真菌病毒Beauveria bassiana chrysovirus 2(BbCV2)外壳蛋白多克隆抗体制备及应用

球孢白僵菌Beauveriabassiana是一种在害虫生物防治中应用广泛的虫生真菌,真菌病毒能够影响球孢白僵菌的致病力和生物学性状,但真菌病毒相关蛋白的抗体制备和利用其进行病毒检测和定位鲜有报道。本研究原核表达了一株普遍流行并且造成寄主球孢白僵菌毒力下降的双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)病毒Beauveria bassiana chrysovirus 2(Bb CV2)的外壳蛋白(Coat protein,CP),并制备了多克隆抗体,进行了病毒在寄主球孢白僵菌胞内和胞外的检测,以及利用间接免疫荧光进行病毒在寄主内的定位。结果表明,表达的BbCV2-CP蛋白主要以包涵体的形式存在,相对分子质量约为85.7kD;经间接ELISA方法测定,制备的BbCV2-CP兔源多抗效价达到1:8192000;Westernblot结果显示,制备的BbCV2兔源多抗能与抗原蛋白进行特异性结合,且能检测出感染寄主球孢白僵菌的BbCV2;ELISA测定结果表明病毒BbCV2可在寄主真菌体内复制,并能够游离到寄主体外;经间接免疫荧光观察,发现BbCV2病毒定位于真菌细胞核中。本研究建立了球孢白僵菌真菌病毒的血清学检测体系,为球孢白僵菌-真菌病毒互作机制研究提供材料。

斜纹夜蛾高致病力生防真菌的筛选与鉴定

本研究从斜纹夜蛾幼虫僵虫中分离并纯化虫生真菌,得到6株昆虫病原真菌,利用形态学和分子生物学方法对上述真菌进行鉴定,采用浸渍法测定6株真菌对斜纹夜蛾2龄幼虫的毒力。结果表明,6株虫生真菌分别为2株球孢白僵菌Beauveria bassiana,以及莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi,木贼镰刀菌Fusarium equiseti,曲霉菌Aspergillus nomiae和糙孢蓝状菌Talaromyces trachyspermus各1株。在1×10^(8)个孢子/m L浓度下,LT50分别为4.737 d,4.543 d,1.343 d,2.086 d,2.212 d和2.351 d,6株虫生真菌对斜纹夜蛾2龄幼虫均表现出较强致病力,其中莱氏绿僵菌表现最好。本研究首次报道了镰刀菌和曲霉菌能够感染斜纹夜蛾,并首次发现糙孢蓝状菌能够感染昆虫。

基于候车时间和效益损失的城轨列车运行计划优化

兼顾乘客和企业的双方利益是编制城轨列车运行计划关注的重点。以两端配有车场的城轨线路为背景,通过考虑列车载客状态及其时间持续对运营效益的影响,提出效益损失概念。针对断面客流不同需求导致效益损失的个体差异,引入体现其差异性的调控因子,以候车时间和效益损失上确界为优化目标,通过考虑列车数量、折返线能力、列车接续及进出场环节等关键约束条件,构建城轨列车运行计划优化模型。因模型求解需要,对模型进行线性化等价重构,并据此设计基于GA(Genetic Algorithm)-Gurobi的混合求解策略。最后,通过算例分析验证了模型及求解策略的合理性,结果分析表明:本文优化得到的列车运行计划节省候车时间约30.1%,减少效益损失约17.9%,节省列车数7.4%,列车运行计划质量得到明显提升。

玉米大斑病胁迫下球孢白僵菌对玉米植株的影响及定殖规律

为明确球孢白僵菌在玉米植株中的定殖能力及其对玉米植株生长和抗病性的影响,本研究采用灌根方式构建球孢白僵菌-玉米共生体,对玉米植株叶绿素、氮含量以及株高进行测定,评价球孢白僵菌对玉米的促生作用;通过人工接种玉米大斑病,探究球孢白僵菌定殖对玉米大斑病菌的抗性作用;采用球孢白僵菌菌落计数和荧光定量PCR等方法研究玉米植株受到玉米大斑病菌胁迫时,球孢白僵菌在玉米植株内的定殖扩散规律。结果表明,球孢白僵菌在玉米植株内的定殖率为68.18%,定殖后能够对植株生长产生积极影响,同时能显著降低玉米大斑病的发病率,接种玉米大斑病第21d发病率降低46.67%。在玉米叶片受到大斑病菌侵染时,能够从根际土壤“招募”球孢白僵菌,使球孢白僵菌在叶片聚集,进而提高对病原微生物的抗性。本研究进一步明确了虫生真菌对植物病害的生防潜力,为虫生真菌在植物组织中定殖研究以及诱导抗性研究提供理论依据。

