U73122和SQ22536对视网膜色素上皮细胞增生及分泌TGF-β_2的影响

目的观察磷脂酶C(PLC)抑制剂U73122和腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536对豚鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞增生及分泌转化生长因子-β2(TGF-β2)的影响。方法胰蛋白酶消化法培养原代豚鼠RPE细胞,角蛋白免疫组织化学染色鉴定为阳性后,传2代细胞用于实验。实验组加入含不同浓度U73122或SQ22536的培养液,设溶剂对照。24h后观察RPE细胞形态,噻唑蓝(MTT)法检测加入不同浓度U73122后RPE细胞的增生情况。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测1×10-5mol/LU73122及SQ22536作用2、4、6、8、16h后细胞培养液中TGF-β2的分泌量。结果培养的RPE细胞通过角蛋白染色后呈棕黄色阳性反应。MTT法检测显示,U73122实验组中除5×10-6mol/L浓度组外,其余各浓度组OD值与对照组比较均显著下降,且随着浓度的增加,OD值下降越明显(P<0.05);SQ22536各浓度组与对照组OD值相比差异均无统计学意义(F=1.316,P>0.05)。ELISA结果显示,加入1×10-5mol/LU73122后2h实验组TGF-β2的分泌量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),4、6、8、16h后,实验组较对照组及2h组均明显增加(P<0.05);而SQ22536组RPE细胞TGF-β2的分泌量在2、4、6、16h比较差异无统计学意义(P>0.05),8h时分泌量降低。结论 PLC抑制剂U73122能抑制RPE细胞的增生,并可使RPE细胞分泌TGF-β2增加。AC抑制剂SQ22536对RPE细胞的生长和TGF-β2的分泌无明显影响。提示RPE细胞分泌TGF-β2的调控可能与PLC信号转导途径有关。

先天性近视豚鼠眼球生物学参数及巩膜病理改变

目的通过检测先天性近视豚鼠眼的屈光度、眼轴和巩膜病理改变,了解先天性近视豚鼠眼球的生物学特性。方法于40只3周龄英国种短毛三色豚鼠中发现先天性近视豚鼠6只,验光示12眼的屈光度为-6.00^-12.00 D,以-10.00 D为界分为高度近视组(<-10.00 D,7眼)和超高度近视组(≥-10.00 D,5眼),同时选用6只同批正常视力豚鼠12眼作为正常对照组。各组均行视网膜检影测屈光度,A超测量眼球生物学参数,取眼球做病理切片并行光学显微镜检查。结果正常对照组、高度近视组和超高度近视组豚鼠眼平均屈光度分别为(+2.38±1.54)、(-7.64±1.31)和(-10.80±0.76)D,3组豚鼠眼平均屈光度比较差异有统计学意义(F=216.305,P<0.05),且3组豚鼠眼平均屈光度两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3组豚鼠眼球的前房深度和晶状体厚度比较差异均无统计学意义(F=0.112,P>0.05;F=0.100,P>0.05);高度近视组、超高度近视组豚鼠眼球的玻璃体腔长度分别为(3.75±0.09)和(3.79±0.13)mm,显著长于正常对照组的(3.41±0.07)mm(F=50.306,P<0.05),但高度近视组与超高度近视组豚鼠眼球的玻璃体腔长度比较差异无统计学意义(P>0.05);高度近视组、超高度近视组豚鼠的眼轴长度分别为(7.95±0.45)和(8.10±0.27)mm,显著长于正常对照组的(7.63±0.21)mm(F=4.924,P<0.05),但高度近视组与超高度近视组豚鼠的眼轴长度比较差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组豚鼠眼巩膜厚度正常,胶原纤维分布均匀,排列整齐,细胞外基质少;高度近视组豚鼠巩膜明显变薄,胶原纤维分布稀疏,排列紊乱,细胞外基质增多;超高度近视组较高度近视组以上改变更加显著。结论先天性近视豚鼠眼的屈光状态、眼轴长度及巩膜病理学改变均符合病理性近视特点,可用于近视眼的相关研究。

