法医学“一联合、两突出、三结合、四位一体”创新人才培养模式探索和实践

人才是全面建设社会主义现代化国家的基础性、战略性支撑之一。20世纪80年代以来,法医学专业的创建和法医学创新型人才的培养成为我国高等法医学专业教育的热点问题。43年来,山西医科大学法医学团队坚持公安-院校联合办学,协同创新,形成了“一联合、两突出、三结合、四位一体”的法医学创新人才培养模式,进行“5+3/X”一体化改革,在教学、科研、鉴定、专业、学科、团队、平台和文化建设等方面形成了一套较为完整的人才培养创新模式和管理体系,为中国高等法医学专业教育作出历史性贡献,为法医学一流专业和法医学一级学科的建设积累了宝贵经验,为国家新型法医学人才培养体系的构建提供了有力支撑。该培养模式的推广有利于法医学科的快速可持续发展,为国家建设、区域社会发展及法医学事业建设输送更多优秀法医学人才。

新Y-STR DYS605在山西汉族人群中的多态性分布

为了应用更多的Y染色体特异性STR基因座以用于法医学和人类遗传学研究,用PCR结合PAGE技术检测128例山西汉族无关男性DYS605等位基因分布状况。结果显示:山西地区汉族男性DYS605基因座观察到22,21,20,19,18共5个等位基因,基因频率分别为0.0156.0.1797;0.4531;0.2891;0.0625。等位基因20和19之间的电泳距离在非变性胶上非常接近,要有足够的电泳距离才能区分。测序表明该基因座包括3个串联重复区,其中一个为可变重复区。20例女性DNA未发现扩增产物。

心肌缺血早期表达蛋白的质谱研究

目的用SELDI-TOFMS观察大鼠急性心肌缺血后心肌蛋白质谱的变化规律,筛选心肌缺血的蛋白标记物,为法医学心源性猝死的诊断提供依据。方法SD大鼠分成手术组,假手术组和非手术对照组。在结扎大鼠冠脉前降支后5min～6h内不同的时间段取大鼠心肌组织。蛋白提取后用CM10芯片结合SELDI-TOFMS质谱仪检测。结果血清CM10芯片检测到3个缺血后蛋白峰,质荷比(m/z)分别为6304Da、8337Da、8375Da,在手术组中阳性率和特异性均为100%,假手术组和非手术组中均没有发现。特异性升高的峰有3个:峰6658Da、6876Da,都是在实验组中≥15min以后升高2倍以上,8577Da峰则在缺血≥5min组升高。结论大鼠心肌组织中6304Da、8337Da、8375Da蛋白峰都是急性心肌缺血后的较为特异性改变,可在心肌缺血后5min内出现,有可能做为心肌缺血的蛋白标记,亦可能用于心肌缺血和法医学心源性猝死的诊断。

STR多态性在骨髓移植监测中的初步研究

目的 建立常染色体STR位点检测骨髓移植后嵌合状态的PCR检测方法 ,为白血病患者骨髓移植疗效观测提供可靠方法。方法 Chelex 10 0法提取 16例白血病患者移植前和移植后 14d～ 10个月外周血DNA ,PCR扩增 8个STR位点 ,PAGE电泳 ,银染分析其多态性。结果 ① 16对供患者在 8个STR检验中有 2～ 6个位点多态性不一致 ,可满足临床检验的需要。②本法早于临床复发 2 0d发现 2例嵌合状态的变化 ,表现为患者原有成分增多。③发现 1例新等位基因形成。结论①PCR STR分析是骨髓移植后供者是否植入的精确标志 ,有提前预警作用。

鼠窒息后缺氧诱导因子1-α在心、肺中的表达

目的研究大鼠机械性窒息死亡后缺氧诱导因子1-α(HIF1-α)在心、肺中的表达变化,探讨其作为窒息死亡诊断指标的可行性。方法制作大鼠缢死模型,分别于窒息死后及正常断颈处死后0、2、6、24h时间段取材,用免疫组织化学、RT-PCR方法测定缢死后HIF1-α在心肌和肺组织中的分布和表达变化。结果HIF1-α在窒息组的心肌和肺组织中表达,窒息组和对照组在各时间段表现出明显差异,对照组仅在死后2、6、24h阳性表达。窒息死亡组可见核阳性表达,而对照组未见核阳性表达。半定量RT-PCR结果显示HIF1-α在0h时各组未见升高,但在2、6、24h窒息组则较对照组升高。结论心和肺组织HIF1-α表达核阳性细胞的出现,可以作为窒息死亡的特征性表现。

