沂水县农民专业合作组织建设情况调查

农民专业合作组织是为适应市场经济发展,在家庭承包经营基础上对农业经营体制的创新。介绍了沂水县农民专业合作组织的基本情况与特点,提出了诸如多数合作组织尚未取得独立法人地位、规模小、经济实力弱、辐射带动能力不足、内部机制不完善、外部环境需进一步优化等问题。认为应从加快使合作组织取得独立法人地位、加强制度建设等方面着手,促使专业合作组织健康发展。

沂水县现代农业发展调查与思考

对沂水县现代农业发展现状进行了调查分析,指出了制约因素,提出了加快发展的几点建议。

泥鳅园的“春风”——赣榆县墩尚镇出口泥鳅质量安全示范区建设调查

以前。人们总认为泥鳅是“鸭子食”，不登大雅之堂，其实不然，《本草纲目》上早就有“天上斑鸠、地下泥鳅”之说。中医学认为：泥鳅具有补中气、祛湿邪之功用。现代医学专家指出：泥鳅皮肤中分泌的粘液即所谓“泥鳅滑液”。有较好的抗菌消炎作用，拌糖抹于患处可祛痛消肿，亦可美容护肤；因泥鳅所含脂肪成份较低，胆固醇很少．所以心血管疾病患者及贫血、肝炎等病人多食有益；因泥鳅肉质细嫩、味道鲜美、营养丰富．在日韩等国被誉为“水中人参”，被称为“软黄金”．是国内外消费者所喜爱的美味佳肴。

恩诺沙星在中华绒螯蟹体内的衰减研究

采用超高效液相色谱—串联质谱法,研究了不同养殖条件下恩诺沙星在中华绒螯蟹体内的残留消除规律。试验结果表明,休药25 d后,各组试验蟹体内恩诺沙星的残留均低于日本规定的残留限量标准(10μg/kg),太湖开放型水域中试验蟹体内恩诺沙星的残留低于仪器的检测限;各组试验蟹体内恩诺沙星残留衰减消除速率总体表现为,室外开放水域中的消除速率快于室内条件;28℃条件下消除速率快于22℃;Ⅴ期幼蟹的衰减消除速率快于扣蟹。

猴痘研究进展

猴痘是一种以皮肤出疹为特征的病毒性人畜共患传染病,通过直接密切接触,由动物传染给人,并可在人与人之间传染。其主要发生于中非和西非的热带雨林,在美国也曾暴发过。虽然在我国至今尚无猴痘的报道,但未雨绸缪,做好技术储备,很有必要。

太湖藻类分布及其对鱼类的毒性试验

对太湖9个水域藻类进行监测,结果表明,藻类平均密度在52万～2 660万个/L之间,梅梁湖最高,东部沿岸区最低;1月藻类在太湖地区分布最少,8月最多;蓝藻分布了39.7%,绿藻25.3%,隐藻16.9%,硅藻15.5%,祼藻及其他门类2.6%。微囊藻藻体冻融上清液用生理盐水稀释到1∶10时仍可使草鱼红细胞出现凝集现象,对照不凝聚。在腹腔注射藻细胞冻融液4 h后,草鱼出现死亡现象,其半数致死剂量为380 mg/kg,二次注射6 h后的半数致死剂量为180 mg/kg;腹腔注射的草鱼中毒症状为:游动迟缓、鳞片松散脱落,然后逐渐死亡。解剖后发现肝脏充血肿大,绿色胆汁外流,肝切片后发现细胞浸润,肝细胞分隔成网状,并变性坏死;肾脏淤血凝固,细胞变形。全藻体细胞对乌鳢灌胃毒性试验结果显示,乌鳢起初未见明显的体表症状,但肝脏略有肿大、充血并伴有出血点,以300 mg/kg剂量灌胃,48 h时乌鳢的死亡率为20%。