立宝舒卡波姆眼用凝胶治疗干眼的临床观察

目的:通过观察干眼症患者使用2g/L立宝舒卡波姆眼用凝胶(简称立宝舒)前后,患者的主观症状、视力、干眼实验室检查结果以及药物的耐受性,评估立宝舒对干眼症的疗效。方法:选择干眼症患者100例200眼,予以2g/L立宝舒卡波姆眼用凝胶滴双眼,4次/d。观察就诊当天、用药7,14,28d后患者主观症状:干燥感、异物感、酸痛感、眼疲劳、眼红、畏光;视力、干眼实验室检查:泪膜破裂时间(break-uptime,BUT)、荧光素染色、SchirmerⅠ试验、SchirmerⅡ试验、睑板腺功能检查结果以及患者用药的耐受性。结果:用药7d后,患者的干燥感、异物感、酸痛感、眼疲劳、眼红、畏光等主观症状的分级与用药前有显著差异(P<0.01),随着用药时间的延长,6种主观症状明显缓解;但患者不同时间的视力无明显差异(P>0.05)。用药后患者的BUT及SchirmerⅠ,SchirmerⅡ值与用药前有显著差异(P<0.01),并且随着用药时间的延长,患者BUT及SchirmerⅠ,SchirmerⅡ值明显延长;但不同时间的睑板腺功能分级无明显差异(P>0.05);用药后患者荧光素染色分级及泪膜脂质干涉Yakoi分级与用药前有显著差异(P<0.01)。所有观察病例中未发现明显不耐受药物的患者。结论:2g/L的立宝舒卡波姆眼用凝胶可以明显改善干眼患者的眼部症状和干眼实验室检查结果,药物耐受性好,但对患者视力和睑板腺功能无明显改善作用。

U73122和SQ22536对豚鼠视网膜色素上皮细胞分泌bFGF的影响

目的:观察磷脂酶C抑制剂U73122和腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536对豚鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞分泌碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法:培养原代豚鼠RPE细胞,传2代后用于实验。用含U73122及SQ22536浓度均为1×10-5mol/L的两种培养液培养RPE细胞,设含有单纯溶质的培养液作为对照。分别于实验2、4、6、8、16、24、48 h收集培养液,ELISA法检测bFGF的含量。结果:ELISA结果显示:加入1×10-5mol/L U73122后,实验组bFGF的分泌量与对照组相比在2、4、6、8、16h减少(P<0.05),24、48 h变化无统计意义(P>0.05);而SQ22536组与对照组相比RPE细胞bFGF的分泌量在各时间点均有减少(P<0.05)。结论:U73122和SQ22536对RPE细胞bFGF的分泌均有抑制作用。提示RPE细胞内可能是通过磷脂酶C信号途径和腺苷酸环化酶信号途径共同调控bFGF的分泌。

LE540对视网膜色素上皮bFGF及TGF-β_2的影响

目的:观察全反式视黄酸β受体阻断剂LE540对培养的豚鼠视网膜色素上皮细胞(RPE)分泌碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子-β(2TGF-β2)的影响。方法:胰蛋白酶消化法培养原代豚鼠RPE细胞,角蛋白免疫组织化学染色鉴定为阳性后,传2代细胞后用于实验。不同实验组分别加入10×10-6 mol/L的全反式视黄酸ATRA和5×10-6 mol/L的LE540,设试剂对照。ELISA检测ATRA及LE540作用2 h、4 h、6 h、8 h、16 h后TGF-β2和bFGF的分泌量。结果:ELISA结果显示:(1)加入ATRA后,实验组TGF-β2的分泌量与对照组比较明显增加,而bFGF的分泌量明显减少(P<0.05)。(2)加入LE540后,实验组较对照组RPE分泌TGF-β2均明显减少(P<0.05),差别有统计学意义。同时bFGF的分泌量没有明显变化(P=0.178)。结论:全反式视黄酸能通过视黄酸β受体途径促进视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β2,同时通过其他途径能抑制bFGF的分泌。提示有可能通过阻断视黄酸β受体来控制近视的进展。

初中语文课堂教学方法

文学作品总带有作者浓厚的感情色彩，每一篇作品，都饱含着作者的深切情感。教师注重建立“情绪潮”，充分利用作品本身的魅力去感染学生，教育学生，才能使整个教育过程弥漫着和谐、融洽、振奋、饱满的情绪气氛，并浓化信息的感情色彩，不把知识讲成冷冰冰的真理。一篇文章教师的导人语是至关重要的，直接决定着一堂课的好坏。

