纤细薯蓣皂苷诱导肺癌A549细胞自噬的作用及机制

目的探讨吉祥草中纤细薯蓣皂苷(gracillin)诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬的作用及机制。方法以A549细胞为对象,采用CCK-8法检测不同浓度(0.25、0.5、1、2、4μmol/L)gracillin作用不同时间(12、24、48 h)对细胞增殖的影响。与不加药物的对照组进行比较,采用生物透射电子显微镜观察gracillin(2μmol/L)作用24 h对细胞自噬小体形成的影响;通过GFP-LC3质粒转染实验检测gracillin(0.25、0.5、1、2μmol/L)作用24 h后GFP-LC3在细胞自噬小体膜上的聚集情况;采用实时定量聚合酶链式反应法和Western blot法检测gracillin(0.25、0.5、1、2μmol/L)作用24 h后A549细胞中序列相似性家族102成员A(FAM102A)mRNA和蛋白的表达水平,以及自噬相关蛋白[p62、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)]和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(又名Akt)信号通路相关蛋白的表达水平。结果gracillin对A549细胞具有一定的增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖趋势;其作用24 h的半数抑制浓度为2.55μmol/L。gracillin作用24 h后,细胞胞浆内可见含双层膜结构的自噬小体;自噬小体膜上可见明显的GFP-LC3绿色荧光斑点,且有随药物浓度升高而增多的趋势。与对照组比较,gracillin不同浓度组细胞中FAM102A mRNA和蛋白的表达水平(0.5、1、2μmol/L组)、Beclin-1蛋白的表达水平(1、2μmol/L组)和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(2μmol/L组)均显著升高,p62蛋白的表达水平(1、2μmol/L组)和Akt蛋白(1、2μmol/L组)、PI3K蛋白(2μmol/L组)的磷酸化水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论gracillin可能通过上调FAM102AmRNA和蛋白的表达、抑制PI3K/Akt信号通路来促进A549细胞发生自噬,从而发挥抑制细胞增殖的作用。

FRP管混凝土受弯构件弯矩计算方法的研究

本文简要介绍了FRP管混凝土构件的研究现状 ,对FRP管混凝土受弯构件的本构关系进行了探讨 。

Sonic Hedgehog信号通路对小鼠血管瘤内皮细胞增殖的影响

目的探讨Sonic Hedgehog信号通路对小鼠血管瘤内皮细胞(EOMA细胞)增殖的影响。方法常规培养EOMA细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Sonic Hedgehog信号通路抑制剂GANT61对EOMA细胞增殖的影响。采用EdU染色流式细胞术检测GANT61及Sonic Hedgehog信号通路激动剂SAG对EOMA细胞增殖的影响。采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测GANT61及SAG对EOMA细胞增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)基因mRNA表达的影响。结果GANT61作用EOMA细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈剂量及时间依赖性,24 h半数抑制浓度(IC50)为79.42μmol/L。EdU染色流式细胞术检测结果显示,GANT61干预可抑制EOMA细胞增殖,而SAG干预可促进EOMA细胞增殖。RT-qPCR检测结果显示,GANT61干预可抑制PCNA及Cyclin D1 mRNA表达,而SAG干预可促进PCNA及Cyclin D1 mRNA表达。结论Sonic Hedgehog信号通路可调控EOMA细胞增殖,其可能参与血管瘤的发生发展。

纤维增强聚合物约束混凝土组合构件

介绍了纤维增强聚合物混凝土组合材料的发展状况及工作机理 ,指出FRP混凝土构成的组合构件既发挥了FRP和混凝土各自的优势 ,又能通过该 2组分的协同作用满足结构工程对强度、刚度、耐久性、延性、耐腐蚀性及综合造价的要求 .基本力学性能计算表明 ,FRP管混凝土的抗压强度和延性成倍提高 ,受拉时开裂延缓 ,经过合理设计的组合梁、柱等构件具有极佳的抗震性能 .

低表达miR-21对苦参碱诱导的肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:探讨miR-21低表达能否增强苦参碱(matrine,MAT)对肝癌细胞的促凋亡作用。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测不同浓度MAT作用HepG2细胞后miR-21的表达情况。流式细胞术检测miR-21低表达对MAT诱导的细胞凋亡的影响;RT-qPCR和Western blot检测miR-21低表达对MAT诱导的细胞凋亡中Bc1-2和Bax mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:miR-21表达量随MAT作用浓度的增加而增加;miR-21低表达可促进MAT诱导的细胞凋亡,并促进Bax mRNA和蛋白的表达(P<0.05),而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论:miR-21低表达可通过抑制Bcl-2和促进Bax的表达来增强MAT诱导的HepG2细胞凋亡。

