牛蒡子苷元对四氯化碳致大鼠肝纤维化的治疗作用

目的研究牛蒡子苷元(ATG)对四氯化碳(CCl_4)诱导的大鼠肝纤维化的防治作用及可能的作用机制。方法成年Sprague-Dawley大鼠随机分为溶剂对照组、ATG 3.0 mg·kg^(-1)、CCl_4模型组、CCl_4+ATG1.0和3.0 mg·kg^(-1)组和CCl_4+秋水仙碱(COL)0.1mg·kg^(-1)阳性对照组,采用sc的方法复制大鼠CCl_4肝纤维化模型,造模8周。从第5周开始,ig给予ATG和COL,连续治疗4周。测定各组大鼠血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)的活性以及白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)的水平,肝组织中羟脯氨酸(HYP)的含量;HE和Masson染色观察肝组织病理改变,并采用组织免疫荧光法检测活化的肝星状细胞增殖,Western蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白的表达。结果与CCl_4模型组比较,ATG1.0和3.0 mg·kg^(-1)可显著升高纤维化大鼠血清中ALB含量(P<0.05),降低血清中GPT,AST和TBIL水平(P<0.05),从而降低肝损伤的程度;ATG1.0和3.0 mg·kg^(-1)还能显著降低纤维化大鼠肝组织中HYP的含量(P<0.05),减少肝内纤维组织的形成。同时,ATG1.0和3.0 mg·kg^(-1)还能抑制纤维化大鼠肝组织中活化的HSC增殖,显著降低细胞周期相关调控蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)2和4及增殖细胞核抗原的表达(P<0.05),同时上调细胞周期阻抑物蛋白p27^(kip1)的表达水平(P<0.05)。结论 ATG对CCl_4诱导的大鼠肝损伤和肝纤维化具有显著的治疗作用,其作用机制可能与抑制活化的HSC增殖相关。

青蒿琥酯通过PI3K/Akt/mTOR信号通路改善DDC诱导的胆汁淤积性肝纤维化

目的探究青蒿琥酯(artesunate,ART)对3,5-二乙氧羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲吡啶(3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydro-2,4,6-collidine,DDC)诱导的胆汁淤积性肝纤维化的作用及分子机制。方法将24只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为3组:对照组(n=6)、0.1%DDC组(n=9)和0.1%DDC+ART组(n=9)。喂养含0.1%DDC的饲料2周,构建胆汁淤积小鼠模型,同时给予0.1%DDC+ART组小鼠青蒿琥酯(30.0 mg/kg,1次/d)肌肉注射。检测小鼠血清中肝损伤相关指标的水平;进行HE染色和天狼星红染色,根据Scheuer系统进行肝组织病理学评分。采用实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏内α-SMA、Col1a1、Col1a2和Tgfβ1等表达水平,同时检测小鼠肝组织内羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量。在细胞实验中进一步探索青蒿琥酯减轻肝纤维化的机制,使用TGF-β联合ART处理LX2细胞,采用Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。使用ART和通路抑制剂共同处理LX2细胞后,检测肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化标志物α-SMA的表达。结果青蒿琥酯给药明显减轻DDC诱导的胆汁淤积性肝损伤和肝纤维化(P<0.05),显著降低了胆汁淤积小鼠血清中ALT、AST、ALP和TBA的表达水平(P<0.05)。青蒿琥酯抑制小鼠肝脏内纤维化相关指标α-SMA、Col1a1、Col1a2和Tgfβ1 mRNA的表达,并减少肝组织内HYP含量(P<0.05)。青蒿琥酯可以抑制TGF-β诱导的LX2细胞内PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活(P<0.05)。PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂增强青蒿琥酯对TGF-β诱导的HSC活化的抑制作用(P<0.05)。结论青蒿琥酯能够明显改善DDC诱导的胆汁淤积性肝纤维化,它可通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制HSC的活化,从而发挥其抗纤维化的作用。

基于转录组测序对胆汁酸诱导肝细胞反应的Hub基因的筛选及验证

目的通过转录组测序分析结合型胆汁酸诱导肝细胞的基因表达情况,筛选和验证结合型胆汁酸诱导肝细胞代谢的Hub基因。方法使用牛磺胆酸(taurocholate acid,TCA)处理野生型小鼠的原代肝细胞,转录组测序(RNA sequencing,RNA-Seq)检测经TCA诱导后肝细胞的基因表达情况,将Fold Change≥1.5且P<0.05作为筛选标准获取差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)并进行生物信息学分析。使用STRING(search tool for the retrieval of interesting genes)数据库建立DEGs的蛋白质-蛋白质互作网络(protein-protein interaction,PPI),基于PPI网络利用Cytoscape软件找寻Hub基因。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)在体内外水平对目标Hub基因进行验证,使用蛋白质免疫印迹试验检测肝细胞内PSAT1/AKT/GSK3β信号通路相关蛋白的表达,使用糖原检测试剂盒检测肝细胞和肝组织糖原水平。结果TCA处理小鼠原代肝细胞共有差异基因293个,其中上调基因122个,下调基因171个。基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析、京都基因与基因百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析及基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)的结果显示,DEGs主要富集在代谢、炎症、肿瘤等通路。使用Cytohubba插件得到16个Hub基因,包括Ccnd1、Ppara、Irs1、Ccl2、Ddit3、Serpine1、Nr0b2、Atf3、Phgdh、Trib3、Lepr、G6pc、Psat1、Cxcl2、Asns、Fgf21。RT-qPCR检测结果显示,多种结合型胆汁酸包括TCA、甘氨鹅去氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid,GCDCA)、甘氨胆酸(glycocholic acid hydrate,GCA)均能诱导小鼠原代肝细胞内Psat1 mRNA表达水平增高(P<0.05)。此外,胆管结扎(bile duct ligation,BDL)胆汁淤积小鼠肝脏中的Psat1 mRNA水平增高(P<0.05)。Western blot检测结果显示,TCA能够诱导肝细胞内Psat1表达及激活AKT/GSK3β信号通路。TCA能够诱导小鼠原代肝细胞糖原合成增加,与BDL小鼠模型肝组织糖原合成增加以及血糖水平降低的结果一致(P<0.05)。结论Psat1可能是胆汁酸影响肝细胞糖代谢的相关基因,其高水平表达可能与肝细胞糖代谢的改变有关。

