高碘酸钠氧化法测定肌醇含量

高碘酸钠氧化法测定肌醇含量张楚富，林清华，梁会（武汉大学生命科学学院武汉４３００７２）王泽胜（湖南兰龙科技实业公司长沙４１０００６）关键词植酸钙，肌醇，高碘酸钠氧化法分类号Ｑ５０８肌醇是一种环己六醇，它以植酸盐的形式主要存在于米糠和其他油料作物种子中...

生物化学实验教学内容系列化改革探讨

以谷氨酰胺合成酶(GS)同工酶表达为线索进行生物化学实验系列化教学,可以做到以点带面、以点突破、从点上深入。该项实验内容的完成有利于使学生既能学习并掌握生物化学的一些基本的实验方法和技术,包括蛋白质水平、酶活性、酶动力学、同工酶测定,不同类型的电泳和目标蛋白的检测等生命科学研究中的一些常用的和较先进的方法和技术,又可以培养学生的动手能力、分析问题和解决问题的能力,培养学生的科学研究意识,引导学生学习科学研究的思维方式,学习设计较理想的科学研究方案,有利于学生科学研究能力的培养。

生物化学课程课堂教学的体验

一门课的课程体系既反映在教科书中，也反映在课堂教学上。课堂教学是向学生传授知识的重要方式。如何提高教学质量，一直是学校教师长期关注和努力探索的问题。我从事生物化学教学20多年，先后分别两次编写出版了两个版本的生化教材和有关习题解答的教科书。在生物化学课程体系和教学方法研究方面做过一些尝试。下面我就课程体系研究和课堂教学的一些体验与同行们进行交流。

我的教学观

结合本人近40年来对教学工作的认识，认为教学与科研是可以相互促进的，教学质量的提高是不可或缺的；培养学生教师要有责任感，要切实懂得“教什么，怎样教”，要认真做好教学内容和课程体系的研究等问题。

猪肾胆绿素还原酶活性基团的修饰

报道采用专一性试剂ＤＴＮＢ、ＮＥＭ、磷酸吡哆醛以及２，３－丁二酮对胆绿素还原酶活性进行修饰．当这几种试剂分别与该酶反应后，酶活性大幅度降低；而当预先加入ＮＡＤＰＨ或胆绿素，酶活性明显受到保护．这些结果表明，半胱氨酸、赖氨酸和精氨酸残基与该酶同ＮＡＤＰＨ和胆绿素结合、以及胆绿素还原成胆红素的反应有关。

氯化血红素的吡啶血色原光吸收测定

测定含铁的原卟啉类物质的常用方法主要有两种:一种是邻菲罗啉(O-phenanthroline)光度法,另一种是吡啶血色原光吸收测定法。前者是测定铁卟啉的铁含量,后者是先将含铁的原卟啉转变成吡啶血色原后测定还原性铁卟啉的量。这两种方法都是测定铁卟啉蛋白类物质的重要方法。我们在研究提取氯化血红素工艺时,采用吡啶血色原光吸收测定法测定样品中氯化血红素的含量。该法操作简便、快速,结果可靠,是一种很理想的测定方法。

不同氮源对水稻幼苗根氨同化酶的影响

将氮素含量相同、但来源不同的氮源分别加入到水稻培养液中 ,分析了不同氮源对水稻幼苗根氨同化酶活性的影响 .与无氮培养的水稻根相比 ,( NH4) 2 SO4,NH4NO3,KNO3,谷氨酸 ( Glu)和谷氨酰胺 ( Gln)都能分别促进水稻根谷氨酰胺合成酶 ( GS)、依赖于 NADH的谷氨酸合酶 ( NADH- GOGAT)和依赖于 NADH的谷氨酸脱氢酶 ( NADH- GDH)活性 .( NH4) 2 SO4对 GS和 NADH- GOGAT活性促进最为显著 ,而 Gln对 GS和 Glu对 NADH-GOGAT的活性分别影响最小 .Glu对 NADH- GDH活性的诱导稍强于其它氮源 .这些结果提示 。

等渗水分和盐胁迫对水稻幼苗叶片氨同化的影响

在盐(NaCl)胁迫和等渗的聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)6000引起的水分胁迫下,检测了水稻叶片NH4+同化酶及其相关参数.结果表明,两种胁迫均对水稻叶片NH4+的同化产生了显著的影响.与PEG-6000相比,在等渗条件下,NaCl更显著的抑制了谷氨酰胺合成酶(GS)的活性,造成叶片中NH4+的积累水平更高.与盐胁迫一样,NH4+的积累同样也诱导了水分胁迫下依赖于NADH的谷氨酸脱氢酶(NADH-GDH)水平的上升,但与盐胁迫相比,上升幅度较小.

