聚乙烯降解菌白浅灰链霉菌LBX-2烷烃羟化酶基因SaalkB的克隆与表达分析

白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus)LBX-2能够高效降解聚乙烯(polyethylene,PE),而烷烃羟化酶alkB基因在聚乙烯降解中可能发挥重要作用.以LBX-2基因组为模板,利用PCR技术扩增SaalkB基因,该基因全长1086 bp,编码361个氨基酸.对该基因编码蛋白进行生物信息学分析,发现AlkB蛋白包含5个跨膜结构域,无信号肽,属于亲水性蛋白,二级结构主要由无规则卷曲和α螺旋组成,与链霉菌Stretomyces sp.XY006的AlkB蛋白的同源性达100%.将克隆得到的SaalkB基因连接到表达载体pDE1上进行原核表达,且重组工程菌株能够降解PE.SDS-PAGE结果显示得到与预期蛋白分子量(40.9 kDa)大小一致的蛋白.利用荧光定量PCR发现,白浅灰链霉菌LBX-2在以PE为唯一碳源的培养基中SaalkB基因的表达量约为在高氏一号培养基中的30倍;蛋白质组学数据分析发现,白浅灰链霉菌LBX-2在以PE为唯一碳源培养48 h和84 h时,AlkB蛋白的表达量比在高氏一号培养基中分别上调了2.35和1.57倍,表明SaalkB基因可能是白浅灰链霉菌LBX-2降解聚乙烯的关键基因.

构建未成年刑事被害人法律援助制度

新刑事诉讼法对未成年刑事被告人规定了强制辩护制度,但并未对未成年刑事被害人的法律援助进行规定。构建未成年刑事被害人法律援助制度有助于完善我国刑事法律援助体系,维护司法平等和司法公正。但实践中还存在诸多不足,立法中,应明确规定未成年刑事被害人的法律援助,建立未成年被害人法律援助基金,不断提升援助人员的素质,且将法律援助与社会救济有机结合。

我国“污点证人”刑事责任豁免制度的构建

我国法律尚未规定"污点证人"刑事责任豁免制度,新刑事诉讼法实施后,构建该制度势在必行。这对于应对侦查实践中出现的新问题,规范司法机关的取证手段,消除污点证人的后顾之忧,鼓励其如实作证非常必要。在具体的制度设计中,应当对案件适用范围和适用对象进行限制,确立有限的罪行豁免,构建污点证人证言真实性的审查判断规则,完善审批程序和配套措施。

一株聚乙烯降解菌的筛选及其降解特性研究

为解决聚乙烯塑料在自然环境中难降解的问题,从土壤中分离出一株降解菌用于聚乙烯塑料生物降解研究。经筛选纯化,对该菌进行生理生化实验、16Sr DNA序列分析和系统发育进化树构建;将菌株接种于以不同相对分子质量聚乙烯粉末(相对分子质量分别为2000、5000、100 000)和膜片(相对分子质量>400 000)为唯一碳源的基础液体培养基中,于30℃、180 rpm下培养;采用分光光度法每隔24 h测定菌体生长浓度、总蛋白含量、还原糖含量以及p H值;培养14 d,采用ABTS法和愈创木酚法测定漆酶和锰过氧化物酶酶活力;培养60 d,称量聚乙烯残留物质量,于扫描电子显微镜下观察膜片表观,对膜片力学性能变化进行测定。鉴定结果表明,该菌为放线菌属的东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis);菌生长浓度随聚乙烯相对分子质量的增大而减小;胞外蛋白质量浓度为(27.625±0.400)^(0.958±0.180)μg·m L^(-1);还原糖质量浓度为(15.664±1.764)^(2.660±0.000)μg·m L^(-1);p H值显著下降;漆酶和锰过氧化物酶酶活力酶活力分别为3 500~3 000 U·L^(-1)和2 600~2 000 U·L^(-1);聚乙烯失重率为(35.81%±0.39%)^(5.57%±0.22%);电镜观察发现膜片表面出现大量降解孔洞和大面积菌体附着;膜片力学性能显著下降;亲水性增大,表面能增大。证明东方拟无枝酸菌能够直接作用于普通聚乙烯塑料表面,是一株高效的降解菌株。推测该菌通过分泌胞外酶氧化聚乙烯长烃链,降低聚乙烯表面能,且在降解过程中产生酸性物质,长烃链最终转化成小分子物质;在菌株降解聚乙烯中起直接作用的酶为漆酶和锰过氧化物酶。

论新《公司法》对一人公司的规制及完善

随着修订后的《公司法》对一人公司的承认,关于一人公司制度的探讨也转入了如何完善立法的阶段。通过对公司法修改后的一人公司立法进行分析,总结我国一人公司立法的成与败,为完善我国的一人公司立法提供建议。