敲减NLRC3表达对人正常支气管上皮BEAS-2B细胞生长的影响

目的:探讨敲减含胱天蛋白酶募集结构域的NOD样受体家族蛋白3(NLRC3)表达对人正常支气管上皮细胞株BEAS-2B活力和凋亡的影响及机制。方法:使用Lipofectamine 2000转染试剂将NLRC3基因的小干扰RNA(siRNA)片段转染至BEAS-2B细胞;RT-qPCR筛选干扰片段;MTT法检测细胞活力;JC-1检测细胞线粒体膜电位变化;annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果:NLRC3基因的干扰片段3(siNLRC3-3)干扰效果最佳(P<0. 01)。在BEAS-2B细胞中敲减NLRC3可显著增强细胞活力(P<0. 01)。敲减NLRC3表达可显著升高线粒体膜电位,使细胞凋亡率显著下降(P<0. 05)。敲减NLRC3表达使细胞中Bcl-2蛋白表达水平显著上调,而Bax蛋白表达水平显著下调(P<0. 01)。结论:敲减NLRC3基因可通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达,增强BEAS-2B细胞活力并抑制其凋亡。

人胎盘源间充质干细胞的分离、培养及生物学鉴定

目的:探讨机械剪碎组织加酶液消化法分离、培养人胎盘间充质干细胞的可行性,并对间充质干细胞进行生物学鉴定。方法:取足月产人胎盘,采用机械剪碎组织加酶液消化法分离,密度梯度离心法提纯胎盘组织中的细胞,利用细胞生长特性对细胞进行进一步分离、纯化并传代培养,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术鉴定细胞表面标记。结果:在倒置显微镜下,细胞为贴壁生长,形态呈长梭形,少数为多角形,胎盘组织来源间充质干细胞在体外可稳定长期传代培养,应用流式细胞仪检测结果显示CD73、CD90、CD105表达阳性,CD34、CD45、HLADR表达阴性。结论:联合利用机械剪碎胎盘组织和酶消化法可高效获取胎盘间充质干细胞,获取的胎盘间充质干细胞在体外培养过程中生长稳定,增殖能力强,可长期传代或冻存。

心脏转录因子Nkx2-5、GATA-4真核表达质粒的构建

目的:构建人类心脏特异性转录因子Nkx2-5、GATA-4的真核表达质粒,探讨Nkx2-5、GATA-4在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法:以质粒人脑c DNA为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2-5、GATA-4编码区序列。将真核表达载体pCDNA 3.1-HA、pCDNA 3.1-flag分别和Nkx2-5、GATA-4的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCDNA 3.1-HA-Nkx2-5、pCDNA 3.1-flag-GATA-4,转化至大肠杆菌,质粒抽提后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果:成功设计引物扩增出Nkx2-5、GATA-4基因编码区约1 kbp及1.3 kbp的目的片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2-5、GATA-4基因序列。结论:成功构建了含有Nkx2.5、GATA4的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。

Piscidinol A对人肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨匹西狄醇A(Piscidinol A)对人肝癌Hep G-2细胞增殖及凋亡的影响。方法取对数生长期经胰酶消化后的Hep G-2细胞,培养24 h后分为药物组及对照组,药物组加入不同浓度Piscidinol A(6.25、12.5、25、50、100 mg/L),对照组加入等体积的含10%胎牛血清RPMI1640培养液,12、24、48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率,计算Piscidinol A的半数抑制浓度(IC_(50))值;于荧光显微镜下通过Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态,采用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法及流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting法检测B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(Bax)蛋白表达。结果药物组Piscidinol A作用后Hep G-2细胞增殖受到抑制且呈量效和时效关系,24 h时IC_(50)值为24.90 mg/L;细胞凋亡染色显示,药物组有典型的细胞凋亡形态出现。药物组6.25、12.5、25、50、100 mg/L的Piscidinol A作用Hep G-2细胞24 h后,细胞凋亡率分别为11.83%、17.49%、21.72%、34.17%、48.51%,对照组为7.23%,随着药物浓度增大,药物组细胞凋亡率相应升高,与对照组相比,P均<0.05。药物组6.25、12.5、25、50、100 mg/L的Piscidinol A作用Hep G-2细胞24 h后,细胞凋亡相关蛋白Bax表达量分别为0.29、0.33、0.35、0.39、0.43μg/μL,对照组为0.24μg/μL,药物组随着Piscidinol A浓度升高,Bax蛋白表达增加,与对照组相比,P均<0.05。结论 Piscidinol A能抑制人肝癌Hep G-2细胞增殖并诱导细胞凋亡。

Piscidinol A诱导人白血病K562细胞凋亡及其作用机制

目的:初步研究Piscidinol A对人慢性髓系白血病K562细胞的增殖抑制作用及抗肿瘤分子作用机制。方法:MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡形态;AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Piscidinol A对细胞中凋亡相关蛋白表达的影响。结果:Piscidinol A对K562细胞具有增殖抑制作用且呈浓度和时间依赖关系,24 h时IC_(50)为27.36 mg/L;细胞凋亡染色示有典型的细胞凋亡形态出现;流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测发现Piscidinol A可诱导K562细胞凋亡,其凋亡率呈浓度依赖性;Western blot法检测到Piscidinol A能上调Bax和Caspase-3的表达,同时下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:Piscidinol A能抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与凋亡相关蛋白表达量变化有关。

