较假手术组明显增高(P<0.001),且随着脑缺血时间延长其表达量增加;②IFN-γmRNA表达数量随损伤面积扩大而增加(R=0.978 0,P<0.001);③缺血组外周血单核细胞IFN-γmRNA水平较假手术组明显增高,12小时达高峰(P<0.001),而脾淋巴细胞、淋巴结细胞IFN-γmRNA水平也均比假手术组明显增高,且随着脑缺血时间延长表达量增加(P<0.05、P<0.01、P<0.001);④随着脑缺血时间的延长,脑内浸润的T细胞数量显著增加(P<0.05、P<0.01、P<0.001)。结论:IFN-γmRNA表达主要参与大脑损伤后期反应过程,可能加重脑缺血后期的炎症反应。

体外原代培养脑胶质瘤细胞对化疗药物敏感性的影响

目的建立离体胶质瘤组织原代培养细胞,测试其对常用抗癌化疗药物的敏感性。方法手术切除54例人脑恶性胶质瘤,取3级星形细胞瘤在培养皿中进行原代培养,采用八肽胆囊收缩素(CCK-8)法检测恶性脑胶质瘤细胞对顺铂(DDP)、长春新碱(VCR)、替尼泊甙(VM-26)、替莫唑胺(TMZ)、尼莫司汀(ACNU)的体外敏感性。结果对原代培养肿瘤细胞进行药物敏感性试验,敏感率依次为VM-26>TMZ>ACNU>DDP>VCR(P<0.05)。结论用CCK-8法进行化疗药物的敏感性测定可以更好地辅助临床化疗和放疗,避免盲目使用药物。

腺相关病毒介导的脑源性神经营养因子基因对大鼠海马神经元树突生长的影响

目的研究重组腺相关病毒介导的脑源性神经营养因子基因（rAAV-BDNF）的表达对体外培养的大鼠海马神经元树突生长的影响。方法取孕18d大鼠建立体外培养的海马神经元模型,感染rAAV-BDNF病毒。在检测了BDNF稳定的表达水平后,用MAP2染色法来标示神经元树突形态。用荧光显微镜采样,统计胞体约15～20μm的MAP2阳性细胞初级树突的数目和长度。对照组神经元为感染表达绿色荧光蛋白的腺相关病毒。结果感染rAAV-BDNF的海马神经元初级树突数目为（14±3）个,对照组的初级树突数目为（6±1）个。rAAV-BDNF感染的海马神经元树突总长度为（1500±150）μm,对照组的树突总长度为（700±50）μm,两组无论是树突数目还是长度,差异均有统计学意义（t=3.088和6.238,均P〈0.05）。结论rAAV-BDNF转染大鼠体外培养的海马神经元后,能起到促进树突生长的作用。

表达大鼠脑源性神经营养因子腺相关病毒(rAAV-BDNF)对体外培养海马神经元保护作用的研究

目的:研究表达大鼠脑源性神经营养因子腺相关病毒(rAAV-BDNF)对体外培养海马神经元的保护机制。方法:通过去血清培养诱导神经元凋亡后转染rAAV-BDNF,通过DAPI、PI及Actin染色来统计rAAV-BDNF对血清饥饿引起的细胞凋亡的数量及形态的影响。结果:rAAV-BDNF病毒能够有效地抑制血清饥饿引起的细胞凋亡,其保护效率在65左右,并可以有效地保护血清饥饿引起的细胞形态损伤。结论:rAAV-BDNF可通过抑制凋亡的途径保护体外培养的海马神经元。

