一种高效的小鼠肺单细胞悬液制备方法的研究

目的:应用胶原酶Ⅴ酶消化法建立一种高效的小鼠肺单细胞悬液制备方法。方法:小鼠处死后取出肺脏,将其剪碎,应用胶原酶Ⅴ(175 U.ml-1)消化,37℃孵育1 h,随后进行细胞计数、活细胞百分率和流式细胞仪检测。结果:(1)光镜下见胶原酶Ⅴ消化所得小鼠肺细胞多种多样,大小不一,细胞形态完整,分散度好;(2)30 mg小鼠肺组织可提取细胞数量为(1～3)×106个,肺单细胞悬液中活细胞百分率均在95%以上;(3)流式细胞术检测可见大量的肺细胞。结论:应用胶原酶Ⅴ酶消化法制备小鼠肺单细胞悬液高效、简便,为肺细胞生物学及肺部疾病发病机制研究提供了有效的肺单细胞制备方法。

常规吸氧对急性心肌梗死患者预后影响的Meta分析

目的本研究对急性心肌梗死(AMI)患者氧疗的疗效进行系统回顾和荟萃分析。方法通过计算机检索和手工检索全面收集国内外关于常规氧疗治疗急性心肌梗死的随机对照研究(RCT)文献,评估指标为全因死亡率、复发性冠状动脉事件(缺血或心肌梗死)、心律失常、疼痛发生情况。按纳入与排除标准选择文献,评价纳入文献质量,提取资料,采用RevMan 5.3软件及Stata 15.1软件对数据进行Meta分析。结果纳入7项RCT,共7 611例AMI患者,其中常规氧疗组3 805例,对照组3 806例。Meta分析显示,与对照组相比,氧疗并不能降低AMI患者全因死亡的风险(RR,0.986;95%CI,0.81~1.20;P=0.253,I2%=25%)、复发性心肌缺血或心肌梗死风险(RR 1.241;95%CI,0.98-1.58;P = 0.236,I2 = 27.9%)、心律失常事件发生(RR, 0.982;95%CI,0.85-1.14;P=0.22,I2 =30%)及疼痛发生情况(RR, 1.009;95%CI,0.86~1.19;P =0.047,I2=62.2%)。结论此项荟萃分析证实在氧饱和度正常的急性心肌梗死患者中常规氧疗没有益处。

亚低温在急性ST段抬高型心肌梗死治疗中作用的荟萃分析

目的对亚低温治疗急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)的安全性和有效性做系统性回顾和荟萃分析。方法通过计算机检索和手工检索全面收集国内外关于亚低温治疗STEMI的随机对照研究(RCT)文献,按纳入与排除标准选择文献,评价纳入文献质量,提取资料,用RevMan 5.3软件对数据进行荟萃分析。评估安全性的指标为主要出血事件、室性心动过速/心室颤动、心动过缓。评估有效性的指标为主要不良心血管事件(MACE)、全因死亡率、梗死面积。结果按标准纳入11项RCT文献,共1180例诊断STEMI并接受直接经皮冠状动脉介入治疗的患者,其中597例被随机分配到低温治疗组,583例被分配到对照组。与对照组相比,亚低温治疗组的主要出血事件、室性心动过速/心室颤动、心动过缓及MACE、全因死亡率、梗死面积差异均无统计学意义(均为P>0.05)。此外,在亚组分析中,无论是在前壁心肌梗死还是非前壁心肌梗死患者中,亚低温治疗组和对照组的梗死面积差异均无统计学意义(均为P>0.05);无论患者的体温达标率≥80%还是<80%,亚低温治疗组和对照组的MACE、全因死亡率和梗死面积差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论此项荟萃分析证实,亚低温治疗在临床环境中是安全的,但并未改善STEMI患者的预后。