血浆中组织蛋白酶L在大鼠急性心肌缺血及缺血再灌注后的表达

目的检验大鼠心肌缺血及缺血再灌注后组织蛋白酶L在血浆中的表达,探讨其能否作为心肌缺血标记物。方法建立大鼠急性心肌缺血模型(心肌缺血30min、1h、2h组)、缺血再灌注模型(缺血再灌注组)以及异氟烷预处理后的缺血再灌注模型(异氟烷预处理组)。同时设有正常对照组、假手术组以作对照。用ELISA法检验血浆中组织蛋白酶L的含量,同时用TTC染色测量心肌梗死面积。结果大鼠急性心肌缺血后,各组血浆中的组织蛋白酶L含量与正常对照组、假手术组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。缺血再灌注组,血浆中组织蛋白酶L的表达增多到正常对照组2.37倍(P<0.05)。异氟烷预处理组血浆组织蛋白酶L和心肌梗死面积都较缺血再灌注组降低(P<0.05)。结论血浆中组织蛋白酶L不适合作为单纯急性心肌缺血的早期血浆标记物,异氟烷预处理可以降低缺血再灌注造成的血浆组织蛋白酶L高表达。

短串联重复序列VWA在太原汉族人群的法医应用研究

目的 获得短串联重复序列 VWA(nt16 40 - 1794)在太原汉族人群的群体遗传学数据 ,探讨其在法医学中的应用。方法 用 TKM法对 2 14名太原地区无关汉族人群抽提血液 DNA。扩增特异性片段 ,含 7m ol/ L 尿素的聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳 ,银染显色分析其多态性。结果 该位点频率分布符合 H- W平衡定律。共检出 8个等位基因 ,长度在 134 - 16 2 bp之间 ,频率分布 ,VWA* 13- 0 .0 0 7;VWA* 14- 0 .194;VWA* 15 - 0 .0 2 8;VWA* 16 -0 .173;VWA * 17- 0 .2 78;VWA * 18- 0 .140 ;VWA * 19- 0 .10 3;VWA * 2 0 - 0 .0 14。个体识别率 :0 .932 ,杂合度0 .82 1,多态信息含量 0 .814,非父排除率 0 .6 0 3。本文调查的频率同大部分欧洲人及美国黑人分布差异有显著性。同其他中国人差异无显著性。结论 VWA基因座在太原汉族人群中有较高的杂合度、个体识别率及非父排除率 ,是高识别能力遗传标记 ,在法医学和群体遗传学有很高的应用价值。

两种窒息死亡方式下大鼠体内缺氧诱导因子1-α的变化规律

目的探讨氮气处理窒息死及缢死后大鼠心、肝、肺、肾中缺氧诱导因子1-α(HIF1-)α的表达变化规律及法医学意义。方法制作大鼠氮气处理窒息死及缢死两种窒息模型,记录其特征表现;应用免疫组织化学方法及图像分析技术测定大鼠窒息死后不同时间段HIF1-α在心肌、肺、肝、肾中的分布变化;结果HIF1-α表达于两种窒息模型的心肌细胞、肝细胞、肾小管细胞以及肺部各种细胞,各时间段的窒息组和对照组HIF1-α的表达有明显区别;氮气处理窒息死组四种组织在死亡后0、6和24h表达有减弱趋势,0h有核阳性表达,呼吸及心跳停止时间比缢死组短,各组织表达阳性率比缢死组稍弱;缢死组在除心肌表达逐渐增强外其他组织表达在6h出现一个表达高峰(此时核阳性表达最多),后表达逐渐减弱;对照组表达平稳,均未见到核阳性。结论在死亡后24h内检测组织中HIF1-α的表达可以作为推断窒息死的一个生物学指标。

