超声提取法对杜仲不同“发汗”品经不同加工炮制后总黄酮成分的影响研究

目的:比较杜仲生品及不同发汗品经四种不同炮制方法对杜仲总黄酮成分的影响,为杜仲加工炮制提供依据。方法:将杜仲生品及不同发汗品经姜制、酒制、盐制、蜜制四种炮制后制备各样品,用芦丁作对照品,采用紫外分光光度法,于510 nm波长处,分别测定不同发汗品经四种炮制后超声提取物中的总黄酮含量。结果:杜仲生品及不同发汗品不同炮制方法对杜仲总黄酮的含量有影响,烘至半干后“发汗”品(E5)酒制品总黄酮含量最高。结论:若以杜仲总黄酮为主的药理作用进行临床应用时,建议杜仲采取烘至半干“发汗”后采用酒制处理的加工炮制方法。

丹参不同愈伤组织诱导及遗传转化体系优化

为了获得满足不同目的组织培养材料和稳定高效的遗传转化体系,该研究以丹参叶片和茎段为外植体,采用含不同浓度的植物激素(植物生长物质)的Murashige Skoog(MS)培养基,探索诱导丹参产生不同愈伤的条件;采用正交法考察浸染时间、共培养时间、筛选压等对农杆菌介导的丹参遗传转化体系的影响,并根据出芽率及转化阳性率优化丹参遗传转化体系。结果表明:(1)能较快诱导丹参叶片产生愈伤的是MS+0.5mg·L^(-1)6-BA+0.5 mg·L^(-1)2,4-D;诱导茎较快产生愈伤的是MS+0.1mg·L^(-1)NAA+0.5 mg·L^(-1)6-BA;1 mg·L^(-1)反式玉米素(ZR)可能有利于诱导产生含有丹参酮的愈伤组织;1.0 mg·L^(-1)2,4-D较易诱导丹参愈伤组织生根。(2)以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件为浸染5 min、共培养1 d、卡那霉素30 mg·L^(-1)筛选,经PCR鉴定转基因阳性率为60%;而用10 mg·L^(-1)链霉素筛选阳性率达70%。该研究结果确定了丹参不同愈伤组织诱导条件,明确了以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件,换用10 mg·L^(-1)链霉素筛选时体系更加稳定、更易操作、更易重复。

阴地蕨全转录组分析及植物激素信号转导相关基因筛选

该研究以新鲜阴地蕨全株为材料,用Illumina HiSeq 2500平台进行全转录组测序,干净序列经组装后得单一基因(Unigene),将Unigene在非冗余蛋白/核酸数据库(nonredundant protein database,NR)、核酸序列数据库(nucleotide sequence database,NT)、基因本体论数据库(gene ontology,GO)、蛋白质真核同源数据库(clusters of eukaryotic orthologous groups,COG)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)、蛋白质序列数据库SwissProt和Interpro进行生物信息学分析。结果表明:共获得干净序列6.67 Gb,组装后得到58 646个Unigene,平均长度为1 023 bp,Unigene在上述数据库的总体注释率为69.25%。其中,在GO数据库中,20 762个基因被注释到生物功能、细胞组分和分子功能3个本体的52个功能组,COG注释了20 633个基因并将其划分为25个功能簇;在KEGG数据库中,比对注释了29 377个基因,可划分为5个大类、19个亚类代谢途径,据此筛选出八类植物激素信号转导相关的41个基因家族。通过比对共得到43 102个编码序列(coding sequence,CDS),平均长度为749 bp,N50为1 137;筛选到60个转录因子(transcript factor,TF)家族共1 502个转录因子基因;共发现17 195个单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)位点,其中碱基转换11 122个,颠换6 073个;发现了8 245个简单序列重复(simple sequence repeat,SSR),数量最多的为二核苷酸重复和三核苷酸重复。这些结果从功能和结构方面提供了阴地蕨全转录组信息和涉及植物激素信号转导的潜在基因,为进一步深入研究阴地蕨的生长发育、遗传、品种鉴别等提供了分子生物学的基础数据。