脾脏树突状细胞在全身性感染中的变化及治疗意义

背景 全身性感染是临床危重症患者死亡的主要原因之一,近年研究显示免疫功能紊乱与全身性感染发生发展密切相关,全身性感染病程中机体免疫功能紊乱与脾脏树突状细胞（dendritic cell,DC）的变化关系密切.目的 探讨脾脏DC在全身性感染中的变化及其意义,为改善全身性感染预后提供新思路.内容 在全身性感染病程中,脾脏DC大量丢失,细胞因子表达谱也发生明显改变,并与不良预后相关.增加DC数量可以改善预后.趋向 全身性感染病程中,脾脏DC数量和功能呈动态改变,并参与其发生发展,以脾脏DC为靶点调控其病程提供了新的防治前景.

氯沙坦抑制肺树突状细胞活化对小鼠急性肺损伤的保护效应

目的 探讨氯沙坦对急性肺损伤（ALI）肺炎症损伤程度和肺树突状细胞（DC）功能状态的影响及保护性效应及机制.方法 C57BL/6小鼠数字法随机分为：（1）对照组：气管内注射与脂多糖（LPS）等体积的磷酸盐缓冲液（PBS）,气管内注射PBS前30 min,予以腹腔内注射等体积PBS;（2） ALI组（ALI）：气管内注射LPS 2 mg/kg复制ALI模型,气管内注射LPS前30 min,予以腹腔内注射等体积PBS; （3） ALI＋氯沙坦组（Los）：气管内注射LPS 2 mg/kg前30 min,予以腹腔内注射氯沙坦15 mg/kg.注射LPS或PBS后6、24、48 h处死小鼠,留取肺组织待检.光镜观察肺组织病理改变,计算肺损伤评分,并测定肺湿重/体重比（LW/BW）.酶联免疫吸附法测定肺组织匀浆中白细胞介素（IL）-6浓度.流式细胞术（FCM）测定肺单细胞悬液中DC比例及CD80、MHCⅡ表达水平.结果 ALI组小鼠肺LW/BW明显高于对照组相应时间点肺LW/BW[（0.62 ±0.06）比（0.49±0.03）],P＜0.05.氯沙坦干预组LW/BW（0.55±0.03）较ALI组明显下降,但仍显著高于对照组水平（P＜0.05）.ALI组肺组织病理检查见肺泡间隔增宽、肺泡间质内血管充血、出血及大量炎细胞渗出,应用氯沙坦使ALI小鼠肺组织病理损伤明显减轻,肺损伤评分显著降低[（3.09±0.45）比（5.10±0.24）],P ＜0.05.ALI组肺IL-6明显高于对照组,应用氯沙坦组可使ALI小鼠肺组织IL-6水平明显下降,但仍明显高于对照组[（1 983 ±219）比（335±168）],P＜0.05.流式细胞术检测显示ALI组肺DC比例显著升高,表达CD80的肺DC明显增加,氯沙坦组小鼠表达CD80的肺DC较ALI组明显下降,但仍显著高于对照组水平;ALI组和氯沙坦组表达MHCⅡ的DC差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 氯沙坦对ALI具部分保护性效应,氯沙坦可能通过抑制肺DC成熟而对ALI具抗炎和免疫调节反应.