中国西南地区汉族人群肿瘤坏死因子基因多态性与鼻咽癌遗传易感性

目的:分析肿瘤坏死因子基因多态性分布与中国西南地区汉族人群鼻咽癌易感性的关系。方法:选择2000-10/2005-09在华西医科大学第一附属医院就诊的100例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,均经过病理科活检确诊,其中包括未治疗44例,放疗后37例,放疗加化疗后19例,选择100名同期入院健康体检者为对照组。所有受试对象为中国西南地区汉族人,均对检测项目知情同意。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性的方法检测100例中国西南地区汉族鼻咽癌患者和100名健康对照者肿瘤坏死因子α基因启动子区-308位点及肿瘤坏死因子β基因第一内含子252位点的等位基因以及基因型频率,分析两位点多态性与鼻咽癌遗传易感性的关系。结果:鼻咽癌组患者肿瘤坏死因子β(+252)位点G/A杂合子基因型频率显著高于对照组(57%,29%,P<0.01),野生型(G/G基因型)频率低于健康对照组(23%,51%,P<0.01),等位基因A的频率高于健康对照组(48.5%,13%,P<0.01);肿瘤坏死因子α(-308)位点基因型以及等位基因频率与对照组相比较无统计学差异。结论:本实验人群中未发现肿瘤坏死因子α(-308)位点多态性与鼻咽癌易感性无关;肿瘤坏死因子β(+252)位点基因多态性与鼻咽癌具有相关性,A等位基因可能是鼻咽癌的遗传易感基因,G/A杂合子基因型个体较易患鼻咽癌。

缢死大鼠肝肾细胞内HIF-1α免疫组化染色观察

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在窒息死亡鉴定中的意义。方法制作大鼠缢死后0、2、6、24h的窒息死模型,以相应时间段断颈处死大鼠为对照,用免疫组织化学ABC法结合图像分析观测肝和肾组织中的HIF-1α表达情况,并对其结果进行统计分析。结果除0h段外,HIF-1α免疫组化阳性染色可见于窒息组和对照组的各时段大鼠,主要位于肝细胞、肾近曲小管和远曲小管上皮细胞。死后6h内的肝组织HIF-1α免疫组化染色显示窒息组与对照组差别明显(P<0.05),24h后则无明显差别(P>0.05)。肾脏窒息组与对照组差别明显(P<0.05)。结论观测HIF-1α在死后6h内肝脏或24h内肾脏中的表达状态,对机械性窒息的鉴定有一定的法医学意义。

几种miniprep提取质粒DNA方法的比较与改良

目的比较并建立一种简单的、稳定的质粒DNA提取改良方法,探讨其在分子生物学实验研究中的应用价值。方法采用琼脂糖凝胶电泳对质粒DNA提取的试剂盒法、煮沸法、碱裂解法、碱裂解结合酚氯仿法四种方法进行比较。结果试剂盒法的电泳谱带亮度最高且无RNA条带,煮沸法、碱裂解法、碱裂解结合酚氯仿法的电泳谱带亮度依次增高。结论试剂盒法制备DNA纯度最高,且操作简便省时。

中国汉族与泰国人群IL-2基因遗传多态性的研究

目的研究白细胞介素-2基因(IL-2)启动子区-330T/G和第一外显子+114G/T单核苷酸多态性(SNP)在中国成都地区汉族及泰国曼谷地区正常人群的分布。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测130例成都地区汉族人和105例曼谷地区泰国人IL-2基因-330、+114位点的多态性,并结合文献进行不同种族间的分析比较。结果在中国成都汉族人群中IL-2基因-330位点TT、TG和GG基因型频率分别为36.9%、53.9%和9.2%,在泰国人群中分别为40.9%、39.1%和20.0%;中国成都汉族人群IL-2基因+114位点GG、GT和TT基因型频率分别为20.8%、55.8%和23.3%,泰国人群分别为50.5%、39.0%和10.5%;两位点基因型分布频率在两群体中的差异具有统计学意义(P均<0.05)。与泰国、日本、西班牙等人群相比较,成都地区汉族正常人群除IL-2基因+114位点多态性与日本人群相近外(P>0.05),其-330、+114位点的基因型频率与其他国家人群的差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论IL-2基因-330、+114位点的SNP在不同种族间的分布存在明显的差异。这种差异可能是导致一些疾病在不同种族、不同地区间的发生、转归和预后不同的遗传因素之一。

新Y染色体DYS726在山西汉族人群中遗传多态性

目的对新的DYS726基因座的基因多态性和法医学意义进行研究。方法山西汉族人群盅随机筛选110名男性,提取静脉血DNA,用基因数据库(GDB)中的引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增,银染显色。对其筛选的等位基因测序,构建等位基因分型标准物;按照国际法医学会(ISFG)原则命名各等位基因。结果首次选择了Y染色体基因座DYS726,该基因座为4核苷酸简单重复STR。重复单位为CTTC。在110名山西汉族男性个体血样中共检出了4个等位基因。基因频率分别为11-0.0273;12-0.5455;13-0.1818;14-0.2455。基因多样性为0.6139,在法医学应用方面,其个人识别能力(DP)和非父排出率(PE)均为0.6139。结论新Y染色体基因座DYS726具有较高的遗传多态性,在法医学及人类遗传学方面具有较高应用价值。

