激活鼠FcγRⅡb对天然免疫因子产生的影响

目的:了解FcγRIIb对小鼠巨噬细胞天然免疫及抗病毒免疫作用的影响。方法:构建鼠源FcγRIIb原核表达质粒pET28a-FcγRIIb,将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达,采用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化。以纯化后的重组蛋白作为抗原,免疫兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测血清效价,利用Western blotting技术鉴定抗体特异性,高免血清经饱和硫酸铵溶液粗纯和ProteinG Sapharose精纯获得兔抗鼠FcγRIIb多克隆抗体。以该抗体激活小鼠腹腔巨噬细胞表面的FcγRIIb,利用荧光定量PCR技术检测MHV感染上述细胞后相关细胞因子的mRNA转录水平。结果:单独激活FcγRIIb 12~48 h时巨噬细胞中TLR3、IRF3、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α和IL-1β的mRNA转录水平上调,免疫抑制因子TGF-β的mRNA转录水平下调。此外,在MHV感染小鼠腹腔巨噬细胞12~48 h时,与未激活组相比,FcγRIIb激活后可上调细胞中TLR3、IRF3、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α和IL-1β的mRNA转录水平,下调TGF-β的mRNA转录水平,且其病毒拷贝数及病毒滴度低于未激活组。结论:研究证明FcγRIIb的活化能促进小鼠腹腔巨噬细胞天然免疫因子产生,同时具有一定抗病毒作用,为进一步探究FcγRIIb在MHV感染过程中的作用奠定了基础。