四种木本植物叶芽不同生长期SOD的检测研究

对枫藤等四种木本植物叶芽不同生长期的SOD使用连苯三酚自氧化法进行了检测,以确定SOD含量较高的植物材料及其所在生长阶段,并研究了Mg2+及Ca2+对雪松SOD活力的影响。实验表明,枫藤叶芽在开始取样后第9天SOD活力达到最大值,为159.24μ.g-1;辽东冷杉与雪松在第一次取样时SOD活力达到最大值,分别为83.57和190.71 u.g-1;Mg2+、Ca2+加入均在0.1 mL(4 mg.mL-1)时,对雪松SOD活力的增强作用达到最大,分别为148%,138%。

由乙肝病毒核心蛋白(HBc-VLP)递载的流感通用疫苗Flu@uV设计构建、表征及初步活性研究

目的:构建以HBc为载体的甲型流感病毒HA和M2e流感通用疫苗(Flu@u V),利用大肠杆菌BL21(DE3)表达系统,进行初步的蛋白表达及纯化。在此基础上,构建DNA流感通用疫苗。方法:利用全基因合成的序列为模板,成功构建HA-M2e-HBc、M2e-HBc、HBc、3M2e-HBc和3HA-3M2e-HBc基因的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE、Western blot和电镜检测其表达。将纯化的蛋白与弗氏佐剂共同免疫小鼠,取小鼠外周血进行流式细胞分析。通过荧光分析和Western blot初步验证DNA流感通用疫苗在人源胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达情况。结果:成功表达纯化了HA-M2e-HBc、M2e-HBc、HBc和3M2e-HBc四种蛋白,经电镜观察到30nm左右的蛋白纳米颗粒样结构。小鼠外周血流式细胞分析显示HBc和3M2e-HBc可以增加小鼠的免疫力,而HA-M2e-HBc和M2e-HBc对小鼠免疫力的提高没有影响。通过荧光检测和Western blot检测说明DNA流感通用疫苗在真核细胞中成功表达。结论:成功构建HBc与甲型流感病毒HA和M2e的病毒样颗粒,为流感通用疫苗的研制奠定了重要基础。

重组蛋白中G418残留量超高效液相色谱-蒸发光散射检测方法的建立

目的建立定量检测重组蛋白中G418残留量的超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)-蒸发光散射检测(evaporative light scattering detection,ELSD)法,并进行验证。方法G418经UPLC洗脱后,通过蒸发光散射检测器检测,首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,余下不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中进行检测,通过标准曲线计算质控品中G418浓度。对建立的方法进行专属性、重复性、中间精密度、定量限、耐用性、线性验证。结果G418浓度在0.01~0.20 mg/mL范围内,标准曲线的线性较好,R2>0.99,定量限为0.01 mg/mL;质控品的加样回收率在80%~120%之间;中间精密度试验回收率的RSD为3.44%;定量限试验回收率的RSD为5.38%;耐用性试验回收率的RSD为4.56%。结论UPLC-ELSD法精密度良好,可用于重组蛋白研发及生产过程中G418残留的监测。

荧光定量PCR检测HBV-DNA与乙肝两对半检测结果的相关性探讨

分析荧光定量PCR检测HBV-DNA与乙肝两对半检测结果的相关性,为乙肝诊断研究提供依据。方法:研究时间:2019年8月到2020年12月,研究对象为240例疑似乙肝患者,均实施荧光定量PCR检测HBV-DNA(A方法)与乙肝两对半检测(B方法),分析两组方法检测结果与相关性。结果:240例疑似乙肝患者HBV-DNA阳性检出率为70.83%(170/240),HBV-DNA阴性检出率29.17%,HBsAg、HBeAg、HBcAb均为阳性者HBV-DNA水平最高,其阳性检出率最高,HbsAb(+)、HbeAb(+)、HbcAb(+)者对应的HBV-DNA水平最低。结论:荧光定量PCR检测HBV-DNA与乙肝两对半检测结果相关性较好,从实际应用角度分析,建议采取荧光定量PCR检测HBV-DNA联合乙肝两对半检测方法,提高诊断可靠性。