546例亲子鉴定案件中基因突变的观察和分析

目的：在亲权鉴定案件中经常可以观察到突变,突变会直接影响到亲权指数（PI）的计算。这里我们观察分析15个STR基因座在山西汉族人群亲子鉴定案件中的突变特点和规律。方法：546例确认亲子关系案件来自于山西汉族人群,包括父-母-子三联体案件383例,二联体案件163例。用含15个STR基因座的Power Plex16 System kit试剂盒对上述案例进行分析。结果：在546例亲子鉴定案件中共有22例出现突变,Penta E,D5S818,D7S820,v WA,D21S11 5个位点均出现3例突变,突变率最高为0.32%;FGA,D8S1179 2个位点突变均为2例,突变率为0.22%;CSF1PO,D3S1358,D18S51 3个位点突变均为1例,突变率为0.11%;未观察到其余基因座的基因突变。22例突变全部为一步突变,其中来自父亲的突变10例,来自母亲7例,5例无法确定突变来源。22例突变中增加1个基序的10例,减少1个基序的10例,增加减少不明确的2例。结论：山西汉族人群常染色体STR的突变率在0%~0.32%之间,该数据为计算突变情况下的亲权指数提供了数据支持。

IL-4基因多态性与慢性粒细胞白血病的相关性研究

目的探讨IL-4基因启动子区域-590C/T基因多态性与慢性粒细胞白血病(CML)的相关性。方法采用PCR-SNP技术,检测30例CML患者组和40例正常对照组IL-4基因多态性。结果IL-4基因-590C/T基因型频率和C等位基因频率在两组人群中的分布差异有统计学意义(P<0.05,RR=4.33),C等位基因携带者患CML的风险是T等位基因的5.65倍(P<0.01,OR=5.65)。结论IL-4基因-590C/T基因型多态性与CML的发病具有相关性,其中C等位基因可能是CML发病的遗传易感性基因,携带C等位基因的个体可能通过降低IL-4的表达而增加CML的发病风险。

DYS712在山西汉族人群中遗传多态性分布

目的对DYS712基因座的基因多态性和法医学意义进行研究。方法山西汉族人群中随机筛选110例无关男性,抽取静脉血提取DNA,对其筛选的等位基因测序,构建等位基因分型标准物;按照ISFG(国际法医遗传学会)原则命名各等位基因。结果本研究首次选择了Y染色体基因座DYS712,为4核苷酸复杂重复STR。重复单位为:[AGAT]+[A-GAC]。在110例山西汉族无关男性个体血样中共检出了6个等位基因:20、21、22、23、24和25。基因频率分别为0.0273,0.1909,0.318 2,0.2636,0.1545,0.0455。基因多样性为0.7732,在法医学应用方面,其个人识别能力(DP)和非父排出率(PE)均为0.7732。结论新Y染色体基因座DYS712具有较高的遗传多态性,在法医学及人类遗传学方面具有较高应用价值。

山西汉族群体D2S441基因座的遗传多态性研究

目的研究短串联重复序列(STR)基因座D2S441在山西地区的遗传多态性,获得相应的群体遗传学数据,探究在法医学应用中的意义。方法在山西地区随机抽取120名无血缘关系汉族个体,提取静脉血DNA,应用聚合酶链反应(PCR)技术和聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(PAGE)分型。结果山西地区汉族群体D2S441基因座发现7个等位基因及11种基因型,其基因型分布符合Hardy-Weiberg平衡(P>0.05)。其个人识别能力(DP)和非父排除率(PE)为0.896和0.360,其重复序列为[TCTA]n。结论D2S441基因座在群体遗传学研究和法医学个人识别中有较高的应用价值。

D1S1676在山西汉族人群中的遗传多态性

目的:对基因座D1S1676的基因多态性和法医学意义进行研究。方法:山西汉族人群中随机筛选110例无关个体,提取静脉血,用GDB中的引物进行PCR扩增,银染显色。对其筛选的等位基因测序,构建等位基因分型标准物;按照ISFG原则命名各等位基因。结果:本研究首次选择了常染色体基因座D1S1676,该基因座为4核苷酸简单重复STR,重复单位为[GAAG]n。在110例山西汉族无关个体血样中共检出了6个等位基因。其个人识别能力(DP)和非父排除率(PE)为0.920和0.630,其基因型分布符合Hardy-Weiberg平衡(P>0.05)。结论:基因座D1S1676具有较高的遗传多态性,在法医学及人类遗传学方面具有较高应用价值。