香椿蛋白质对小鼠抗氧化能力及非特异免疫的影响

[目的]研究香椿蛋白质对小鼠抗氧化能力及非特异免疫的影响。[方法]用硫酸铵沉淀法、透析、冷冻干燥的方法提取香椿蛋白粗品,然后分别以高、中、低剂量的香椿蛋白腹腔注射小鼠9 d,取一半数量小鼠的血清,用试剂盒测定血清的SOD和GSH-Px,并解剖出肝脏、脾脏和胸腺,测定丙二醛MDA含量及胸腺和脾脏指数;另一半小鼠于第10天腹腔注射淀粉肉汤,然后取腹腔液观察巨噬细胞的吞噬率。[结果]香椿粗品蛋白的含量为84.5%,得率为5.3%。香椿蛋白可明显提高小鼠血清SOD的活性(P<0.05,高剂量P<0.01);高剂量香椿蛋白可明显增加GSH-Px的含量(P<0.05)、脾脏指数(P<0.05,高剂量P<0.01)和巨噬细胞的吞噬率(P<0.05)。[结论]香椿蛋白具有一定的体内抗氧化能力,对小鼠非特异性免疫也有一定的促进作用。

基于蛇足石杉转录组的SNP和SSR多态性分析

目的:对蛇足石杉的单核苷酸多态性(SNP)及微卫星短序列重复多态性(SSR)进行分析。方法:用HISAT、GATK、MISA等软件对蛇足石杉转录组筛选得到SNP和SSR并设计了SSR引物。结果:共发现50 388个SNP位点,转换占64. 2%,颠换占35. 8%。共筛选出11 934条SSR,分布在9 358个unigene中,其中含有两条以上SSR的unigene有1 786个。二核苷酸重复出现频率最多,占总SSR47. 6%,三核苷酸重复占31. 2%,六核苷酸重复占10%、单核苷酸重复占4. 2%、四核苷酸重复占3. 9%,最少的是五核苷酸重复占3. 1%。结论:蛇足石杉具有较丰富的SNP和SSR标记,为其品种鉴定、种质培育等研究奠定了基础。

在有限条件下进行药理学实验教学改革

在有限的办学条件下,充分利用现有资源,训练学生药理学实验基本技能,强化学生对药理实验中量?的理解,注意提高学生学习兴趣,培养学生独立思考的能力和实事求是的科学精神,增设命题式设计性实验,加强生命伦理教育,使用现代教学手段,努力提升学生综合素质,使学生初步建立较完善的药理学实验学科体系,达到高职高专人才培养的要求.

细胞滴片间接免疫荧光实验技术的探讨

目的:探讨在有限条件下简化细胞滴片间接免疫荧光实验操作技术。方法:以大鼠胸腺细胞为抗原,兔抗鼠抗血清为一抗,FITC羊抗兔IgG荧光抗体为二抗做细胞滴片的间接免疫荧光染色,荧光显微镜观察结果。结果:细胞悬液浓度在105～106个/ml为宜,新鲜细胞固定后可长期保存备用,冻存细胞则不能使用;固定剂可选10%甲醛、甲醇等,也可不用固定剂;粘片剂也可不用;平整的试管架代替湿盒更方便。结论:细胞滴片的间接免疫荧光实验操作步骤可简化,以减少实验开支。

中药桑寄生(Lorathlorace)抗肿瘤毒蛋白的分离及部分性质初步研究

用Sephadex G100分子筛法分离中药桑寄生中蛋白质,得到大分子量组分a和小分子量组分b;用CM-Sepharose Fast Flow分离桑寄生的大分子物质,得到四个部分:组分Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ。对以上各组分蛋白及其分子量用SDS-PAGE电泳确认;选用肝癌细胞Bel-7402,经MTT染色法检测了其抗肿瘤活性。初步得出实验结果:在我国中药桑寄生中分离到的组分Ⅱ(包含两种蛋白或亚基),分子量在31000和33000左右,具有抑制肝肿瘤细胞Bel-7402生长作用;组分Ⅲ中分子量在21000左右的蛋白抗肝肿瘤细胞Bel-7402作用不明显;组分Ⅳ中分子量小于14000的蛋白没有抗肿瘤作用,分子量为36000的蛋白的抗肿瘤作用有待进一步试验确定。

