醋制降低京大戟对正常小鼠胃肠道氧化损伤的初步研究

京大戟（Euphorbia Pekinensis Radix）为大戟科（Euphorbiaceace）植物大戟（Euphorbia pekinensis Rupr.）的干燥根,性苦、寒,有毒,始载于《神农本草经》,列为下品。

癌性腹水模型制备方法及在中医药作用机制研究中的应用

目的:探讨癌性腹水模型的制备方法及其在中医药作用机制研究中的应用,以期为中医药治疗癌性腹水的基础研究提供实验参考。方法:检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普网、PubMed中于1985年1月至2017年8月国内外公开发表的有关中医药治疗癌性腹水的文献,最终纳入60篇文献。分别介绍了常用的4种癌性腹水实验动物模型(Walker-256细胞株大鼠腹水模型、H22细胞株小鼠腹水模型、S180细胞株小鼠腹水模型、艾氏腹水瘤小鼠腹水模型)的制备方法和模型特点,并对不同动物模型应用于中药药理活性研究、峻下逐水药的毒效研究、中药复方研究等进行了综述。结果与结论:癌性腹水主要是由于恶性肿瘤渗透物或分泌物侵犯浆膜,引起腹膜腔液异常累积而形成,其治疗困难、预后较差。近年来,中医药用于治疗癌性腹水显示出一定优势,前景良好。而癌性腹水动物模型作为中医药作用机制研究的重要载体,能恰当地模拟癌性腹水形成、发展的病理过程,有助于开展中药治疗方法的相关基础研究。常用的4种癌性腹水实验动物模型制备方法基本相同,多采用腹腔注射癌细胞株,操作简单,成模率高。4种腹水型瘤细胞株各有特点,可根据实验需要进行选择。但由于癌性腹水证候复杂多变,因此尚需探索建立与中医证候相结合的新的癌性腹水动物模型,为中药治疗癌性腹水的机制研究提供更多选择。

京大戟醋制前后对斑马鱼胚胎的急性毒性研究

采用模式生物斑马鱼的胚胎评价京大戟醋制前后各提取物急性毒性,同时以大戟二烯醇为对照品测定了各提取物的总萜含量。选取24 h发育正常的斑马鱼胚胎,每个提取物设8个浓度和一个空白对照组,并观察给药后96 h斑马鱼胚胎的发育和死亡情况,计算不同样品对斑马鱼胚胎的半数致死浓度(LC_(50))。结果显示对于斑马鱼胚胎,京大戟醋制前后各提取物均有急性毒性,与生品相比,醋制后毒性显著降低。不同提取方式中,醇提物毒性大于水提物;不同极性部位中毒性大小依次为石油醚>二氯甲烷>乙酸乙酯>正丁醇、剩余部位。结合萜类成分含量测定结果可推测萜类成分为京大戟主要毒性成分,且其毒性大小与萜类成分的含量呈正相关。表明斑马鱼胚胎模型适用于京大戟毒性评价,为进一步认识与评价京大戟的毒性成分及醋制减毒的作用机制提供合适的研究方法以及理论依据。

京大戟醋制前后对斑马鱼胚胎心脏的毒性

目的:以模式生物斑马鱼胚胎为研究模型,考察京大戟醋制前后不同极性部位对心脏的毒性作用。方法:对受精后12 h发育正常的斑马鱼胚胎分别给予京大戟生品和醋制品的石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位提取物,观察受精后72 h药物对斑马鱼胚胎心脏发育和心脏功能的影响。结果:京大戟醋制前后不同极性部位对斑马鱼胚胎均具有心脏毒性,并呈一定的剂量相关性;其中石油醚部位和二氯甲烷部位的毒性作用较为明显,乙酸乙酯部位的毒性较弱;心脏毒性作用主要表现为心脏发育缓慢、心包水肿、心率降低、心脏细胞出现凋亡现象。与生品相应极性部位相比,相近剂量的京大戟醋制品同一极性部位的心脏毒性都有所下降。结论:京大戟对斑马鱼胚胎具有心脏毒性,醋制后毒性降低,可为进一步阐明京大戟醋制减毒的作用机制研究提供一定的实验依据。

京大戟的化学成分分离及其对斑马鱼胚胎的毒性

目的：对京大戟进行化学成分研究,并采用斑马鱼胚胎对得到的化合物进行毒性评价。方法：京大戟干燥根用95%乙醇50℃温浸提取,将提取物用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部位,采用硅胶柱色谱,中压制备柱色谱,制备液相等色谱技术和方法进行分离纯化,通过理化性质与波谱数据并结合文献对化合物结构进行鉴定。同时采用模式生物斑马鱼的胚胎评价京大戟中各化合物的急性毒性,选取24 h发育正常的斑马鱼胚胎,预试验确定各化合物的96 h全部死亡剂量（96 h-LC100）和96 h无死亡剂量（96 h-LC0）,正式试验每个化合物设8个浓度和一个空白组,并观察给药后96 h斑马鱼胚胎的发育和死亡情况,重复3次,计算不同化合物对斑马鱼胚胎的96 h半数致死浓度（96 h-LC50）。结果：从京大戟乙酸乙酯部位中共分离得到16个化合物,分别鉴定为肉豆蔻酸（1）,甘遂甾醇（2）,大戟二烯醇（3）,十四烷酸丁基酯（4）,阿魏酸二十八酯（5）,β-谷甾醇（6）,豆甾醇（7）,（3β）-stigmast-5-en-3-ylpalmitate（8）,α-菠菜甾醇（9）,球松素（10）,油酸（11）,泪杉醇（12）,亚油酸（13）,pekinenal（14）,neomotiol（15）,（3β）-3-hydroxyanosta-8,24-diene-7,11-dione（16）。结论：其中化合物4,8,10~13,16为首次从该植物中分得,经斑马鱼胚胎毒性评价,毒性化合物为10,12,14,16。

京大戟醋制前后对斑马鱼胚胎肝、胃肠毒性的影响

为研究京大戟醋制前后不同极性部位对斑马鱼胚胎肝、胃肠毒性的影响,实验以95%乙醇提取生、醋京大戟,经石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯依次萃取得不同极性部位。将受精后12 h (12 hpf)的斑马鱼胚胎暴露于不同浓度的溶液中持续至受精96 h (96 hpf),对斑马鱼胚胎的肝、胃肠进行毒性观察。结果显示,毒性随着样品浓度的增加而增强。京大戟醋制前后各极性部位对斑马鱼胚胎的肝、胃肠毒性主要表现为肝脏发育缓慢、肝面积变小、肝脏变性发黑、卵黄囊水肿、吸收延迟、出血、胃肠道蠕动减缓、胃肠道杯状细胞分泌功能异常等,醋制后毒性反应降低。其中石油醚和二氯甲烷部位肝、胃肠毒性作用较为明显,乙酸乙酯部位毒性较弱。以上结果说明,京大戟醋制后毒性降低,且石油醚、二氯甲烷部位是其产生肝、胃肠毒性的主要部位。