温度对水稻谷氨酰胺合成酶和NADH-谷氨酸合酶表达的影响

测定了不同温度（32℃和23℃）培养下水稻幼苗根和叶的谷氨酰胺合成酶（GS）同工酶以及依赖于NADH的谷氨酸合酶（NADH-GOGAT）的活性变化.结果表明,温度对水稻根和叶的GS活性具有相反的作用.23℃下生长的水稻根的GS活性明显高于32℃下生长的活性,而23℃下生长的叶的GS活性显著低于生长在32℃下的叶的活性.Native-PAGE和活性染色以及蛋白质印迹表明,根和叶的GS活性变化主要是由于GSrb和GS2活性及其相应蛋白质水平变化所致.23℃下生长的水稻根的NADH-GOGAT活性显著高于32℃下生长的活性,而叶的活性则基本保持恒定.

外源水杨酸对水稻(Oryza sativa L.)幼苗根的NaCl胁迫缓解效应

为研究25 mg/L外源水杨酸对0,50,100 mmol/L NaCl处理下水稻幼苗根的胁迫缓解效应,测定了根组织内脯氨酸含量、可溶性糖含量、氨同化关键酶活性等相关指标.结果表明外源水杨酸可使组织内脯氨酸含量显著降低至与正常对照相当水平,而可溶性糖含量升高,说明外源水杨酸存在时可溶性糖作为主要渗透胁迫调节物并对盐胁迫适当缓解,表现在幼苗根谷氨酰胺合成酶及依赖于NADH的谷氨酸脱氢酶的活性上升20%左右、可溶性蛋白质含量的提高,氮同化加强而对盐胁迫有一定的抗性.对50 mmol/L NaCl胁迫处理的材料缓解效应较显著.

高等植物谷氨酰胺合成酶研究进展

谷氨酰胺合成酶 (GS)是参与高等植物氨同化过程的关键酶。介绍了高等植物谷氨酰胺合成酶及其同工酶的分布、性质。

硝态氮对黄瓜子叶谷氨酰胺合成酶和谷氨酸脱氢酶活性的影响

在硝态氮存在或缺乏的条件下,测定了黄瓜(CucumissativusL.)种子萌发和子叶发育过程中子叶可溶性蛋白质含量以及谷氨酰胺合成酶(GS)和谷氨酸脱氢酶(NAD(H)-GDH)活性的变化。在子叶发育初期,无论外源氮存在与否,每对子叶可溶性蛋白质含量和GS、NADH-GDH、NAD+-GDH活性随发育上升。在外源氮存在下,第4d后,可溶性蛋白质含量虽有所下降,但基本保持恒定;第6d后,GS和NADH-GDH活性逐渐降低,NAD+-GDH却相反增高。但在无外源氮条件下,于第4d后,可溶性蛋白质水平以及GS、NADH-GDH和NAD+-GDH活性都逐渐降低。在子叶发育的整个过程中,外源氮对GS和NAD+-GDH活性有促进作用,尤其是在子叶发育的后期对NAD+-GDH活性的促进更为明显。

甜瓜子叶发育过程中蛋白质水平和氨同化酶活性变化

测定了甜瓜种子萌发和子叶发育过程中谷氨酰胺合成酶 (GS)、依赖于NADH的谷氨酸合酶 (NADH GOGAT)、依赖于NADH的谷氨酸脱氢酶 (NADH GDH)等酶的活性变化以及种子萌发时可溶性蛋白水平的变化 .在有氮或无氮下 ,在子叶刚出土时GS和NADH GOGAT活性较低 ,随着子叶的发育 ,这两种酶的活性升高 ,两者分别于第 7天和第 5天达到最高 ,其后活性逐步降低 .但是NADH GDH呈现出相反的变化 ,在子叶发育的前期阶段其活性低 ,而后逐步升高 .可溶性蛋白的含量随着子叶的发育而逐步降低 .

牛至挥发油对小鼠特异性免疫功能的影响

The experimental results showed that volatile oil of Origanum vulgare L. (VO) significantly inhibited skindelayed type hypersensitivity (DTH) of mice induced by Dinitrochlorobenzene (DNCB) and sheep red blood cell(SRBC), and also inhibited the production of hemolysin in serum and SRBC hemolysis mediated by spleen cells atthe same dose of 100 mg·kg-1×7 d ip. The results also indicated it could cause thymus and spleen atrophyin mice at the dose. When the dose of VO was reduced to 50 mg·kg-1·d-1×7 d ip, it significantly increasedthe level of hemolysin in the serum of the mice and SRBC hemolysis mediated by spleen cells. VO couldremarkably inhibited DTH in mice induced by DNCB and SRBC at the dose. It suggested that VO could inhibit specificCell-mediated immunity and had different effects on specific humoral immunity with different doses.