不同产地水冬瓜叶HPLC指纹图谱建立、化学模式识别分析及含量测定

目的:为水冬瓜叶药材的质量控制提供参考。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),以Agela Promosil C18为色谱柱,以0.2%磷酸水溶液-乙腈(梯度洗脱)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为35℃,进样量为10μL。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)》建立10批不同产地水冬瓜叶的HPLC指纹图谱并进行相似度评价,通过与对照品色谱图比对进行色谱峰的指认。采用聚类分析、主成分分析(PCA)法和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)法进行化学模式识别分析,并筛选质量差异标志物。采用相同HPLC法对水冬瓜叶中金丝桃苷和异槲皮苷的含量进行测定。结果:10批不同产地水冬瓜叶HPLC指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为0.923~0.983。共确定了11个共有色谱峰,并指认出了峰4、5分别为金丝桃苷、异槲皮苷。聚类分析和PCA、PLS-DA结果均显示,10批水冬瓜叶可分为2类,其中,Y10聚为一类、其余聚为一类;经PLS-DA分析,筛选出了6个变量投影重要性值大于1的共有峰(峰4、3、10、2、6、11)。10批样品中金丝桃苷和异槲皮苷的平均含量分别为0.47~6.97、0.21~1.87 mg/g。结论:所建立的HPLC指纹图谱和含量测定方法稳定、可靠,初步筛选出了不同产地水冬瓜叶中金丝桃苷等6个质量差异性标志物,可用于不同产地水冬瓜叶药材的质量控制。

基于高效液相色谱指纹图谱和化学模式识别法评价不同采收期水冬瓜树皮药材质量

建立不同采收期水冬瓜树皮药材的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并结合化学模式识别法,对不同采收期水冬瓜树皮药材质量进行了评价。将新鲜的水冬瓜树皮烘干过筛后,用甲醇提取其中的有效成分,采用HPLC建立不同采收期的11个批次水冬瓜树皮的指纹图谱,通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》[国家药典委员会(GPC)2004A版]、IBM SPSS Statistics 25统计学软件和SIMCA-P+12.0软件等化学计量学软件对指纹图谱进行相似度分析、系统聚类分析、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)。结果显示:11个批次水冬瓜树皮的HPLC指纹图谱中有18个共有峰,这些共有峰与紫丁香苷的相对峰面积的相对标准偏差(RSD)为30%~124%,说明不同采收期的样品所含化学成分的含量差异较大。11个批次样品的指纹图谱与以S6色谱数据为参考生成的对照指纹图谱的相似度为0.932~0.982,表明不同采收期水冬瓜树皮药材总体质量较为稳定。系统聚类分析将11个批样品分为2组,这一结果得到了PCA和OPLS-DA的验证。OPLS-DA结果还显示:18个共有峰的变量投影重要性(VIP)值均大于0.8,说明不同批次水冬瓜树皮药材之间的质量存在微小差异,从中选择7个VIP值大于1.0的共有峰对应的物质作为质量差异性标志物,用来反映不同采收期水冬瓜树皮中主要化学成分变化。

基于HPLC-HESI-HRMS的水冬瓜根皮化学成分分析

为探究水冬瓜根皮中的化学成分,本文基于HPLC-HESI-HRMS方法对水冬瓜根皮中化学成分进行了分析与推测。采用ThermoFisher Hypersil GOLD aQ C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水-乙腈(0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min,柱温:40℃;质谱使用HESI离子源,正离子和负离子模式下采集数据,质量扫描范围m/z:100~1500 Da,结合Compound Discoverer 3.0数据库及相关文献数据分析水冬瓜根皮的主要化学成分。结果表明,通过高分辨质谱正、负离子质谱信息及相关文献数据对照,共推断出36个化合物,包括10个有机酸类化合物,4个生物碱类化合物,1个氨基酸类化合物,2个苯丙素类化合物,2个酯类化合物,2个萜类化合物,2个芳香含氧衍生物类化合物,4个酰胺类化合物,9个其他类化合物。HPLCHESI-HRMS方法为水冬瓜根皮药材的质量控制提供技术支持,为阐明水冬瓜根皮药材的药效物质基础提供了有力的数据依据。