亚洲玉米螟对球孢白僵菌分生孢子和芽生孢子-玉米共生体的取食选择和嗅觉反应

【目的】球孢白僵菌Beauveria bassiana在植物内定殖,能够间接对植食性昆虫产生不利影响。本研究旨在明确亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis初孵幼虫和3龄幼虫取食选择和嗅觉反应行为对分生孢子(aerial conidia,AC)和芽生孢子(blastospore,BS)类型球孢白僵菌-玉米共生体的响应。【方法】每株玉米接种球孢白僵菌孢子悬液(1.0×10^(8)个孢子/mL)20 mL,采用灌根法构建球孢白僵菌-玉米共生体,包括球孢白僵菌AC处理组和BS处理组。采用培养皿叶碟法测试亚洲玉米螟初孵幼虫和3龄幼虫在取食选择性和非选择性条件下对AC和BS处理组球孢白僵菌-玉米共生体玉米叶片的取食选择率;利用Y型嗅觉仪测试亚洲玉米螟初孵幼虫和3龄幼虫对AC和BS处理组球孢白僵菌-玉米共生体玉米叶片的嗅觉选择系数和嗅觉选择反应率。【结果】培养皿叶碟法测试结果表明,在选择性和非选择性条件下亚洲玉米螟初孵幼虫和3龄幼虫对AC和BS处理组球孢白僵菌-玉米共生体玉米叶片的取食选择率均低于对照组;在选择性条件下,亚洲玉米螟初孵幼虫对BS处理组球孢白僵菌-玉米共生体玉米叶片的取食选择率最低;在非选择性条件下,AC和BS处理组间亚洲玉米螟初孵幼虫对球孢白僵菌-玉米共生体玉米叶片的取食选择率差异不显著。Y型嗅觉仪测试结果表明,亚洲玉米螟初孵幼虫和3龄幼虫对AC和BS处理组球孢白僵菌-玉米共生体玉米叶片的嗅觉选择反应率(嗅觉反应系数<0)均显著低于对照组(嗅觉反应系数>0),显示两种孢子类型球孢白僵菌定殖玉米叶片对亚洲玉米螟幼虫均具有负趋性。【结论】本研究明确了分生孢子和芽生孢子型球孢白僵菌定殖玉米叶片对亚洲玉米螟幼虫取食行为和嗅觉行为均具有驱避性,为利用球孢白僵菌内生定殖生态调控害虫提供理论依据。

螟黄赤眼蜂携带球孢白僵菌防治大豆食心虫

大豆食心虫作为重要害虫在我国大豆主产区造成巨大经济损失。白僵菌和赤眼蜂是大豆食心虫的两种重要生物防治手段,如何将二者相结合实现大豆食心虫的可持续防控还未见报道。本研究从大豆食心虫幼虫僵虫分离、鉴定并筛选到3株高毒力球孢白僵菌菌株,对大豆食心虫老熟幼虫致死中时间(LT50)分别为6.21 d,6.39 d和6.87 d。筛选到对螟黄赤眼蜂羽化和寄生害虫卵无明显影响的球孢白僵菌孢子高吸附性助剂0.1%(w/v)淀粉溶液,实现单头蜂带菌量3.56×10^(4)个孢子。两年田间试验表明,较单一使用螟黄赤眼蜂,螟黄赤眼蜂携带球孢白僵菌对大豆食心虫防治效果分别提高了11.80%和8.31%,分别达到了70.44%和64.75%,从而实现了在不明显增加防治成本的基础上,提高防治效率,实现协同增效。

