奶牛子宫内膜基质细胞原代培养方法的改进与细胞鉴定

为了优化奶牛子宫内膜基质细胞的分离培养方法,以提高奶牛子宫内膜基质细胞的培养效率和细胞纯度,试验采用常规胰蛋白酶和胶原酶交替消化过筛法分离细胞,在样本选择、消化酶配方和筛网孔径方面进行了优化改进并传代纯化,通过细胞形态学观察、细胞生长曲线、免疫组化鉴定进行细胞鉴别。结果表明:处于发情期的子宫样本采用0.25%胰蛋白酶和0.25%Ⅱ型胶原酶及0.15 g/L DNaseⅠ的次序消化,经大孔径筛网过筛后获得基质细胞,纯度较高,且细胞活力更好;采用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA传代消化可缩短传代时间;基质细胞贴壁后呈长梭形和多角形两种形态;经免疫组化鉴定该细胞具有波形蛋白免疫反应性,与子宫内膜切片中波形蛋白组织化学结果一致,表明其为来源于内膜基质层的基质细胞。奶牛子宫内膜基质细胞生长曲线呈'S'型,符合细胞生长的规律。说明优化培养方法后可更便捷、高效地分离培养较高纯度的奶牛子宫内膜基质细胞。

孕酮对脂多糖损伤的山羊子宫内膜基质细胞修复机制的影响

为研究山羊子宫内膜基质细胞(GESC)发生炎性损伤时,孕酮对其修复机制的影响,本研究采用1μg/mL脂多糖(LPS)和不同浓度的孕酮(1、3和5 ng/mL)共处理细胞,利用荧光定量PCR技术检测修复相关因子CCN2、TGFB1、GJA1和孕酮受体(PGR)的基因表达,Western-blot技术检测PI3K/AKT通路关键蛋白表达。结果显示,LPS能够抑制CCN2的基因表达,促进TGFB1、GJA1和PGR的基因表达及PI3K/AKT通路的活化(P<0.05);孕酮能进一步抑制LPS影响下CCN2、TGFB1、GJA1和PGR的表达以及PI3K/AKT通路关键蛋白的磷酸化(P<0.05)。孕酮单独作用于GESC细胞时,可诱导CCN2、TGFB1、GJA1和PGR基因表达,促进PI3K和AKT的磷酸化(P<0.05)。结果表明,孕酮通过抑制PI3K/AKT通路和CCN2、TGFB1、GJA1和PGR的基因表达,调控GESC细胞炎性损伤修复。