脑胶质瘤组织β-连环蛋白、血管内皮生长因子的表达与微血管密度及其相关性研究

目的:探讨脑胶质瘤组织β-连环蛋白、血管内皮生长因子的表达与微血管密度以及三者的相关性。方法:50例脑胶质瘤标本和40例健康对照标本,其中脑胶质瘤组包含低级别脑胶质瘤标本29例和高级别脑胶质瘤标本21例。采用免疫组织化学法检测各组织标本中β-连环蛋白的表达;采用Western印迹法检测血管内皮生长因子的表达水平;应用抗CD105抗体检测新生血管内皮细胞表面标志蛋白CD105的表达水平,计算微血管密度。结果:脑胶质瘤组β-连环蛋白表达阳性率、血管内皮生长因子表达水平和微血管密度均较对照组明显升高(P<0.05)。与低级别脑胶质瘤组相比,高级别脑胶质瘤组的β-连环蛋白表达阳性率、血管内皮生长因子表达水平和微血管密度均明显升高(P<0.05)。β-连环蛋白表达阳性率、血管内皮生长因子表达水平、微血管密度三者间均呈正相关性(P<0.01)。结论:脑胶质瘤患者中β-连环蛋白表达阳性率、血管内皮生长因子表达水平及微血管密度均明显升高,其中高级别脑胶质瘤中升高更明显。

大鼠海马CA1脑区慢病毒载体注射方法学改进

目的:采用电极埋管的改进方式进行大鼠海马CA1脑区慢病毒载体注射的方法,并检测此方法的有效性和安全性。方法:45只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS)和eGFP慢病毒注射组(eGFP),每组15只。所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马CA1组织,采用电极埋管的改进方式进行慢病毒注射。NS组给予生理盐水(2μL)、eGFP组给予慢病毒(2μL),SH组只实行手术操作。注射病毒7、14和30 d后,分别处死大鼠并进行全脑冰冻切片,荧光显微镜观察eGFP慢病毒注射组的GFP绿色荧光表达水平和脑区分布。同时取相邻冰冻切片进行Nissl染色,检测eGFP慢病毒注射组的海马CA1脑区的损伤程度。结果:eGFP慢病毒注射成年大鼠海马CA1脑区7、14和30 d后,均可以成功检测到GFP在海马CA1脑区的表达,且表达水平和脑区分布均保持稳定,不随注射后切片时间的变化而变化。Nissl染色结果显示,神经元存活数目在eGFP慢病毒注射组与假手术组、生理盐水组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:成功建立了电极埋管的方式向大鼠海马脑区注射慢病毒的方法,并可在海马CA1脑区高水平表达其所携带的目的基因,为进一步的在成年大鼠海马CA1脑区进行基因操作奠定了基础。

携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体的构建及体外表达检测

目的构建携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体,并检测其体外表达目的基因的能力。方法应用基因克隆技术将大鼠BDNF基因克隆入慢病毒载体pFUW中,经过PCR、酶切和测序鉴定后,与包装质粒共转染293T细胞,制备并收集携带BDNF基因的慢病毒,重组病毒感染体外培养Hela细胞,利用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法检测BDNF的表达情况,观察病毒转染效果。结果PCR、酶切和测序鉴定,成功克隆了pFUW-BDNF重组子。所包装的重组慢病毒对Hela细胞的感染效率>90%,实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法可以检测到重组慢病毒感染Hela细胞后能高水平表达BDNF。结论成功构建了携带BDNF基因慢重组病毒载体,并可在体外高水平表达其所携带的目的基因,为将其进一步应用于神经系统损伤性疾病的治疗研究奠定了方法学基础。

STUB1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建人STUB1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定。方法:针对筛选确定的人STUB1基因RNAi有效靶点序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeI和EcoRI酶切后的pMagic 4.0载体连接,产生短发卡RNA慢病毒载体。PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,并包装成慢病毒颗粒。结果:PCR鉴定与DNA测序证实,合成的含STUB1 shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。STUB1 shRNA慢病毒载体在293T细胞中成功包装成慢病毒颗粒。结论:成功构建人STUB1基因RNAi慢病毒载体以及包装成功慢病毒颗粒,为研究STUB1在胶质瘤发生发展过程中相关信号通路的作用,提供了稳定感染细胞的载体。