球孢白僵菌病毒BbCV2的流行及其遗传多样性

球孢白僵菌Beauveria bassian是一种重要的虫生真菌,广泛用于害虫生物防治,毒力退化一直是制约其应用的重要因素。真菌病毒能够影响寄主真菌毒力。为明确一株能够降低寄主毒力的产黄青霉科病毒Beauveria bassiana chrysovirus2(BbCV2)真菌病毒在田间球孢白僵菌种群中流行性规律,本试验收集了来源于吉林省7个不同地点采集的寄主为亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis的球孢白僵菌菌株,通过dsRNA提取和PCR验证BbCV2的感染情况,并进行遗传多样性分析。结果表明,不同采集地的球孢白僵菌均检测到dsRNA病毒感染,尤其是BbCV2在吉林省内分布广泛,菌株带毒率为70%~100%。对BbCV2依赖RNA的RNA聚合酶基因(RdRp)进行遗传多样性分析发现,该病毒不同分离物间RdRp的核苷酸序列和氨基酸序列高度保守,相似度高达99.78%和99.98%,该病毒遗传相对稳定,并且其分布和遗传进化与地理位置无关。由此可见,BbCV2的流行是自然发生的,可能是造成球孢白僵菌田间毒力退化的重要因素,并且球孢白僵菌对该病毒适应性较强,对病毒的遗传选择压力不明显。

悬索桥桥塔大跨度上横梁支架设计及施工技术

文章依托横州大桥工程实例,总结了该工程为解决桥塔上横梁跨度大、方量大、高度大的难题,提出采用大钢管及贝雷梁组合形成大刚度组合支架体系,并通过有限元计算软件进行支架结构验算分析,同时提出从整体把控结构的安全,局部节点采用浇筑混凝土补强的施工方式。该施工技术无须全面补强,且经济合理,具有一定的参考价值。

甜瓜枯萎病病原菌鉴定及高效低毒化学防治农药筛选

以吉林省甜瓜枯萎病重度发生区域采集的发病果实为试材,采用组织分离法对其病原菌进行分离,同时利用形态学和分子生物学鉴定,以及科赫氏法则进行致病性验证;并通过菌丝生长速率法测定了8种生产中常用的化学药剂原药对该致病菌的毒力作用,研究了高效低毒化学农药对甜瓜枯萎病室内防治效果,以期为利用高效低毒化学农药田间防治甜瓜枯萎病提供参考依据。结果表明:拟轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)是吉林省甜瓜枯萎病的一种新的致病菌,供试的8种化学药剂中咪鲜胺对F.verticillioides XT1的抑制作用最好,毒力作用最强,EC50值为0.029 5μg·mL^(-1),其次为戊唑醇和氟硅唑,其EC50值分别为0.146 7μg·mL^(-1)和0.190 1μg·mL^(-1);咪鲜胺、戊唑醇和氟硅唑的最小抑菌药物稀释浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)值分别为0.048、1.2μg·mL^(-1)和0.8μg·mL^(-1);咪鲜胺、戊唑醇和氟硅唑的实际药物稀释最小杀菌浓度(mininal bactericidal concentration, MBC)分别为0.052、1.6μg·mL^(-1)和0.8μg·mL^(-1)。室内防治试验表明,当咪鲜胺浓度为0.144μg·mL^(-1)时,甜瓜枯萎病的防治效果为82.88%。

美国主流媒体冬奥会涉华报道中的中国形象探析——语料库辅助的三维话语分析

自建“美国主流媒体北京冬奥会涉华报道语料库”,运用语料库辅助的三维话语分析法,通过主题词、搭配词、索引行等微观层面考察美国主流媒体冬奥会期间涉华报道中建构的中国国家形象,从宏观层面剖析其建构动因。研究发现,美国主流媒体围绕“冬奥会”“人权”“民主”“外交关系”等话题建构了复杂且负面的中国国家形象。作为美国意识形态的国家机器,媒体对华形象的负面建构背弃了新闻的客观公正,这是受美国国家利益支配的结果。

球孢白僵菌真菌病毒BbPmV-4外壳蛋白多克隆抗体制备及应用

真菌病毒Beauveria bassiana polymycovirus 4(BbPmV-4)的感染能够提高寄主球孢白僵菌的致病力,然而其在寄主中的复制、传播和与寄主互作机理尚不清楚。本研究构建了真菌病毒BbPmV-4外壳蛋白(coat protein,CP)的原核表达载体pET-28a(+)∷BbPmV-4-CP,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),进行蛋白原核表达,免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,并利用间接ELISA,Western blot和免疫荧光等血清学方法进行病毒在寄主胞内定位和胞外复制的检测。结果表明,所表达BbPmV-4-CP为一种可溶性蛋白,相对分子质量约为28.56 kD;所制备的BbPmV-4-CP兔源多克隆抗体效价为1∶256000;Western blot检测验证了所制备抗体能够识别对应抗原蛋白及寄主球孢白僵菌中的病毒BbPmV-4;利用所获取的多抗BbPmV-4-CP对含病毒BbPmV-4的球孢白僵菌培养上清液及沉淀中的病毒含量进行间接ELISA检测,结果显示,培养上清液中存在病毒,表明真菌病毒BbPmV-4可在寄主球孢白僵菌体内复制并游离到寄主体外;免疫荧光检测结果显示该病毒定位于真菌细胞核上。本研究制备了高效价和特异性的真菌病毒多克隆抗体,建立了球孢白僵菌真菌病毒的血清学检测技术体系,为研究真菌病毒在寄主体内的复制及其与寄主真菌的互作机理研究提供实验材料,并且可以利用病毒感染及其互作基因调控寄主毒力,创制高毒力球孢白僵菌菌株。

