基于PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路探讨芪黄疽愈方对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其作用机制

目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ/肝X受体(LXR)α/三磷酸腺甘结合盒转运体(ABC)A1信号通路探讨芪黄疽愈方影响对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)形成及其作用机制。方法 选取25只C57BL/6小鼠作为空白组给予普通饲料喂饲配合生理盐水灌胃,68只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组(24只)、中药组(22只)、对照组(22只)给予高脂饲料喂饲配合对应药物灌胃,12 w后通过主动脉苏木素-伊红(HE)染色证实造模成功,通过小鼠状态了解小鼠一般状况;主动脉HE染色、油红O染色观察动脉硬化及脂质沉积情况;肝脏HE染色、油红O染色观察肝脏病理变化、红染脂滴情况,并通过Western印迹、聚合酶链反应(PCR)检测PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达情况。结果 空白组皮毛水润光泽,精神状态良好,活跃,饮食饮水正常;模型组精神萎靡,皮毛晦暗,倦怠懒动,饮食差,饮水正常;与模型组相比,中药组及对照组给药后各症状均有不同程度改善。各组主动脉HE、油红O染色显示,空白组主动脉切片未见AS斑块,主动脉大体标本未见明显红染脂质;与空白组相比,模型组主动脉切片可见斑块,大体标本可见明显红染脂质;与模型组相比,中药组及对照组动脉切片中AS斑块面积较小,大体标本中红染脂质面积较小。小鼠肝脏HE、油红O染色显示,空白组肝细胞结构正常,细胞核位于细胞中央,细胞沿中央静脉为中心向四周放射排列,未见脂肪变性;油红O未见红染脂质;与空白组比较,模型组肝细胞排列紊乱,胞内可见形态不同、大小不等、数量不一的脂滴空泡,油红O切片可见大量红染脂质。与模型组比较,对照组、中药组肝脏病变程度减轻,肝细胞结构大部分清晰可见,脂滴数量减少,油红O红染脂质明显减少。Western印迹检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白的表达;与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组均显著升高(P<0.05)。PCR检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA的表达,与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组显著升高(P<0.05)。结论 芪黄疽愈方能够影响小鼠动脉硬化,升高肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达,调节肝脏脂质代谢,促进胆固醇逆转运,延缓AS进展。

消癥通络法调节PPARγ相关通路干预动脉粥样硬化的实验研究

目的:通过动脉硬化ApoE^(-/-)小鼠实验,探讨消癥通络法调节PPARγ相关通路干预动脉粥样硬化的作用机制。方法:选取25只C57BL/6小鼠作为空白组,68只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组(24只)、中药组(22只)、对照组(22只),12周后观察小鼠状态,主动脉HE染色、油红O染色观察血管病理变化、斑块面积,并通过免疫组化、Western blot观察血管ox-LDL、PPARγ、CD36、ABCA1蛋白表达情况。结果:(1)一般情况:空白组小鼠状态良好,皮色光亮,活跃,饮食饮水正常;模型组大鼠状态较差,皮毛油腻、晦暗,神情萎靡,饮食稍差,饮水正常;与模型组相比较,中药组及对照组给药后均有不同程度改善。(2)HE染色及油红O病理图片显示:空白组主动脉未见AS斑块;与空白组相比,模型组AS斑块面积显著增大;与模型组相比,对照组、中药组AS斑块面积明显减小。(3)免疫组化法及Western blot检测小鼠主动脉ox-LDL、PPARγ、CD36、ABCA1蛋白表达:与空白组比较,模型组小鼠主动脉PPARγ、ABCA1蛋白表达显著降低,ox-LDL、CD36蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组相比,中药组小鼠主动脉PPARγ、ABCA1蛋白表达明显升高(P<0.05),CD36明显降低(P<0.01),ox-LDL降低,但无统计学意义(P>0.05)。结论:消癥通络法能够抑制PPARγ介导的CD36信号通路,促进ABCA1信号通路,从而达到改善血管内皮炎症反应,抑制巨噬细胞泡沫化,延缓AS进展的目的。

湿法制备话梅含片工艺的研究

研究湿法制备保健型话梅含片的配方及工艺条件。试验结果表明:最佳配方为话梅粉14%,葡萄糖33%,冰糖13%,甘露醇33%,柠檬酸、V C各1%,薄荷脑1%,配方中的百分数均为质量分数。润湿剂选用70%乙醇。增香剂为薄荷油和话梅香精,其加入量均为0.2 mL/15 mL乙醇润湿剂,硬脂酸镁添加量为总颗粒质量的3%。最佳工艺条件为,颗粒粒度20目,干燥温度60℃,干燥时间40 min。该工艺可以得到话梅味浓郁,酸甜适中,清凉感适宜、表面光滑,硬度、口感良好的话梅含片。