黄颡鱼病原嗜水气单胞菌分离鉴定及致病性研究

2015年江苏淮安地区养殖黄颡鱼暴发出血性肠炎。从濒死鱼肠组织和腹水中分离纯化出2株细菌,通过16S rRNA进化树分析显示,这2株菌与气单胞菌属的嗜水气单胞菌亲缘关系较近。致病性试验显示,2株菌对健康黄颡鱼具有较强的致病性,病原菌浓度达到5×10~4CFU/m L时,死亡率在40%~50%,病原菌浓度达到5×10~8CFU/m L时,死亡率在90%~100%。药敏试验显示,分离到的2株菌都对依诺沙星、头孢曲松、舒巴坦、恩诺沙星敏感。确定了淮安地区暴发的黄颡鱼出血性肠炎病原为嗜水气单胞菌,对黄颡鱼健康养殖和疾病防控具有重要意义。

猪圆环病毒血清I型和II型的PCR鉴别

根据基因库中猪圆环病毒 (PCV)的基因序列 ,设计并合成了 3条引物 ,建立复合PCR,对 2株 PK-1 5细胞及一些疑似 PCV感染的病料进行了 PCV检测。结果 2株 PK-1 5细胞和所有病料都可扩增出 PCV-1的基因片段 ,其中 1株 PK-1 5细胞和一些病料还扩增得到了PCV-2的 DNA片段。证明应用设计的引物进行复合 PCR快速检测 PCV可行 ,为 PCV的检测分型及

猪链球菌2型溶血素基因的检测

根据GenBank发表的猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly)全序列,利用O ligo(7.0)软件设计并合成了可扩增长度为495 bp的引物,从SS2参考菌株ATCC43765和SS2江苏分离株HA9801中扩增出495 bp的条带,利用HindⅢ限制性内切酶对具有相应单一酶切位点的PCR扩增产物进行酶切,获得预期的314 bp和181 bp的2个DNA片段,检测灵敏度达到2.5×102CFU.mL-1;但不能从马链球菌兽疫亚种ATCC35246、大肠埃希氏菌ATCC25922、单增李斯特杆菌ATCC19115/413、金黄色葡萄球菌ATCC25923、粪肠球菌ATCC29212中扩增出相应的条带。PCR扩增产物的测序结果与GenBank的猪链球菌sly基因(Z36907)核苷酸序列完全一致。该方法可快速、敏感、特异地检测SS2的溶血素基因。

不同动物源新城疫病毒感染不同种属细胞的病变观察

用10株不同动物源的新城疫病毒F48E8,LaSota、LaSota-GFP、ZJ1、ZJ1-GFP、JS-4-05-Go、GX-1-05-Ch、JS-1-07-Os、JS-1-07-Du、JS-1-07-Pi等毒株分别感染鸡胚、鹅胚、鸭胚成纤维细胞、PK-15、Dulac、FK81、MDCK、Vero、Hela多种不同动物来源的传代细胞系,通过对病毒感染细胞后病变的观察、ZJ1-GFP及LaSota-GFP两个病毒感染细胞后细胞中绿色荧光蛋白指示的病变,了解不同的毒株对不同细胞感染性的差别。结果表明,不同毒力、不同动物源的新城疫病毒致不同种属细胞病变的作用不同,产生病变的时间有差异,强毒F48E8等毒株感染细胞后48～72h可以引起几种禽源成纤维细胞全部裂解,而哺乳动物来源的细胞在60～120h细胞发生病变,且病变也不如禽源成纤维细胞严重,出现了细胞的圆缩。弱毒株在胰酶处理后感染细胞,72h以后出现明显细胞病变,引起的哺乳动物细胞病变不明显。受试毒株的动物种属来源与细胞的致病性没有明显相关性。

猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank发表的猴痘病毒(AF380138)F3L基因全序列,设计并合成了引物和TaqMan、MGB探针,建立了F3L基因的荧光定量PCR检测方法。应用该方法可从人工合成的猴痘病毒F3L基因片段(48 048～48 509 bp)扩增典型的"S"型曲线,25μL反应体系检测灵敏度可达6.8拷贝,但不能从鸡痘、山羊痘等病毒中扩增出相应的扩增曲线。结论:本方法可快速、敏感、特异地检测猴痘病毒。

3种食料植物饲养美国白蛾的比较

以3种常见的食料植物饲喂美国白蛾幼虫,比较了美国白蛾的幼虫历期、死亡率、化蛹率、羽化率等指标。经试验发现,桑叶对幼虫的生活周期较为有利,在江苏地区是美国白蛾较合适的天然食材,法国梧桐叶不太适合美国白蛾的生长。

