楮实子多糖提取工艺及抗皮肤光老化能力研究

目的优化楮实子多糖提取工艺,考察其抗皮肤光老化能力。方法以多糖得率为指标,采用水提醇沉法提取楮实子多糖,在单因素基础上利用L9(34)正交试验优选楮实子多糖的提取工艺。通过人皮肤成纤维细胞建立的光老化模型考察楮实子多糖抗光老化作用。结果最终确定的最佳提取工艺条件为:提取温度80℃,提取次数2次,料液比为1∶20(g∶mL)。楮实子多糖能够显著增加超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平,降低丙二醛(MDA)水平。结论楮实子多糖的提取工艺合理可行,楮实子多糖有抗UVB致皮肤成纤维细胞氧化损伤作用,可为其深入研究提供参考。

基于网络药理学的生脉注射液作用机制研究

目的基于网络药理学技术探索生脉注射液的体内药效物质基础和作用机制。方法通过数据库及文献检索方法获取生脉注射液的有效成分,通过BATMAN-TCM构建的分子对接技术预测生脉注射液有效成分的体内作用靶标及相关通路,基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)的通路富集分析功能,阐述生脉注射液的多成分-多通路作用机制。结果通过上述方法共计发现295个有效成分,直接或间接涉及体内4 891个靶标,552种相关疾病。关键成分是锦葵酸、腺苷、蝙蝠葛碱、维生素B12、十四醇、腺苷三磷酸肌醇。关键靶标是亚当金属肽酶结构域8、AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1、ATP结合盒亚家族成员1、花生四烯酸15脂肪氧化酶、腺苷A1受体、缓激肽受体B2、一氧化氮合酶3、乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶。关键疾病是炎症反应、乳腺癌、心血管疾病、前列腺癌、哮喘、脓毒症、动脉粥样硬化、帕金森病、阿尔茨海默病、精神分裂症。涉及通路是糖酵解/糖异生、柠檬酸循环、磷酸戊糖途径、戊糖和葡糖醛酸盐相互转化、果糖与甘露糖代谢、半乳糖代谢、抗坏血酸与醛酸代谢、脂肪酸生物合成、脂肪酸伸长、脂肪酸降解。结论生脉注射液主要通过多成分协同起效的机制起到抗炎、抗乳腺癌等疾病的作用。本研究结果初步验证了生脉注射液治疗疾病的有效成分和作用机制,为进一步深入揭示相关疾病的有效治疗方法开发奠定基础。

骨碎补总黄酮对亚硝酸钠模型小鼠学习记忆能力的改善作用

目的:研究骨碎补总黄酮对亚硝酸钠模型小鼠学习记忆障碍的改善作用。方法:昆明雄性小鼠随机分为空白组、亚硝酸钠模型组100 mg/(kg·d)、抗脑衰胶囊组585 mg/(kg·d)、骨碎补总黄酮97.5 mg/(kg·d)、骨碎补总黄酮组+ER阻断剂组97.5 mg/(kg·d)+0.072 mg/(kg·d)。观察小鼠的学习记忆能力,HE染色观察海马病理形态;Western blot法观察海马区淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、淀粉样前体蛋白β-分泌酶(amyloid precursor proteinβ-secretory enzyme,BACE1)、过度磷酸化tau蛋白(over-phosphorylated tau protein,P-Tau^(396))和细胞周期素依赖蛋白激酶5(cyclin-dependent protein kinase 5,CDK5)蛋白含量。结果:模型组学习行为能力降低,海马区颗粒细胞明显坏死,海马区APP、BACE1、P-Tau^(396)和CDK5表达水平升高(P<0.01)。骨碎补总黄酮能够改善模型小鼠的行为学表现,降低APP、BACE1、P-Tau^(396)和CDK5的表达(P<0.01)。ER阻断剂能够反转骨碎补总黄酮在以上指标蛋白中的作用。结论:骨碎补总黄酮对亚硝酸钠模型小鼠学习记忆能力具有改善作用,此效应与调节APP代谢途径相关蛋白的影响相关。