YAP抑制剂对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖、凋亡的影响

目的研究YAP抑制剂维替泊芬对慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞增殖凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法计算YAP抑制剂维替泊芬对K562细胞增殖的影响;采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测维替泊芬作用后细胞凋亡变化;Western印迹检测维替泊芬作用后K562细胞Bax、Bcl-2基因的蛋白表达变化。结果维替泊芬作用K562细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈剂量和时间依赖性,24 h半数抑制浓度(IC50)为11.80μmol/L;维替泊芬作用K562细胞后,细胞凋亡率随药物浓度增加而增加,4、8、16μmol/L细胞凋亡率分别为(8.86±0.99)%、(16.54±0.45)%、(27.08±4.41)%,与对照组(3.49±0.61)%相比,8、16μmol/L差异有统计学意义(P<0.05);Western印迹检测维替泊芬作用K562细胞后,细胞凋亡相关基因Bax表达上调,Bcl-2表达下调。结论YAP抑制剂维替泊芬通过抑制Hippo信号通路活性,抑制CML细胞K562细胞增殖,促进凋亡,因此,靶向Hippo信号通路有望为CML治疗提供新思路。

纤细薯蓣皂苷的药理作用研究进展

纤细薯蓣皂苷(Gracillin)是一种甾体皂苷类化合物,其广泛存在于如穿龙薯蓣、七叶一枝花、吉祥草、附子等多种传统药用植物中,研究报道其具有抗肿瘤、抗炎、抗寄生虫等药理作用。现对国内外有关Gracillin的结构特征和药理作用等方面进行综述,以期为Gracillin的深入研究及合理开发利用提供理论依据。

间充质干细胞在肝纤维化治疗中的研究进展

肝纤维化是各种慢性肝损伤,如病毒性肝炎、酒精、药物、代谢性疾病和肝细胞自身免疫调节失调等原因导致的以肝组织中细胞外基质过度沉积为特点的慢性病理过程,最近研究表明肝纤维化过程是可逆的。间充质干细胞(MSCs)是一类具有持续自我更新、增殖、多向分化和免疫调节活性的成体干细胞,MSCs通过肝源性分化、与肝细胞融合、旁分泌效应和免疫调节,直接或间接消除细胞外基质的沉积,有助于瘢痕组织的降解和促进肌成纤维细胞凋亡,成为治疗肝纤维化最具潜力的种子细胞。本文就间充质干细胞在肝纤维化疾病中的研究进展做一综述。

快速康复外科理念下的临床护理路径在慢性硬膜下血肿围手术期中的应用效果

慢性硬膜下血肿(CSDH)多见于老年人,病史多不明确,可有轻微外伤史;常在颅脑外伤3周以上开始出现症状,以慢性颅内压增高和神经症状为主要表现,部分患者可表现为记忆力减退、理解力差、智力迟钝、精神失常等精神智力症状;血肿多位于额顶颞部,头颅CT扫描颅骨内板下可见新月形或半月形混杂密度或等密度阴影,手术首选钻孔引流[1]。

人工气道集束化护理管理对重型颅脑损伤术后患者呼吸机相关性肺炎的预防效果

目的探究人工气道集束化护理管理对重型颅脑损伤术后患者呼吸机相关性肺炎的预防效果。方法选择2020年10月-2021年8月汕头大学医学院第二附属医院收治的78例重型颅脑损伤术后机械通气患者作为本次的研究对象,采用随机数字表法将其平均分为试验组和对照组,每组39例。对照组患者采用常规护理干预,试验组采用人工气道集束化护理管理,在护理周期结束后对比两组效果,并对相关数据进行统计学分析。结果试验组相关性肺炎发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组机械通气时长以及ICU住院时长低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对重型颅脑损伤术后机械通气患者采用人工气道集束化护理管理能够降低呼吸机相关性肺炎发生率,缩短机械通气时长以及ICU住院时长,临床疗效显著,建议进行推广应用。

木姜子乙醇提取物对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响及机制初探

目的:探讨木姜子乙醇提取物(Litsea pungens ethanol extract,LPEE)对肝癌细胞侵袭转移能力的影响及其相关机制。方法:MTT法测定LPEE对肝癌细胞株HepG2和QGY-7703的IC50;transwell迁移实验和matrigel侵袭实验检测LPEE对HepG2和QGY-7703细胞迁移和侵袭能力的影响;qRT-PCR和Western blot检测LPEE对各组细胞中E-cadherin和VEGF基因和蛋白水平的表达变化。结果:LPEE可显著抑制HepG2和QGY-7703细胞穿过transwell小室和matrigel基质胶的细胞数(P<0.05);50和100μg·mL^(-1) LPEE作用组与0组相比,可明显降低VEGF mRNA和蛋白水平的表达(P<0.05),而促进E-cadherin mRNA和蛋白水平的表达(P<0.05)。结论:LPEE可抑制肝癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与抑制VEGF表达和促进E-cadherin表达有关。