穴位埋线治疗早期下肢动脉硬化闭塞症寒凝血瘀证临床研究

目的观察穴位埋线治疗早期下肢动脉硬化闭塞症(ASLOE)寒凝血瘀证的临床疗效。方法将80例早期ASOLE寒凝血瘀证患者按照随机数字表法分为2组。对照组40例予脉管复康片口服,治疗组40例在对照组治疗基础上联合穴位埋线治疗。2组均治疗30 d。比较2组治疗前及治疗15、30 d后皮肤温度、色泽、疼痛评分、踝肱指数(ABI),并统计临床疗效、不良反应发生情况及终点事件发生情况。结果治疗组总有效率92.5%(37/40),对照组总有效率75.0%(30/40),治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。治疗15、30 d 2组皮肤温度、色泽、疼痛评分均较本组治疗前升高(P<0.05),治疗30 d 2组各项评分均高于本组治疗15 d(P<0.05),且治疗15、30 d治疗组各项评分均高于对照组同期(P<0.05)。治疗15、30 d 2组ABI均较本组治疗前升高(P<0.05),治疗30 d 2组ABI均高于本组治疗15 d(P<0.05),且治疗15、30 d治疗组ABI均高于对照组同期(P<0.05)。2组治疗期间均未见明显不良反应。2组终点事件发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论穴位埋线治疗早期ASOLE寒凝血瘀证疗效确切,能有效改善临床症状及体征,安全性佳,远期效果更优,值得进一步研究与应用。

芪黄疽愈方对ASOLE大鼠肝脏脂质代谢相关因子表达的影响

目的:观察芪黄疽愈方对下肢动脉硬化闭塞症(arteriosclerosis occlusive disease of the lower extremities,ASOLE)大鼠肝脏脂质代谢相关因子B类Ⅰ型清道夫受体(scavenger receptor class B typeⅠ,SR-BⅠ)、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)-α及单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)表达的影响。方法:高脂饮食联合隐动脉内膜损伤法制作大鼠ASOLE模型,Western印迹检测肝脏SR-BⅠ,ELISA检测肝脏PPAR-α、MCP-1。结果:与空白组比较,模型组SR-BⅠ表达明显降低,芪黄疽愈方处理后表达明显升高;模型组PPAR-α较空白组显著性降低,芪黄疽愈方处理升高PPAR-α水平,其中高、中浓度组与模型组有显著性差异;与空白组比较,模型组MCP-1显著性升高,芪黄疽愈方处理降低MCP-1水平,其中高浓度组较模型组显著性下降。结论:芪黄疽愈方能够升高SR-BⅠ、PPAR-α,降低MCP-1水平,可能与其调节脂质代谢从而抑制炎症反应具有相关性。

葛建立消癥通络法治疗下肢动脉硬化闭塞症经验

葛建立教授治疗下肢动脉硬化闭塞症有独到见解,根据“痰饮”“瘀血”病因学说,结合“痰瘀互结”理论,提出“癥积阻络”的发病观,并以“消癥通络”为治疗大法遣方用药,自拟芪黄疽愈方应用于临床,取得满意疗效。