全反视黄酸对豚鼠视网膜色素上皮细胞分2泌TGF-β2及细胞内第二信使IP3和cAMP的影响

目的观察全反视黄酸（ATRA）对培养的豚鼠视网膜色素上皮（RPE）细胞增殖以及分泌转化生长因子p2（TGF—β2）的影响，并观察细胞内第二信使cAMP和IP3的含量变化。方法培养原代豚鼠RPE细胞，传2代后用于实验。实验分3组进行。第1组用不同浓度ATRA（5×10^-6、10×10^6、40×10^-6mol／L）作用于豚鼠RPE细胞，24h后用MTT法检测细胞增殖情况。第2组加入10×10^-6mol／L的ATRA．分别于2、4、6、8、16h后收集培养液，用ELISA方法检测RPE细胞TGF—β2的分泌量。第3组以10×10^-6mol／L的ATRA作用于豚鼠RPE细胞．分别于0min、5min、30min、2h、6h后收集细胞裂解液。行放射免疫和ELISA方法检测细胞内cAMP和IP3的含量变化。每组均以等量溶剂DMSO作为对照。对不同浓度ATRA组间MTT结果行方差分析，其余实验组与对照组间比较行配对t检验。结果5×10^-6、10×100、40×100mol／LATRA作用RPE细胞24h后，DD值分别为0．099±0．008、0．117±0．008、0．087±0．011。与对照组（0．103±0．017）比较，40×10^-6mol／LATRA作用时OD值显著降低，差异有统计学意2（P〈0．05），其他浓度组与对照组相比差异无统计学意义（p〉0．05）。10×10^-6／mol／L的ATRA作用RPE细胞后，TGF—β2的分泌量在作用2、4、6h时较对照组明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）．8h时无明显变化，16h时降低（P〈O．05）。10×10^-4mol／L的ATRA作用于豚鼠RPE细胞后，IP3的含量在各时间点均较对照组显著下降，且随时间的延长下降越明显；cAMP的含量只有在作用30min和2h时升高．其他时间变化不明显。结论浓度为40×10^-6mol／L的ATRA对豚鼠RPE细胞的增殖有抑制作用。10×10^-6mol／L的ATRA作用RPE细胞后．TGF-β2的分泌量在6h内增加，之后随时间延长而降低。ATRA对RPE细胞的作用可能与IP3的下降有关。

LE540对形觉剥夺性近视豚鼠巩膜的影响

【目的】通过观察LE540对形觉剥夺性近视(form-deprivation myopia,FDM)豚鼠的屈光度、眼轴及巩膜细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响,探讨LE540在FDM豚鼠巩膜中的作用。【方法】3周龄三色豚鼠24只随机分组,每组8只。Ⅰ组为形觉剥夺组,左眼用气球头套遮盖;Ⅱ组左眼球后注射0.4 g/L视黄酸(retinoic acid,RA),Ⅲ组行左眼遮盖,并注射0.1 g/L LE540,三组均饲养至第24天。右眼均为自身对照眼。实验前后均行视网膜检影测量屈光度,实验结束后取眼球测量眼轴长,取后极部巩膜组织,检测各组豚鼠后巩膜中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和核心蛋白多糖(decorin,DCN)的蛋白表达。【结果】实验后Ⅰ组、Ⅱ组豚鼠左眼均形成近视;Ⅲ组左眼仍为远视,且三组间差异有统计学意义(H=10.38,P=0.006)。实验后Ⅰ组、Ⅱ组豚鼠左眼轴比右眼明显增长(P<0.05);Ⅲ组左右眼的眼轴无显著差异(P=0.146),双眼眼轴差值三组间比较有显著性差异(H=6.77,P=0.034)。实验后左眼的MMP-2/β-actin与DCN/β-actin三组比较差异有显著统计学意义(F=7.464,P=0.012;F=4.448,P=0.045),其中Ⅰ组和Ⅱ组无显著性差异,但与Ⅲ组比较均有显著性差异。【结论】形觉剥夺和外源注射视黄酸均可导致轴性近视,视黄酸诱导近视形成的作用可被LE540不完全抑制。