淫羊藿次苷对犬颌骨间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ(IcarisidⅡ,ICSⅡ)对体外培养的比格犬颌骨间充质干细胞(alveolar bone-derived stem cells,AMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法:取比格犬颌骨骨片,体外分离培养出dAMSCs,传代至第4代,做多向分化鉴定。以10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9mol/L浓度的ICSⅡ刺激d AMSCs后,取1、3、5、7 d的细胞,分别用CCK-8及碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测dAMSCs的增殖及ALP活性;用10^-6 mol/L的ICSⅡ处理dAMSCs后14 d,作ALP染色,21 d时作茜素红染色,以判断ICSⅡ对细胞分化及矿化能力的影响。在成骨诱导及10^-6mol/L的ICSⅡ药物诱导第4、8天后,用蛋白免疫印迹试验分析成骨相关蛋白OSX、Runx-2及OCN的表达量;在诱导第6天时,利用RT-PCR分析成骨相关基因OSX、bFGF、Runx-2及OCN的表达情况。采用SPSS 22.0软件包进行统计分析。结果:原代培养的dAMSCs贴壁生长,呈梭形,具备多向分化能力;ICSⅡ在不同浓度下均可促进dAMSCs的增殖,其ALP活性亦有提高,且在实验浓度时可观察到钙结节形成。各成骨相关基因在ICSⅡ诱导后表达量有不同程度增加,均高于完全培养基组。随着时间延长,加药组Runx-2蛋白表达量有所下降,OCN蛋白表达量逐渐增多,与对照组差距加大;OSX的蛋白表达量虽高于对照组,但无统计学差异。结论:ICSⅡ可促进dAMSCs的增殖及成骨分化。