加强企业制度建设 推动企业文化发展

企业制度建设是推动企业文化建设的有效手段。企业制度的建设要从企业的根本性需求出发,并且与企业最本质的目标相联系;企业制度要契合企业经营管理理念并体现企业理念;建设企业制度要满足规范性要求;企业制度建设要不断完善和提高;企业制度建设必须有各级管理者的参与;企业制度建设要靠严格的执行来保证。论文阐述了从制度方面建设企业文化的原则,对于建设优秀的企业文化有借鉴作用。

褪黑素通过JNK/c-Jun信号通路抑制胆汁酸诱导Cxcl2表达的机制研究

目的 研究褪黑素抑制胆汁酸诱导趋化因子Cxcl2表达的分子调控机制。方法 喂养小鼠含有1%胆酸(cholic acid, CA)的饲料2周,构建胆汁淤积小鼠模型,给予褪黑素腹腔注射(100 mg/kg, 1次/d)。收集肝组织后HE染色,根据Scheuer系统进行病理组织学评分。采用Real-time qPCR及Western blot方法检测褪黑素对小鼠肝脏内Cxcl2、Cxcr2、Mpo、c-Jun表达的影响。使用免疫组化方法检测小鼠肝脏内c-Jun的表达。分离并培养小鼠原代肝细胞,使用结合型胆汁酸TCA联合褪黑素处理小鼠原代肝细胞,在体外水平进一步探索褪黑素抑制胆汁酸诱导的Cxcl2表达的机制。使用JNK激动剂Anisomycin和褪黑素共同处理小鼠原代肝细胞,检测趋化因子Cxcl2表达。结果 褪黑素给药明显减轻胆汁淤积诱导的炎症性肝损伤(P<0.05)。褪黑素明显抑制胆汁淤积小鼠肝脏内趋化因子Cxcl2及其受体Cxcr2表达,并抑制肝脏内中性粒细胞标志物Mpo和转录因子c-Jun的表达(P<0.05)。褪黑素显著减少TCA诱导的小鼠原代肝细胞内趋化因子Cxcl2的表达(P<0.05)。JNK激动剂Anisomycin逆转褪黑素对Cxcl2的抑制作用(P<0.05)。结论 褪黑素通过抑制JNK/c-Jun信号通路来降低胆汁酸诱导的趋化因子Cxcl2表达。

SLCO1B1在肝细胞癌中的表达及其对患者预后的影响

目的 研究SLCO1B1在肝细胞癌组织中的表达变化及其与免疫细胞浸润程度的关系,分析其对肝癌患者预后的影响。方法 通过TIMER2.0数据库分析SLCO1B1在肝细胞癌及癌旁组织中的表达差异,利用TIMER数据库分析肝细胞癌中SLCO1B1的表达与免疫细胞浸润的关系,并评估肿瘤浸润性免疫细胞对肝细胞癌预后的预测价值;利用Kaplan-Meier plotter数据库进行肝细胞癌生存曲线分析,分析在不同的临床病理条件下SLCO1B1的表达水平与肝细胞癌患者临床预后的相关性;使用TISIDB数据库检测肝细胞癌中SLCO1B1基因表达与28种淋巴细胞浸润的相关性;通过GEPIA数据库分析SLCO1B1和免疫细胞标记基因的相关性。结果 SLCO1B1在肝细胞癌的表达水平低于癌旁组织(P<0.05);SLCO1B1高表达患者的总生存期(OS)、无复发生存期(RFS)、无进展生存期(PFS)、疾病特异性生存期(DSS)均高于低表达患者(P<0.05),且SLCO1B1的表达在肝细胞癌患者的某些临床特征(如男性、亚洲人、饮酒、未感染肝炎病毒等)中具有预后意义;SLCO1B1表达水平与B细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞等免疫细胞在肝细胞癌组织中的浸润水平呈负相关(P<0.05)。结论 肝细胞癌组织中的SLCO1B1表达降低,其是一种与免疫浸润相关的肝细胞癌预后生物标志物,并可能作为肝癌新的治疗靶点。