急性肺损伤小鼠树突状细胞I-Ab／I-E表达的研究

目的研究急性肺损伤（Au）小鼠外周血、肺组织和脾组织树突状细胞（pc）I-Ab／I-E的表达。方法24只小鼠分为2组，对照组小鼠气管内注射磷酸盐缓冲液30斗l，6h处死小鼠；ALl组：气管内注射脂多糖，分别于6h、12h、24h处死小鼠，留取2组小鼠外周血、肺组织和脾组织。光镜观察肺组织病理改变，进行肺损伤半定量评分。酶联免疫吸附法测肺组织匀浆中白细胞介素（IL）-6含量。流式细胞术测外周血、肺组织和脾组织单个核细胞悬液中DC表达I-Ab／I-E水平。结果对照组小鼠肺组织、脾组织Dc表达I-Ab／I-E水平高于外周血。ALI组6h、12h、24h肺组织[（824-14）％、（884-6）％、（904-10）％]、脾组织[（88±8）％、（894-4）％、（934-9）％]DC表达I．A。／I—E水平高于外周血[（34±17）％、（51±16）％、（50±17）％]；12h、24h外周血DC表达I-Ab／I-E水平显著高于对照组外周血；ALI组24h肺组织、脾组织DC表达I-Ab／I-E水平显著高于对照组肺组织、脾组织。Au组各时间点肺损伤半定量评分、肺组织匀浆中IL-6含量显著高于对照组（P〈0．05）。相关性分析：肺组织Dc表达I-Ab／I-E水平与肺组织匀浆中IL-6含量、肺损伤半定量评分呈正相关（P〈0．05）。结论ALI小鼠外周血、肺组织和脾组织DC表达I-Ab／I-E水平呈逐渐升高趋势，且I-Ab／I-E可能在ALI肺炎症损伤机制中起重要作用。

氯沙坦干预急性肺损伤小鼠肺Th1和Th17的作用

目的 探讨氯沙坦干预急性肺损伤（ALI）小鼠肺Th1和Th17的作用及机制.方法 小鼠随机分为：（1）对照组;（2） ALI组：气管内注射脂多糖2 mg/kg复制ALI模型;（3）氯沙坦干预组：气管内注射脂多糖2 mg/kg前30 min腹腔内注射氯沙坦15 mg/kg.分别于24 h、48 h处死小鼠,取肺组织.光镜观察肺组织病理改变,进行Smith肺损伤半定量评分,测肺湿重/体重（LW/BW）.实时定量PCR检测肺组织转录因子T细胞上的T盒（T-bet）、鸟嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶腺嘌呤序列结合蛋白3（GATA-3）、维甲酸相关孤独受体γt（RORγt）mRNA表达,ELISA测肺组织匀浆中IL-6、IFNγ IL-4和IL-17水平.结果 （1）与对照组比,ALI组小鼠肺LW/BW、Smith肺损伤半定量评分和肺组织匀浆中IL-6水平显著升高（P＜0.05）.与ALI组比,氯沙坦干预组肺LW/BW、Smith肺损伤半定量评分、肺组织匀浆中IL-6水平降低（P＜0.05）.（2）与对照组比,ALI组小鼠肺组织T-betmRNA （24h：2.4±0.4,48 h：6.8±0.7）、RORγt mRNA（24 h：1.7±0.4;48 h：2.9±0.8）表达增高（P＜0.05）,但各组GATA-3 mRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）.ALI组肺组织匀浆中IFγ水平[24 h：（745±90） pg/mg比（182 ±35） pg/mg,P＜0.05;48 h：（752±122） pg/mg比（177 ±61）pg/mg,P＜0.05]、IL-4水平[24 h：（206±37） pg/mg比（107±71） pg/mg,P＜0.05;48 h：（267±94）pg/mg比（94±53） pg/mg,P＜0.05]、IL-17水平高于对照组[24 h：（486±94） pg/mg比（122±30）pg/mg,P＜0.05;48 h：（518 ±124） pg/mg比（120±40） pg/mg,P＜0.05].（3）与ALI组比,氯沙坦干预组肺组织T-bet mRNA（24 h：1.8±0.4比2.4±0.4,P＜0.05;48 h：4.2±1.8比6.8±0.7,P＜0.05）、RORγt mRNA表达下调（24 h：1.3±0.2比1.7±0.4,P＜0.05;48 h：1.5±0.5比2.9±0.8,P＜0.05）;肺组织匀浆中IFNγ水平[24 h：（503±136） pg/mg比（745±90） pg/mg,P＜0.05;48 h：（553±134） pg/mg比（752±122） pg/mg,P＜0.05]、IL-17水平降低[24 h：（374±106） pg/mg比（486±94） pg/mg,P＜0.05;48 h：（260±98） pg/mg比（518±124） pg/mg,P＜0.05],但IL-4水平差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 ALI时,肺Th1及Th17型极化反应可能参与ALI病程中的免疫失衡.氯沙坦对ALI具有部分保护性效应,可能通过抑制Th1及Th17型极化反应而对ALI具有抗炎和免疫调节反应.