鸦胆子素D对烟草抗烟草花叶病毒的诱导抗性和保护作用

为明确植物源抗病毒化合物鸦胆子素D(Bruceine D)对烟草抗烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)的诱导抗性及其对TMV感染后的保护作用,本研究分别设置清水处理作为阴性对照,接种TMV作为阳性对照,检测施用Bruceine D对烟草体内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)以及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,并检测了Bruceine D对烟草感染TMV后体内叶绿素、丙二醛(MDA)、可溶性糖和可溶性蛋白含量的影响,以及对烟草POD和PPO同工酶的诱导作用。结果表明,Bruceine D能够系统性地诱导烟草体内POD,PPO,PAL以及SOD活性的提高;能够抑制烟草因感染TMV造成的叶绿素含量的下降以及MDA含量的升高;诱导烟草产生新的POD和PPO的同工酶;阻止TMV造成的烟草体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的降低。Bruceine D能够诱导烟草产生对TMV的抗性并对感染TMV的烟草起到保护作用。

吉林省球孢白僵菌遗传多样性与亚洲玉米螟化性相关性分析

利用ITS序列分析和ISSR分子标记对吉林省玉米主产区的49株寄生亚洲玉米螟的球孢白僵菌进行了遗传多样性分析。ITS序列分析表明,各菌株间的亲缘关系与其地理来源无关。分别根据9个采集地,以及寄主化性类型划分供试菌株类群,利用ISSR分子标记技术进一步分析表明,不同地理类群中榆树地区的遗传多样性最高,双辽地区最低;双辽和通化地区间的遗传分化系数最高,梨树和通化地区间的遗传距离最大。根据寄主化性类型划分类群得出一代玉米螟分离菌株遗传多样性指数最高,一代兼二代区最低;一代兼二代区菌株遗传分化系数最高,而一代区和二代区的遗传距离最大。由此可见,吉林省球孢白僵菌遗传多样性水平较高,种群的异质性较强,遗传多样性同地理位置无关,与寄主化性类型存在相关性。

东北地区马铃薯甲虫监测与入侵风险分析

在利用多种方式进行马铃薯甲虫识别、危害及防控技术宣传,增加东北地区马铃薯产区对马铃薯甲虫的认知程度的基础上,于2009和2010年度,在我国东北吉林省、辽宁省、黑龙江省和内蒙古东部地区设立了马铃薯甲虫监测点32个,调查面积439 hm2,监测面积193万hm2,未发现马铃薯甲虫。根据马铃薯甲虫发生及传播特点,以及在俄罗斯远东地区的发生情况,进一步提出了我国东北地区马铃薯甲虫入侵的风险性及应对策略。

塔里木地块侏罗、白垩纪的古地磁

本文对塔里木地块西北缘库车、拜城一带中新生代剖面进行了古地磁研究。库车与拜城两剖面具有不同方向产状,经产状校正之后,均为同一方向,表明磁性是在第三系褶皱之前获得的。热退磁结果表明500℃之前为现代地磁场方向,解阻温度为675℃,说明磁性载体为赤铁矿。 古地磁结果表明,塔里木地块在晚侏罗—晚白垩世之间没有经历大规模的构造运动。有可能自晚白垩世之后相对西伯利亚地块向北东方向移动过。

烟草花叶病毒运动蛋白的表达及特异性抗体制备

从烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)感染的发病烟草叶片中提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到其运动蛋白基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上.DNA序列分析表明,所得运动蛋白基因全长为807 bp,与已报道的TMV-U1株系核苷酸和氨基酸同源性均为100%.将目的基因亚克隆到原核表达载体pET-29a上,并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导4 h后蛋白表达量达到最大,超声波显示所得融合蛋白以不可溶形式存在.SDS-PAGA检测蛋白表达情况,表达产物与目的蛋白大小一致,割胶免疫注射家兔得到抗体,ELISA测定效价为25600,Western-blot检测证明在烟草叶片被侵染早期MP得到表达,且抗体特异性良好.