水冬瓜叶药材的质量标准研究

目的:建立水冬瓜叶的质量标准。方法:参照《中国药典》(2015年版)四部项下药材和饮片检定通则要求及相关项目检测方法,测定水分、总灰分、浸出物含有量;采用薄层色谱法(TLC),以乙酸乙酯-甲酸-水(33∶4∶2)为展开系统定性鉴别水冬瓜叶药材;采用高效液相色谱法(HPLC),以0.2%磷酸水-乙腈为流动相,Agela Promosil C_(18)为色谱柱测定金丝桃苷含量。结果:建立的薄层色谱中金丝桃苷斑点清晰,分离度高,重复性好。10批水冬瓜叶药材水分、总灰分、浸出物含有量分别为6.34%~8.89%、7.95%~11.62%、29.48%~39.76%。金丝桃苷在0.00824~0.16480 mg/ml(r=0.9992)范围内线性关系良好;精密度、稳定性、重复性的RSD均小于3.0%;平均加样回收率为100.53%,RSD为2.67%(n=6)。结论:初步拟定水冬瓜叶药材中水分不得超过10.3%,总灰分不得超过12.0%,浸出物不得少于25.0%,金丝桃苷含量以干燥品计不得少于0.051%。建立的方法稳定可行,专属性强,可用于水冬瓜叶的质量控制。

水冬瓜叶乙醇提取物不同萃取部位抗炎镇痛活性研究

目的:筛选水冬瓜叶药材不同萃取部位的抗炎镇痛作用。方法:水冬瓜叶药材70%乙醇提取后,浓缩,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取、浓缩和烘干,得到水冬瓜叶药材不同萃取部位。采用醋酸扭体法观察水冬瓜叶药材不同萃取部位的镇痛作用,二甲苯致小鼠耳肿胀法观察水冬瓜叶药材不同萃取部位的抗炎作用。结果:与空白对照组比较,在镇痛实验中,除乙酸乙酯萃取部位中、高剂量组外,水冬瓜叶药材石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三个萃取部位均可显著延缓醋酸所致小鼠扭体次数,其中石油醚和乙酸乙酯萃取部位低剂量组(P<0.05),石油醚萃取部位中、高剂量组和正丁醇萃取部位低、中、高剂量组(P<0.01);在抗炎实验中,水冬瓜叶药材乙酸乙酯萃取部位低剂量组可显著抑制所致小鼠二甲苯致小鼠耳廓的肿胀度(P<0.05)。结论:水冬瓜叶药材抗炎有效部位为乙酸乙酯萃取部位,水冬瓜叶药材三个萃取部位均有镇痛活性,镇痛强度依次为正丁醇萃取部位>石油醚萃取部位>乙酸乙酯萃取部位。

正交试验优选蛇莓总酚酸提取工艺

目的:优化蛇莓总酚酸的提取工艺参数。方法:以总酚酸转移率为评价指标,采用单因素试验考察液固比、乙醇浓度、提取温度和提取时间对提取效果的影响;根据单因素试验结果,采用L_(9)(3^(4))正交试验法进一步优化蛇莓总酚酸的提取工艺条件,并对优化工艺进行验证。结果:固液比对总酚酸提取率影响极其显著(P<0.01),乙醇浓度对总酚酸提取率影响显著(P<0.05);优化后的工艺条件为:液固比20∶1(mL/g),乙醇浓度60%(V/V),加热温度80℃,提取时间2h。结论:该工艺条件稳定,成本低,提取率高,可用于蛇莓总酚酸的提取。