西瓜PME基因生物信息学分析及克隆

研究从拟南芥(Arabidopsis thaliana)4个果胶甲酯酶基因和2个来自东北农业大学西甜瓜分子育种课题组西瓜转录组数据分析的果胶甲酯酶基因入手,通过BLAST比对方法在葫芦科数据库中鉴定甜瓜(Cucumis melo L.)、西瓜(Citrullus lanatus)果胶甲酯酶同源基因,预测分析其生物信息学。结果表明,各级结构及理化性质与拟南芥果胶甲酯酶基因较为相似,并对其构建系统进化树,建树结果表明,葫芦科各物种间果胶甲酯酶基因家族同源性较高。此外,利用同源克隆方法获得Cla012554基因全长并分析该基因时空表达量,测序结果显示,克隆的Cla012554基因序列与比对序列间总体相似度为95.62%。实时荧光定量PCR分析表明,Cla012554基因在西瓜根、茎、叶和果肉中均表达,其中,茎表达量最高,根表达量最低。同时,Cla012554基因还可能参与西瓜果肉成熟软化。研究为进一步探究葫芦科作物PME基因功能提供重要参考。

骨碎补总黄酮调控ER-p38 MAPK信号通路改善东莨菪碱模型小鼠学习记忆功能障碍机制研究

研究骨碎补总黄酮对东莨菪碱模型小鼠学习记忆障碍的改善作用及机制。该研究将90只4月龄昆明(KM)小鼠随机分成6组,模型组与空白组灌胃生理盐水,给药组分别灌胃骨碎补总黄酮、抗脑衰胶囊、盐酸多奈哌齐以及骨碎补总黄酮加雌激素受体(ER)阻断剂,采用腹腔注射东莨菪碱的方法建立学习记忆功能障碍模型。水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,免疫组织化学法检测小鼠海马内雌激素受体β(ERβ)表达,Western blot法检测海马中ERβ、磷酸化p38(p-p38)的表达和凋亡系统中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联死亡启动子(Bad)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的蛋白含量,试剂盒检测海马中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)蛋白含量。结果显示,与空白组比较,模型组潜伏期显著延长,穿越平台次数及靶象限停留时间显著降低,小鼠海马区中ERβ、Bcl-2含量及SOD酶活性显著减少,p-p38/p38、Bad、caspase-3、MDA及NO含量显著增加。与模型组比较,骨碎补总黄酮组可增加海马ERβ和SOD的表达,神经元促进凋亡蛋白表达显著减少、抑制凋亡蛋白表达增加,降低p-p38/p38、MDA及NO表达。ER阻断剂组可逆转骨碎补总黄酮在上述指标中的作用。说明骨碎补总黄酮能够明显改善东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍,其机制可能是通过雌激素受体-p38丝裂原激活的蛋白激酶(ERp38 MAPK)信号通路调节东莨菪碱模型小鼠的神经凋亡系统和氧化应激来实现的。

ClaMADS12基因克隆及在西瓜果实发育中的表达特性分析

本研究从西瓜果实发育转录组数据中,筛选出ClaMADS12基因,并对其进行基因克隆、生物信息学以及初步表达分析。生物信息学分析显示该基因的开放阅读框为3 374 bp,编码区全长621 bp,共编码206个氨基酸。结构域分析显示,该基因含有一个典型的“MADS-box”保守结构域,位于从N端第1到75个氨基酸,属于MADS-box家族。对其蛋白质的理化性质分析显示,ClaMADS12蛋白以异亮氨酸为主,无信号肽和跨膜结构域,属于不稳定型、亲水蛋白,亚细胞定位预测该蛋白位于细胞核。对该基因进行同源性比对及系统进化树分析显示,冬瓜MADS-box 12基因与ClaMADS12亲缘关系最近,同源性高达95.61%。RT-PCR分析表明,ClaMADS12在西瓜果实发育中,相对表达量与果肉质地的软化呈正相关。本研究为进一步明确ClaMADS12基因在西瓜果实发育中的功能提供依据。