急性肺损伤小鼠外周血树突状细胞数量及功能状态的变化

目的探讨急性肺损伤（ALI）小鼠外周血树突状细胞（DC）数量及功能状态的变化。方法雄性SPF级C57BL／6小鼠36只，6～8周龄，体重18～22g，采用随机数字表法，将小鼠分为2组（n=18）：对照组（c组）和ALI组。Au组气管内注射脂多糖2mg／kg，以制备ALI模型，C组注入等容量的PBS。于注入LPS或PBS后6、12和24h（T1-T3）时随机取6只小鼠，麻醉后开胸取右心室血样，采用流式细胞仪检测外周血DC数量及DC表达CD80、MHCII的水平；随后处死小鼠，取肺组织，计算湿重／体重（WW／BW）比，光镜下观察病理学结果，行肺损伤评分，采用ELISA法检测肺组织IL-6含量。结果ALI组可见肺泡间隔增宽、充血、出血及大量炎性细胞浸润等病理改变。与C组比较，ALI组各时点肺组织WW／BW比、IL-6含量、肺损伤评分升高，T1时外周血DC数量减少，L时增多，T2、T3时DC表达MHCⅡ水平上调（P〈0．05）。与T1时比较，Au组T2时肺组织IL-6含量升高，T2、T3时外周血DC数量增多，DC表达MHCⅡ水平上调（P〈0．05）；与T2时比较，ALI组L时外周血DC数量增多（P〈0．05）；2组各时点外周血DC表达CD80水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ALI小鼠外周血DC数量早期减少，随后逐渐增多，功能呈渐成熟状态。

急性肺损伤小鼠脾脏树突状细胞动态变化研究

目的 研究脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）小鼠脾脏树突状细胞（DC）数量改变和成熟状态,探讨ALI小鼠脾DC变化规律.方法 C57BL/6小鼠36只,随机（随机数字法）分为2组.①对照组（Con）：小鼠气管内注射PBS 30 μL;②ALI组（ALI）：气管内注射脂多糖（LPS）2 mg/kg复制ALI模型.后又按注射LPS或PBS后6、12、24 h三个时间点各分成三组,每组6只小鼠.光镜观察肺组织病理改变,测定肺损伤评分,计算肺湿质量/体质量比（LW/BW）,酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织匀浆中白细胞介素-6（IL-6）的含量,以反映肺组织炎症损伤程度.流式细胞仪（FCM）检测脾单细胞悬液中DC比例及表达CD80、MHCⅡ水平.结果 ALI组小鼠6、12、24h时点的肺LW/BW均明显高于对照组（P＜0.05）.病理检测示ALI组小鼠肺泡间隔增宽、充血、出血及大量炎性细胞浸润等急性肺损伤病理改变.ALI组肺损伤评分及肺组织IL-6水平均显著高于对照组（P＜0.05）.FCM检测显示,与对照组相比,ALI组小鼠脾脏DC呈一过性升高,ALI组12 h时点脾脏DC升高至（1.92＆#177;0.25）％,显著高于对照组（P＜0.01）,24h时点降至基线水平（0.96＆#177;0.21）％.与对照组相比,ALI组脾脏DC表达CD80显著增加（P＜0.01）;与ALI组6h相比,ALI组12h和24 h脾脏DC表达CD80显著升高（P＜0.05）.ALI组与对照组及ALI组各时间点脾脏DC表达MHCⅡ的差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 ALI早期脾脏DC存在一过性升高,伴功能呈成熟状态,脾脏DC可能参与ALI炎症损伤的发生发展.