芪黄疽愈方调节ApoE^(-/-)小鼠巨噬细胞相关因子干预动脉粥样硬化形成的机制研究

目的:探讨芪黄疽愈方调控巨噬细胞相关因子影响ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的作用机制。方法:68只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组(24只)、中药组(22只)、对照组(22只),另设C57BL/6小鼠25只为空白组。高脂饲料喂养构造动脉粥样硬化ApoE^(-/-)小鼠模型,中药组按0.2 mL/20 g体质量予芪黄疽愈方颗粒灌胃,对照组按0.2 mL/20 g体质量予阿托伐他汀钙片悬混液灌胃,空白组、模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,连续给药12周。观察各组小鼠一般状态、体质量;主动脉HE染色、Masson染色、油红O染色,观察血管病理形态、斑块面积;血清ELISA检测巨噬细胞相关因子白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-13、干扰素-γ(IFN-γ)、脂多糖(LPS)、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-6、IL-10、IL-12表达情况;免疫荧光观察巨噬细胞表面标志物iNOS、CD206表达情况。结果:模型组、中药组、对照组小鼠精神萎靡,毛色暗淡,前期增长迅速,后逐渐减缓,其中模型组体质量显著高于其他各组(P<0.01)。HE染色、Masson染色、油红O染色病理图片显示:模型组较空白组斑块面积显著增大,胶原纤维含量明显减少,主动脉红染脂质显著增加(P<0.01),中药组、对照组较模型组斑块面积降低,胶原纤维含量明显增多,主动脉红染脂质显著减少(P<0.01)。ELISA检测结果示:模型组小鼠血清IL-1β、IFN-γ、LPS、IL-6、IL-12显著高于空白组(P<0.05),IL-4、IL-13、TGF-β、IL-10显著低于空白组(P<0.05);与模型组比较,中药组小鼠血清IL-1β、IFN-γ、LPS、IL-6、IL-12显著降低(P<0.05),IL-4、IL-13、TGF-β、IL-10的表达水平显著提高(P<0.05)。免疫荧光染色示:M1型巨噬细胞标志物iNOS在模型组阳性表达较空白组高(P<0.01),中药组表达较模型组低(P<0.05),M2型巨噬细胞标志物CD206在模型组阳性表达较中药组低(P<0.01)。结论:芪黄疽愈方可减少M1型巨噬细胞,抑制M1型巨噬细胞相关因子IL-1β、IFN-γ、LPS、IL-6、IL-12的表达;增加M2型巨噬细胞,促进M2型巨噬细胞相关因子IL-4、IL-13、TGF-β、IL-10的生成,这可能是其干预动脉粥样硬化发生发展的机制。

芪黄疽愈方联合前列地尔注射液治疗下肢动脉硬化闭塞症随机对照研究

目的观察芪黄疽愈方联合前列地尔注射液治疗下肢动脉硬化闭塞症(ASOLE)的临床疗效。方法采用随机对照方法,将80例ASOLE患者按随机数字表分为试验组和对照组,每组各40例。两组均采用常规治疗和前列地尔注射液2周,试验组口服芪黄疽愈方(每日1剂,分早、晚2次服用),对照组口服西洛他唑片(100 mg/次,2次/日),两组均连续治疗3个月。分别于治疗前、治疗后、治疗结束后6个月观察患者皮肤温度、色泽、疼痛、踝肱指数(ABI)评价疗效。结果治疗后,试验组与对照组愈显率分别为67.5%(27/40)、65.0%(26/40),两组差异无统计学意义(χ^2=0.056,P=0.813);试验组与对照组有效率分别为95.0%(38/40)、92.5%(37/40),两组差异无统计学意义(χ^2=0.213,P=0.644)。两组治疗后、治疗结束后6个月,疼痛评分、ABI均较治疗前改善(P<0.05),且治疗结束后6个月优于治疗后(P<0.05)。治疗后,对照组皮肤温度、疼痛评分优于试验组(P<0.05);治疗结束后6个月,试验组皮肤温度、色泽、疼痛评分和ABI均优于对照组(P<0.05)。结论芪黄疽愈方治疗ASOLE临床疗效确切,对于皮肤温度、疼痛、色泽、ABI的远期改善效果优于西洛他唑。

芪黄疽愈方对下肢动脉硬化闭塞症大鼠VEGF蛋白表达及相关信号通路的影响

目的:探讨芪黄疽愈方对下肢动脉硬化闭塞症(ASOLE)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及相关信号通路的影响。方法:高脂饮食联合隐动脉内膜损伤法制作大鼠ASOLE模型。芪黄疽愈方处理12周。ELISA检测血清VEGF。Western Blot检测肌肉组织VEGF、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、p-ERK、p38、p-p38。结果:模型组、芪黄疽愈方处理组大鼠血清VEGF显著低于空白组(P<0.01);与模型组比较,各剂量芪黄疽愈方处理显著增加了ASOLE大鼠血清VEGF蛋白水平(P<0.01),其中芪黄疽愈方高、中浓度组显著高于低浓度组(P<0.01)。模型组、芪黄疽愈方各剂量组大鼠肌肉组织VEGF、ERK、p-ERK、p38、p-p38蛋白水平显著低于空白组(P<0.05);与模型组比较,芪黄疽愈方处理均有效升高了病变肌肉组织VEGF、ERK、p-ERK、p38、p-p38蛋白水平(P<0.05),与药物浓度呈相关性。结论:芪黄疽愈方可促进VEGF分泌,激活ERK、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路,这可能参与了其治疗ASOLE的机制。