结直肠癌中CDX2、p21H-ras、p21WAF1表达的临床意义

背景：CDX2与肠源性肿瘤的发生密切相关，而p21表达减低或缺失可能是结直肠癌发生、发展中的一个普遍事件。目的：探讨结直肠癌中CDX2、p21^H-ras、p21^WAF1表达的相关性和临床病理意义。方法：收集45例临床病理资料完整的结直肠癌手术切除标本，以免疫组化方法检测癌组织和相应癌旁组织中的CDX2、p21^H-ras、p21^WAF1蛋白表达。结果：结直肠癌组织中CDX2、p21^H-ras、p21^WAF1阳性率分别为86．7％、68．9％和35．6％，相应癌旁组织中阳性率分别为100．0％、37．8％和51．1％，CDX2和p21^H-ras在癌组织和癌旁组织中的阳性率差异有统计学意义（P=0．026和P=0．006）；半定量分析结果显示CDX2和p21^WAF1在癌组织和癌旁组织中的表达水平差异有统计学意义（P=0．007和P=0．005）。癌组织中CDX2与p21^WAF1的表达存在相关性（rs=0．501，P=0．000）。DukesA、B期患者癌组织p21^WAF1阳性率显著高于C、D期患者（P=0．016），有淋巴结转移者p21^WAF1阳性率显著低于无淋巴结转移者（P=0．048），CDX2、p21^H-ras的表达与结直肠癌各临床病理特征均无相关性。结论：CDX2、p21^H-ras、p21^WAF1表达改变可能与结直肠癌的发生、发展相关。

继代培养对球孢白僵菌毒素产生水平的影响

继代培养对球孢白僵菌生物学特性、毒力及毒力相关因素等均会产生影响,研究了继代培养对球孢白僵菌毒素产生水平的影响。对野生球孢白僵菌D6-2和L1-1菌株进行室内培养基继代培养,利用高效液相色谱(HPLC)法对其代谢产物中已报道的2种毒素2-氯杀鼠灵酮和间甲基苯甲酸甲酯在不同世代的代谢水平进行了检测。对2株供试球孢白僵菌菌株,收集不同世代在SDAY培养基中培养相同时间后等量的白僵菌培养液,经过有机溶剂提取脂溶性部分,经HPLC定量检测,2个供试菌株各世代培养液中均只有F1代代谢产物中检测出了2-氯杀鼠灵酮,而F2—F5代未检测到,并且供试菌株各世代代谢产物中均未检测到间甲基苯甲酸甲酯;并且发现在继代培养过程中,有未知化合物产生水平未随着世代增加而发生显著变化。不同白僵菌菌株毒素的代谢种类存在差异,并且继代培养会降低某些毒素的代谢水平,也许是继代培养导致供试菌株毒力下降的原因之一;对于其他种类白僵菌毒素在继代培养过程中的代谢水平需进一步研究。

基于超网络理论的应急物流网络优化设计

从应急物流网络在突发性事件下所处环境的复杂性出发,利用超网络理论,建立了基于超网络的应急物流网络模型,实现网络对复杂环境的感知能力和反应能力;在此基础上,考虑应急物资的时效性,构建了以应急物资运输时间最短为目标的多路径数学模型,以确保应急物资的快速运达.最后,通过实例,分别从正常情况下的路径安排和突发情况下的路径调整,验证了所建优化模型及其算法的合理性.

改进熵权-TOPSIS法的铁路事故定级模糊评价

为综合客观地评价铁路事故的严重性,利用模糊数学理论和改进熵权-TOPSIS法对铁路事故定级问题展开研究.通过分析既有铁路事故定级方法中存在的不足,根据铁路事故评价指标的界定形式,设计能够反映评价指标与事故等级间模糊关系的隶属度函数以构建二者之间的隶属度矩阵.通过介绍熵权法的指标赋权过程,分析并指出熵权法存在极化指标重要性的缺陷,进而利用灰靶理论从指标贡献的角度对熵权法做了改进.最后,根据构建的隶属度矩阵和改进熵权法求得的指标权重值,利用基于绝对贴近度的TOPSIS法对铁路事故进行模糊评价.以6个铁路事故案例验证了改进熵权-TOPSIS法及有关理论的合理性,结果分析表明:改进熵权-TOPSIS法比传统熵权-TOPSIS法更能综合客观反映铁路事故的严重性.