巴曲酶联合阿加曲班治疗短暂性脑缺血发作200例

目的评估巴曲酶联合阿加曲班治疗短暂性脑缺血发作(TIA)的疗效及安全性。方法将5年内收治的200例TIA患者随机分为巴曲酶联合阿加曲班治疗组和巴曲酶单一治疗组,每组100例;单一治疗组给予改善循环、抗血小板聚集、脑保护及巴曲酶治疗;联合治疗组在以上治疗基础上加用阿加曲班。分别在治疗前、治疗后第3、5、7、14天测定纤维蛋白原(FIB)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT),同时观察临床疗效。结果治疗后第3、5、7天,联合治疗组FIB水平均低于单一治疗组(P<0.05);治疗后第14天,联合治疗组与一治疗组相比,FIB水平无显著差异;治疗后第3、5、7、14天,联合治疗组PT、APTT显著长于单一治疗组(P<0.01)。治疗后14 d,联合治疗组总有效率与单一治疗组相比有显著差异(91%vs 75%,χ2=4.252,P<0.05)。两组均未见明显不良反应。结论巴曲酶联合阿加曲班治疗可有效控制TIA后脑梗死的发生率,且风险未见明显提高。

急性脑卒中后排尿障碍的相关因素分析

目的观察急性脑卒中患者排尿障碍的表现、特点、转归和相关危险因素。方法选取急性脑卒中伴排尿障碍患者1 561人,统计学单因素分析不同时期的临床表现、特点、转归和相关危险因素。结果与正常组比较,高龄及患有前列腺疾病和泌尿系感染的脑卒中患者更易发生排尿障碍(P<0.05);脑卒中后排尿障碍与性别及脑卒中危险因素(高血压、糖尿病、心脏病、吸烟、饮酒)无关(P>0.05);脑卒中患者发病部位和类型与排尿障碍类型有相关性。结论脑卒中患者的发病部位、类型及患者的年龄、是否患有前列腺疾病、是否患有泌尿系感染是排尿困难发生的危险因素,应根据患者的具体情况谨慎对待。

17-β雌二醇对大鼠海马神经元保护作用的实验研究

目的研究17-β雌二醇对大鼠海马神经元树突生长的影响及血清饥饿情况下对神经元存活率的影响。方法体外培养3d的海马神经元通过加入浓度为1nmol/L和2nmol/L的17-雌二醇,统计比较神经元树突的数目和长度;体外培养1d的海马神经元,加入17-雌二醇,培养6～7d后血清饥饿48h后进行NSE染色及MTT检测,检测神经元形态及神经元存活率。结果 17-雌二醇可显著增加存活神经元树突的长度和数量;并能够有效地抑制血清饥饿引起的细胞减少,增加其存活率。结论 17-β雌二醇对大鼠海马神经元的生长发育及存活具有保护性作用。

23例格林-巴利综合征尸检例的脊神经根免疫组化分析

目的 通过对格林 巴利综合征尸检例的外周神经的免疫组化结果分析 ,探讨神经炎症的免疫机制及与临床分型的关系。方法 采用SABC法对 2 3例急慢性格林 巴利综合征尸检例的 88个脊神经根组织石蜡切块进行CD4 5RO、IgG、IgM、CD6 8染色 ,结果进行统计学分析。结果 急性格林 巴利的CD4 5RO的阳性率为 77.78% (1 4 1 8) ,慢性格林 巴利的CD4 5RO的阳性率为 4 0 % (2 5 ) ,它们之间的表达无统计学差异 (P >0 .0 5 )。而慢性格林 巴利的IgG阳性率为 6 0 % (3 5 ) ,显著高于急性格林巴利的IgG阳性率 1 1 .1 1 % (2 1 8) (P <0 .0 5 )。CD6 8在所有的标本均有表达 ,阳性率为 1 0 0 %。IgM在急性格林 巴利中仅有 1例表达 ,在慢性格林 巴利中不表达。应用Matlab软件计算 1 6例CD4 5RO阳性尸检例中CD4 5RO阳性细胞与CD6 8阳性细胞表达的相关系数 (r=0 .6 5 75 ) ,证实它们的表达成正相关。结论 格林 巴利的急性炎症主要由细胞免疫介导 ,而慢性炎症则辅有体液免疫加入。