NaCl对水稻谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的胁迫作用

在 Na Cl的胁迫下 ,水稻幼苗根和叶的谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的活性随着营养液中的 Na Cl浓度的升高而降低 ;游离 NH+ 4 在叶中积累 ,在根中未见明显变化。与根相比 ,叶对 Na Cl的胁迫作用更为敏感。叶的 NADH- GOGAT和 NADH- GDH活性在 Na Cl胁迫下降低的程度明显大于根。无论是否有 Na Cl存在 ,根的 NADH- GDH活性明显高于叶。 GS/GDH比值分析提示 ,在对照下 ,根中的 NH+ 4 的同化以 GS- GOGAT途径为主 ;而在 Na Cl胁迫下 ,GS- GOGAT途径明显削弱 ,GDH途径在 NH+ 4 的同化中的作用明显加强。无论是否有 Na Cl的存在 ,叶的 NH+ 4 同化途径都是以 GS- GOGAT为主。

NaCl对水稻谷氨酰胺合成酶活性及同工酶的影响

在营养液中 Ｎａ Ｃｌ的胁迫下，水稻根和叶的谷氨酰胺合成酶（ Ｇ Ｓ）的活性降低，但叶的 Ｇ Ｓ活性对 Ｎａ Ｃｌ浓度的敏感性大于根根和叶中的 Ｇ Ｓ活性变化与根和叶的平均质量和可溶性蛋白水平的变化是一致的 Ｎａｔｉｖｅ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ活性染色以及 Ｉｍ ｍ ｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ 检测表明，根和叶的 Ｇ Ｓ活性的降低主要是由于 Ｇ Ｓｒｂ 和 Ｇ

2-酮戊二酸对水稻根部碳-氮代谢重要酶的活性影响

2-酮戊二酸是碳-氮代谢的重要调控因子,在培养液中添加2-酮戊二酸可以促进水稻幼苗根部碳-氮代谢酶的活性.为了确定2-酮戊二酸是否与这些酶之间存在直接作用(体内实验),取正常培养的水稻幼苗材料,在上述酶的测活体系中分别添加2-酮戊二酸,并进行酶活性测定(体外实验).实验结果表明:2-酮戊二酸可以促进水稻幼苗根组织提取液中GS,HXK的活性,而对GOGAT,ICDH没有明显的影响.上述结果说明2-酮戊二酸作为一种效应物可能与GS、HXK结合,从而在体内、体外都促进了它们的活性.

蔗糖对不同氮源培养下水稻根部氨同化相关酶活性的影响

糖、有机酸以及氨基酸影响碳-氮代谢过程中的相关酶的基因表达和活性。将蔗糖分别加入到含有相同氮素浓度的(NH4)2SO4(NH4+)或丙氨酸(A la)作为氮源的营养液中培养水稻,测定幼苗根的谷氨酰胺合成酶(G S)、依赖于NADH的谷氨酸合酶(NADH-GOGAT)、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)和依赖于NADP的异柠檬酸脱氢酶(NADP-ICDH)的活性。结果显示,蔗糖诱导NH4+氮源中幼苗根的G S、NADH-GOGAT活性,抑制A la氮源中幼苗根的这两种酶活性,蔗糖对PEPC和NADP-ICDH活性的影响也不同;未加蔗糖时,以A la作为氮源的幼苗根的G S、NADH-GOGAT、PEPC和NADP-ICDH的活性明显高于以NH4+为氮源时的活性;生物量和蛋白质水平的变化与上述参数的变化基本一致。基于A la碳骨架的存在,这些结果表明,碳/氮平衡是影响这些酶活性差别表达的主要原因。

菠菜叶中存在两种谷氨酰胺合成酶同工酶

运用非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳结合活性染色的方法,在菠菜(SpinaciaoleraceaL.)生长发育过程中,观察到叶片中至少存在2种谷氨酰胺合成酶(GS),其中一种GS的活性随发育进程而逐渐升高,而另一种GS的活性逐渐降低。在不同来源的成熟的菠菜叶片中同样观察到2种GS的存在。

水稻谷氨酰胺合成酶同工酶免疫学性质比较研究(英文)

用纯化的水稻 (OryzasativaL .)根部存在的两种谷氨酰胺合成酶 (GS)同工酶GSra和GSrb分别免疫兔子 ,得到相应的抗体。免疫扩散和免疫印迹实验表明 ,GSra或GSrb的抗体对GS及其同工酶是专一的。免疫沉淀试验表明 ,GSra或GSrb不仅识别它的相应的抗原 ,而且也能很好地识别彼此的抗原。这两种抗体也能较好地识别水稻叶片胞液型的GS1,但对水稻叶片和菠菜 (SpinaciaoleraceaMill.)叶片叶绿体型的GS2的识别较弱。这些结果表明 ,水稻根的GSra和GSrb有很相似的抗原性 ,他们是非常相似的蛋白质。揭示GSra和GSrb像GS1一样都是胞液型GS。