薯莨鞣质粗提物体外抗霉菌作用及对人肿瘤细胞生长的影响

目的考查薯莨水提物的化学成分及其鞣质粗提物的体外抗霉菌等药理作用。方法经典鉴定方法鉴定薯莨的化学成分;纸片法考查薯莨鞣质粗提物对大肠杆菌TG1、黑霉、黄曲霉、木霉的作用;MTT法检测其对人肺癌细胞A549、人卵巢癌细胞A2780、人胃癌细胞SGC-7901生长的影响。结果薯莨水溶性成分包括蛋白类、糖类或苷类、鞣质和有机酸等,未检测到生物碱;薯莨鞣质粗提物对大肠杆菌TG1、黑曲霉及木霉均有一定的抑菌作用,对黑霉没有抑制作用;薯莨鞣质粗提物在体外对人肺癌细胞A549和人胃癌细胞SGC7901有刺激作用,对人卵巢癌细胞A2780生长没有影响。结论薯莨鞣质粗提物具有一定的抗霉菌活性,对某些肿瘤细胞有刺激作用,作用机制还有待深入研究。

救顽汤对慢性湿疹模型大鼠作用研究

目的通过观察救顽汤对慢性湿疹大鼠模型皮损、脾脏指数,初步评价救顽汤治疗慢性湿疹作用。方法随机将60只雄性SD大鼠分为6组,每组10只,分别为空白组、模型组、阳性组、救顽汤低剂量组、中剂量组、高剂量组。除空白组外,各组大鼠运用2,4-二硝基氯苯(DNCB)复制慢性湿疹动物模型。模型建立后连续给药10 d,比较各组间皮损程度、脾指数。结果与空白组相比较,模型组大鼠皮损评分显著升高,脾脏指数降低(P<0.01);与模型组相比较,救顽汤高剂量、中剂量组给药后皮损评分明显降低,脾脏指数升高(P<0.01),低剂量组无差异(P>0.05)。结论救顽汤能有效减轻慢性湿疹大鼠模型的皮损程度,降低皮损评分,具有明显的治疗作用。救顽汤能有效升高湿疹模型降低的脾指数,其治疗慢性湿疹的作用机制可能与提高机体免疫有关。

湿疹中医外治法研究概况

湿疹(Eczema)是一种以皮肤瘙痒剧烈,伴多形性或对称性皮损(丘疹,红斑,糜烂及液态渗出等)且容易反复发作为主要特征的皮肤科疾患,该病高发,据统计占皮肤科门诊量的10%以上[1-2]。本文旨在简要梳理该病中医病名源流,病因病机,并概述近年来中医采用外治法治疗的情况。

贵州都匀桔梗科植物资源调查与分析

为了摸清贵州省都匀市桔梗科植物资源的分布及蕴藏量,普查队成员通过全国第四次中药资源普查开展贵州省都匀市各乡镇样地普查,进行了桔梗科植物文献调查、野外普查、样线调查、标本采集、药材采集、实地采访及标本鉴定工作。结果显示,在14个乡村中发现9种桔梗科植物并采集标本,其群落特征较为复杂,伴生植物多种多样。通过市场及民间调查发现,桔梗科植物的栽培量几近为零,野生资源正逐渐减少。本研究对当地桔梗科植物的分布及开发利用做了讨论,为都匀市及全国对桔梗科相关经济作物的可持续发展提供参考依据。

透皮给药制剂在阿尔茨海默症中的研究进展

阿尔茨海默症(AD)是一种常见、渐进、致命的神经退行性疾病,在日趋加剧的老龄化社会中影响严重。目前常用的抗AD药物主要有胆碱酯酶抑制剂和非竞争性N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂。然而,此类口服抗AD药物存在一些缺点,如血药浓度不稳定、患者依从性差、不良反应严重、首过代谢率高等,这些缺点导致其治疗效果不佳。透皮给药可以弥补口服抗AD药物的诸多缺点,提供稳定的药物扩散、避免首过代谢、减少胃肠系统的不良反应等。本文综述了抗AD药物经皮给药技术,旨在为抗AD药物透皮给药途径的研究提供一定的参考。

坚持文艺的正确方向

《讲话》发表在抗日战争时期,毛主席讲的是革命文艺的基本问题。这些基本的原则即使在今天也是正确的。文艺作为上层建筑、意识形态的东西,是经济基础的反映。