猪链球菌2型分型血清的制备

利用猪链球菌2型(SS2)参考菌株ATCC 43765所制备的全菌菌体抗原,经免疫家兔制备了全菌抗血清。经平板和试管凝集试验测定,该血清的效价为128。该血清仅与SS2发生凝集反应,不与化脓链球菌(A群)、无乳链球菌(B群)、马链球菌兽疫亚种(C群)、马链球菌(C群)、停乳链球菌(C群)、粪链球菌(D群)、粪便链球菌(D群)、F群链球菌、兰氏L群链球菌、兰氏O群链球菌发生凝集反应,表明该血清具有较高的特异性,可作为SS2的分型血清。

猪链球菌2型荚膜基因PCR快速检测方法的建立及试剂盒的研制

根据猪链球菌2型的荚膜基因2H序列设计一对引物,成功地扩增了荚膜基因,并建立了检测猪链球菌2型的PCR方法。用ScaI进行确认,获得了与预期大小一致的389bp和300bp的两个片段。然后对该方法的敏感性、特异性进行了研究。结果表明,敏感程度可达10个细菌;对其他细菌PCR检测结果均呈阴性,表明建立的猪链球菌2型荚膜基因的PCR检测方法,其特异性和敏感性均很高,可作为猪链球菌病快速诊断的方法。在建立PCR方法的基础上,研制成试剂盒,并对试剂盒的特异性、敏感性和稳定性进行了研究。

一株鸵鸟胚源新城疫病毒生物学特征和遗传发生分析

从死亡的鸵鸟胚胎中分离到1株新城疫病毒毒株,经毒力检测为强毒株,鸡胚平均死亡时间为45h,IVPI为2.90,IPCI为1.88。RT-PCR扩增出融合蛋白(F)基因,测定核苷酸序列并进行遗传发生分析和酶切位点分析。对基因编码的氨基酸序列进行了推导,该毒株的蛋白酶裂解激活位点附近的氨基酸序列为112R(K)RQKR↓F117,为强毒特征序列,然而该毒株并未引起该鸵鸟群发病。根据绘制的系统进化发生树和F基因上3种限制性内切酶(RE)位点分布,确定该毒株均为基因Ⅶ型。该病毒与在我国鸡群、鹅群同期流行的毒株有很高的同源性。

猴痘病毒PCR检测方法的建立

从GenBank上调取猴痘病毒的基因序列,经过分析,找出了猴痘病毒的特异性靶基因序列F3L片段,人工合成猴痘病毒MPV(AF380138)F3L基因片段(48048-48509bp)并插入质粒,作为病毒检测的模拟阳性模板。根据该序列设计并合成PCR引物,对模拟的阳性模板进行扩增,结果能扩增出与目的片段大小一致的条带。建立了PCR检测方法,经条件优化后,对鸡痘、禽痘、羊痘等14种相似病毒核酸进行PCR扩增,发现具有良好的特异性。PCR方法能扩增出0.3pg的阳性模板,显示建立的PCR方法具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于口岸猴痘病毒的检疫。

中华绒螯蟹体内氟甲喹的残留消除研究

采用超高效液相色谱—串联质谱法,研究了不同养殖条件下氟甲喹在中华绒螯蟹体内的残留消除规律。结果表明,休药15 d后各组中华绒螯蟹体内的氟甲喹残留量均低于我国现行限量标准150μg/kg,太湖开放型水域中试验蟹的残留低于仪器检测限。各组试验蟹体内的氟甲喹残留衰减消除速率总体表现为:在室外开放水域中的消除速率快于室内水体,Ⅴ期幼蟹的衰减消除速率快于扣蟹,28℃温度条件下的消除速率快于22℃。

猪圆环病毒多重PCR检测方法的建立

设计合成 2对PCV型特异性引物 ,其中C1、C2扩增PCV1和PCV2共有的 938bp特异性片段 ,C3、C4只扩增PCV2特异性的 4 90bp片段。在对该多重PCR的反应条件进行优化后 ,建立了猪圆环病毒多重PCR诊断方法 ,既可对PCV进行定性检测 ,又可对PCV1和PCV2进行定型 ,便于口岸检疫和养殖场的临床诊断。