人表皮生长因子基因的化学合成和克隆及其在酵母中的表达

用固相亚磷酰胺法合成了人表皮生长因子基因,全长为173个核苷酸,它被分成8个寡核苷酸,分别在DNA合成仪上合成。经分离纯化后的寡聚核苷酸进行酶促连接,然后被克隆到噬菌体M13mp18中,克隆经分子杂交、限制酶酶切以及DNA序列分析检测,证明合成的人表皮生长因子基因和设计的完全一致。将人表皮生长因子基因的DNA片段插入酵母分泌型表达载体YFD59 HindⅢ位点中,建成表达人表皮生长因子基因的质粒YFD104,再将此质粒转化酿酒酵母,所得转化子经摇瓶发酵、发酵上清液用受体结合试验表明有人表皮生长因子表达。

氨基酸的气相色谱(续四)

4.8.2.微量合成步骤4 可以在一种免除手工转移的仪器中合成小量样品（图8）。将已知量的氨基酸溶液（0.5-2μmoles）放在这支管子中,在100℃用干燥N2的蒸气流中进行干燥。干燥以后,停止N2气流,注入含有8MHCl的n丙醇0.2—0.4ml。升高密闭的蒸气套管使反应管在100℃保温10分钟。

氨基酸的气相色谱(续三)

4.6.为GC选择酰基氨基酸酯(参看第7.2及7.5节)。对于GC分析来说,特殊衍生物的选定决定于一些相关的因素:诸如制备简单,高产率,稳定性以及衍生物的挥发性等。还要选择适于它们分辨力的层析柱和层析条件。有几个小组比较了几类酰基化氨基酸及其酯的挥发性。测定了一些N—TFA—氨基酸的融点,更适当的升华温度以及蒸汽压;在0.02—0.06Torr(毫米汞柱)真空下。

氨基酸的气相色谱(续二)

用三甲基甲硅烷基(TMS group)取代质子(通常称为甲硅烷基化作用),已经成功地用于制备一些生物学上重要的化合物的挥发性衍生物。这些重要的化合物有糖类、嘌呤和嘧啶碱、核苷类和核苷酸类、类固醇类、胺类、和氨基酸类。现在已有各式各样的试剂和大量的方法可用于甲硅烷基化作用,任何一种特殊的方法的选择,取决于该化合物和进行反应的规模。近来对这些方法已有评论。

氨基酸的气相色谱(一)

1.引言: 2.历史的或探索的方法,特殊的和有限的应用2.1.茚三酮氧化2.2.α氯氨基酸甲酯2.3.2.4—二硝基苯氨基酸甲酯2.4.苯乙内酰硫脲氨基酸2.5.N.N—二甲基氨基酸甲酯2.6.α—羟基氨基酸2.7.